《食品中禁用脂溶性合成色素的测定》

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团体标准

T/GDFDTAECXXXX—XXXX

食品中禁用脂溶性合成色素的测定

Determinationofprohibitedfat-solublesyntheticcolourinfood

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XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施

广东省食品药品评审认证技术协会  发布

T/GDFDTAECXXXX—XXXX

食品中禁用脂溶性合成色素的测定

1范围

本标准规定了食品中禁用脂溶性合成色素（见附录A）的测定液相色谱-串联质谱法。

本标准适用于辣椒粉、调味酱、豆制品、熟肉制品、蛋等食品中32种禁用脂溶性合成色素的测定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T33087仪器分析用高纯水规格及试验方法

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4方法原理

试样经1%乙酸-乙腈提取，C18分散萃取小管净化后，利用液相色谱-串联质谱仪测定，内标法或外

标法定量。

5试剂和材料

除另有说明，本实验使用试剂均为分析纯，水为GB/T6682中规定的一级水或GB/T33087中规定的

高纯水。

甲醇（CH4O）：色谱纯。

乙腈（C2H3N）：色谱纯。

乙酸（CH₃COOH）：质谱纯。

三氯甲烷（CHCl₃）。

十八烷基硅烷键合硅胶（C18材料）：粒径40~60μm。

1%乙酸-乙腈：1mL乙酸用乙腈定容到100mL。

标准品：脂溶性合成色素标准品见附录B，纯度≥95%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准

物质。

标准溶液配制

5.8.1标准储备溶液（1000mg/L）：分别准确称取经折算相当于50mg（精确到0.1mg）的色素标准品，

用合适的溶剂（三氯甲烷、乙腈或甲醇）溶解后，转移至50mL容量瓶中，用甲醇定容到刻度。

5.8.2混合标准储备溶液A组（1mg/L）：根据附录A化合物的浓度分组，准确移取0.10mL的A组色

素标准储备溶液于100mL容量瓶中，用甲醇定容到刻度。

5.8.3混合标准储备溶液B组（10mg/L）：根据附录A化合物的浓度分组，准确移取1.00mL的B组色

素单标储备溶液于100mL容量瓶中，用甲醇定容到刻度。

5.8.4内标储备液（1000mg/L）：分别准确称取经折算相当于50mg（精确到0.1mg）的内标标准品，

置50mL容量瓶中，用合适的溶剂（三氯甲烷、乙腈或甲醇）溶解后，甲醇定容到刻度。

5.8.5混合内标储备液（10mg/L）：分别准确移取1mL的内标储备溶液于100mL容量瓶中，用甲醇定

1

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容到刻度。

5.8.6混合标准中间液A组（0.1mg/L）：准确吸取1.00mL的混合标准储备溶液A组于10mL容量瓶

中，用甲醇定容到刻度。

5.8.7混合标准中间液B组（1.0mg/L）：准确吸取1.00mL的混合标准储备溶液B组于10mL容量瓶

中，用甲醇定容到刻度。

5.8.8混合内标中间液（0.01mg/L）：准确吸取一定量的混合内标储备溶液，用甲醇稀释、定容至刻

度。

5.8.9混合标准工作液：根据需要，用甲醇将混合标准中间液和混合内标中间稀释成所需的标准工作

溶液。

6仪器和设备

液相色谱-串联质谱联用仪（LC-MS/MS）：配有电喷雾电离源（ESI）。

分析天平：感量为0.1mg、0.01mg。

离心机：转速不低于8000r/min。

超声波清洗器。

匀浆机。

食物粉碎机。

7分析步骤

试样制备

豆制品、熟肉制品用食物粉碎机搅碎混匀；蛋煮熟后取蛋黄用食物粉碎机搅碎混匀。

试样提取

称取2.00g（准确至0.01g）试样于50mL离心管中，加入混合内标储备液0.05mL，加入10mL的1%乙酸

-乙腈，超声5min，在8000r/min下离心5min，重复提取一遍，合并上清液。取1mL上清液，用甲醇定容

至5mL。准确移取2.00mL提取液至含有50mgC18材料的净化管中，涡旋1min，在8000r/min下离心5min，

