绣球花组织培养快繁育苗技术规程陈海霞

PAGE2PAGE1绣球花组织培养快繁育苗技术规程1范围本文件确立了大花绣球（Hydrangeamacrophylla）组织培养快繁育苗技术的组培室条件、培养基制备、外植体选择与处理、无根苗生产、生根与移栽、商品苗生产、废弃物处理与档案管理。本文件适用于XX省大花绣球组织培养快繁育苗。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。DB32/T3785—2020绣球花扦插育苗技术规程DB33/T752—2022植物种苗组培快繁技术规程NY/T花卉种苗组培快繁技术规程3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4组培室条件植物组织培养室应包括准备室、洗涤灭菌室、无菌操作室、培养室、缓冲间和驯化室。组培所需设备有：冰箱、天平、酸度计、高压灭菌锅、超声波清洗器、干燥灭菌器、超净工作台、灭菌接种仪、接种器械、全自动光照培养箱、培养架等。5培养基制备5.1培养基配方5.1.1诱导培养基：MS+1.0mg/L6-BA+0.2mg/LNAA+食用白砂糖30g/L+X脂7g/L，调整pH为5.8。增殖培养基：MS+1.0mg/L6-BA+0.1mg/LNAA+食用白砂糖30g/L+X脂7g/L，调整pH为5.8。5.2培养基母液及培养基配制按照附录A依次取MS母液，培养基的制作按照DB33/T752—2022执行。5.3培养基灭菌及保存5.3.1灭菌培养基封口后放入高压灭菌锅内，121℃灭菌15min-20min。灭菌完成后，待灭菌锅内气压表降至0时取出培养基，检查并拧紧瓶盖。灭菌后的培养基标注好配制日期，置于接种室自然冷却。5.3.2保存灭菌后的培养基，放置3-5d后使用，但是贮存时间不超过10d。5.4培养条件培养温度25℃±1℃，光照强度2500Lx，每天光照时间10h-12h。6外植体选择与消毒6.1外植体选择选择当年生颜色嫩绿、芽体饱满、生长健壮、无病虫害的枝条为外植体。6.2外植体消毒将长约5-10cm的大花绣球枝条去除大叶片，用洗涤剂清洗表面污垢，投入大烧杯内流水冲洗1-2h，再用纱布吸干表面水分，转至超净工作台备用。先用75%酒精浸泡震荡30s，再用3-5％次氯酸钠溶液浸泡15min，然后将茎段置于50%植物组织培养抑菌剂中浸泡15min，最后用无菌水洗3次-5次，取出后用无菌滤纸吸干茎段表面水分。6.3外植体切段将消毒完成的茎段置于无菌的培养皿中，用剪刀将茎段剪成2-3cm长的带节位小段备用。7无根苗生产7.1诱导培养将带节位的小茎段接种至诱导培养基中，每瓶接2个-4个外植体，均匀分布，封好瓶口后，注明代号及日期等，放至培养室培养30d左右。7.2增殖培养将已经诱导培养出来的丛生芽切成单芽，接种到增殖培养基中，每瓶接种2个-4个单芽，培养30d。8瓶外生根及商品苗生产8.1移栽基质采用珍珠岩：蛭石：草炭土=1:1:2体积比的混合基质，首先用50%多菌灵500倍液对栽培基质进行浇灌灭菌消毒，然后用塑料薄膜覆盖24h，放置3-4d后备用。8.2炼苗与移栽组培瓶内无根苗叶片浓绿、生长健壮、叶片数4片及以上且植株高度约为3cm左右时，将组培瓶置于无强烈直射光的炼苗室内炼苗2d，拧开瓶盖再炼苗2d，洗净基部培养基，去除枯叶及黄叶。将洗净后的无根苗置于0.1%高锰酸钾溶液浸泡8-10min，取出后放置在无阳光直射且避风处晾干水分。将消毒完成的无根苗栽入栽培基质中，浇透定根水，再使用50%多菌灵1000倍液喷雾，最后加盖薄膜和遮阳网，湿度控制在80％-90％，温度以20℃-25℃为宜。8.3移栽后管理注意控制环境的温度和湿度，防止杂菌滋生，每隔7d喷施1次50%多菌灵1000倍液；14d后，每7d喷施一次1/2MS培养基溶液。培养40d。8.4商品苗生产移栽40d左右后，无根苗生长健壮，叶色浓绿，植株高度达6-10cm；根系发生整齐，须根数量多且粗壮，即可作为商品种苗进行盆花生产。9废弃物处理繁育实验过程中产生的废弃物应集中收集，定点存放，存放地点必须张贴警告牌或告示，做到专人负责管理。10档案管理建立大花绣球组培快繁繁育苗技术基本情况档案，按照附录B记载大花绣球材料来源、培养基配制、诱导培养、增殖培养、瓶外生根培养和移栽等主要繁育过程技术内容，档案由组培人员填写，档案填写后，及时整理归档。

附录A（资料性）MS培养基成分表表A.1MS培养基成分表名称成分贮备液配制浓度（mg/l）每升培养基取用量（ml）大量元素母液（20倍）KNO33800050NH4NO333000KH2PO43400MgSO4·7H2O7400CaCl2·2H2O8800微量元素母液（200倍）KI1665H3BO31240MnSO4·4H2O4460ZnSO4·7H2O1720Na2MoO4·2H2O50CuSO4·5H2O5CoCl2·6H2O5铁盐母液（200倍）Na2-EDTA74605FeSO4·7H2O5560有机成分母液（200倍）肌醇200005烟酸100盐酸吡哆醇100盐酸硫胺素20甘氨酸400

附录B（资料性）B.1材料来源表序号大花绣球品种名称品种特征及外植体特征描述记载人日期12…B.2培养基制作记录表母液名称大量元