上清液过0.22μm膜，待测。每个样品做2个平行测试，同时做空白测试。

仪器参考条件

7.3.1液相色谱参考条件

a)色谱柱：C18柱，100mm×2.1mm，1.7μm，或同等性能的色谱柱；

b)流动相：A为0.1%乙酸水，B为0.1%乙酸-甲醇；梯度洗脱条件见表1；

c)柱温：40℃；

d)进样量：2μL；

e)流速：0.3mL/min。

表1液相色谱梯度洗脱条件

时间（min）流动相A（%）流动相B（%）

0.008020

0.508020

5.002085

6.00595

10.00595

10.108020

15.008020

7.3.2质谱参考条件

2

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a)离子源类型：电喷雾电离源（ESI）；

b)扫描方式：正离子电离模式；

c)电喷雾电压：2.5kV；

d)离子源温度：150℃；

e)脱溶剂气温度：500℃

f)脱溶剂气流速：1000L/h；

g)锥孔气流速：150L/h；

h)定性离子对、定量离子对、去簇电压和碰撞能量参见附录A。

测定法

7.4.1定性测定

在同样测试条件下，试样溶液中脂溶性合成色素的保留时间与标准溶液相应峰的保留时间相对偏差

在±25%以内，且检测到的相对离子丰度，应当与浓度相当的标准溶液相对丰度一致。其允许偏差应符

合表2的要求。

表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差

相对离子丰度/%＞5020～5010～20≤10

允许相对偏差/%±20±25±30±50

7.4.2定量测定

取试样溶液和相应的标准溶液，作单点或多点校准，以目标化合物特征离子质量色谱峰面积外标法

定量，或以目标化合物与内标物特征离子峰面积比值内标法定量。标准工作液及试样溶液中的脂溶性合

成色素响应值均应在仪器检测的线性范围内。在上述色谱-质谱条件下，标准溶液特征离子质量色谱图

见附录B。

注：苏丹红I、苏丹红II、苏丹红III、苏丹红IV以内标法定量，其余化合物以外标法定量。

空白试验

取空白试样，除不加标准溶液外，采用相同的测定步骤进行平行操作。

8结果计算和表述

外标法

试样中各色素含量按式（1）计算：

·····················································(1)

����

式中：�=�×��×1000

X—样品中相应的色素含量的数值，单位为毫克每千克（mg/kg）；

CS—标准溶液中相应色素浓度的数值，单位为纳克每毫升（ng/mL）；

A—样品溶液中相应的色素峰面积；

AS—标准溶液中相应的色素峰面积；

V—样品定容体积，单位为毫升（mL）；

m—样品质量的数值，单位为克（g）。

计算结果保留位有效数字。

2

内标法

试样中各色素含量按式（2）计算：

3

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·····················································(1)

����

式中：�=�×��×1000

X—样品中相应的色素含量的数值，单位为毫克每千克（mg/kg）；

CS—标准溶液中相应色素浓度的数值，单位为纳克每毫升（ng/mL）；

R—样品溶液中相应的色素与内标物峰面积比值；

RS—标准溶液中相应的色素与内标物峰面积比值；

V—样品定容体积，单位为毫升（mL）；

m—样品质量的数值，单位为克（g）。

计算结果保留位有效数字。

2

9精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%。

10其他

本方法禁用脂溶性合成色素的检出限为0.05mg/kg（A组化合物）、0.50mg/kg（B组化合物）。

4

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A

A

附录A

（资料性）

禁用脂溶性合成色素的定量离子、定性离子、去簇电压、碰撞电压和保留时间

禁用脂溶性合成色素的定量离子、定性离子、去簇电压、碰撞电压和保留时间，见表A.1。

表A.1禁用脂溶性合成色素的定量离子、定性离子、去簇电压、碰撞电压和保留时间

标准溶定量离子定性离子

序母离子定量离子定性离子去簇电保留时间检出限

中文名称英文名称液浓度碰撞电压碰撞电压

号(m/z)(m/z)(m/z)压(V)(min)(mg/kg)

分组(V)(V)

1碱性红5BasicRed5B组253.3237.7209.23035353.800.50

2碱性红9BasicRed9A组288.1195.2151.23033533.320.05

3碱性蓝1BasicBlue1A组363.4347.3311.13036434.680.05

4碱性紫2BasicViolet2A组330.4223.1208.13031414.200.05

5碱性橙21BasicOrange21A组315.3300.2285.23023304.350.05

6碱性橙22BasicOrange22A组391.3376.2361.43028364.880.05

7碱性嫩黄OAuramineOA组268.2147.2122.23028254.240.05

8碱性绿1BasicGreen1A组385.4341.2297.33036485.360.05

9碱性蓝7BasicBlue7A组478.3434.5390.43046605.910.05

10硫黄素TThioflavineTB组283.1267.1252.13027433.740.50

11碱性紫4EthylViolet4A组456.4412.6368.33032605.970.05

12罗丹明6GRhodamine6GA组443.2415.3341.33033455.110.05

13罗丹明BRhodamineBA组443.3399.2355.03041565.270.05

14碱性绿4BasicGreen4A组329.3313.3208.23036364.680.05

15结晶紫CrystalvioletA组372.3356.2340.33038505.130.05

16碱性蓝41BasicBlue41A组371.1164.1133.13019354.220.05

17碱性红46BasicRed46A组321.2224.1196.03011163.980.05

18碱性黄51BasicYellow51A组292.2160.1106.13020254.200.05

19碱性黄24BasicYellow24A组322.4160.1136.13020254.350.05

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标准溶定量离子定性离子

序母离子定量离子定性离子去簇电保留时间检出限

中文名称英文名称液浓度碰撞电压碰撞电压

号(m/z)(m/z)(m/z)压(V)(min)(mg/kg)

分组(V)(V)

20苏丹橙GSudanorangeGA组215.1122.193.13015256.200.05

21苏丹黄SudanyellowA组226.077.1121.13022206.780.05

22对位红PararedA组294.1156.0128.03018286.990.05

Disperseorange

23分散橙11A组238.177.1165.13057326.130.05

11

24苏丹红ISudanredIA组249.3156.293.13015237.310.05

25苏丹红IISudanredIIA组277.2121.1155.93018168.200.05

26苏丹红IIISudanredIIIA组353.1196.1156.23024238.910.05

27苏丹红IVSudanredIVA组381.190.9224.230392110.910.05

28二乙基黄DiethylyellowA组254.3134.277.03025257.080.05

29分散红9DisperseRed9A组238.3223.3220.33025196.620.05

DisperseBlue

30分散蓝124A组378.3220.386.93018326.440.05

124

31分散红11Dispersered11A组269.2254.2226.13025325.180.05

32溶剂红169SolventRed169A组266.3224.0167.23017417.090.05

内

苏丹红组——

标I-d5SudanI-d5A254.2156.198.13015237.30

内

苏丹红组——

标II-d6SudanII-d6A283.2121.2162.13018158.15

内

苏丹红组——

标III-d6SudanIII-d6A359.377.1196.03042258.85

内

苏丹红组——

标IV-d6SudanIV-d6A387.291.1224.130352410.86

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B

B

附录B

（资料性）

禁用脂溶性合成色素的英文中文名称对照索引

禁用脂溶性合成色素的中英文名称对照索引（按英文字母顺序），见表B.1。

表B.1禁用脂溶性合成色素的中英文名称对照索引（按英文字母顺序）

附录中的序

序号A中文名称英文名称号分子式

号CAS

17碱性嫩黄OAuramineO2465-27-2C17H22ClN3

23碱性蓝1BasicBlue13521-06-0C23H24Cl2N2

316碱性蓝41BasicBlue4112270-13-2C20H26N4O6S2

49碱性蓝7BasicBlue72390-60-5C33H40N3Cl

58碱性绿1BasicGreen1633-03-4C27H34N2O4S

614碱性绿4BasicGreen42437-29-8C52H54N4O12

75碱性橙21BasicOrange213056-93-7C22H23ClN2

86碱性橙22BasicOrange224657-00-5C28H27ClN2

917碱性红46BasicRed4612221-69-1C18H23BrN6

101碱性红5BasicRed5553-24-2C15H17ClN4

112碱性红9BasicRed9569-61-9C19H17N3.HCl

124碱性紫2BasicViolet23248-91-7C22H24ClN3

1319碱性黄24BasicYellow2452435-14-0C19H21N5O4S2

1418碱性黄51BasicYellow5183949-75-1C20H25N3O4S

1515结晶紫Crystalviolet548-62-9C25H30ClN3

1628二乙基黄Diethylyellow2481-94-9C16H19N3

1730分散蓝124DisperseBlue12461951-51-7C16H19N5O4S

1823分散橙11Disperseorange1182-28-0C15H11NO2

1931分散红11Dispersered112872-48-2C15H12N2O3

2029分散红9DisperseRed982-38-2C15H11NO2

7

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附录中的序

序号A中文名称英文名称号分子式

号CAS

2111碱性紫4EthylViolet42390-59-2C31H42ClN3

2222对位红Parared6410-10-2C16H11N3O3

2312罗丹明6GRhodamine6G989-38-8C28H31ClN2O3

2413罗丹明BRhodamineB81-88-9C28H31ClN2O3

2532溶剂红169SolventRed16927354-18-3C17H15NO2

2620苏丹橙GSudanorangeG2051-85-6C12H10N2O2

2724苏丹红ISudanredI842-07-9C16H12N2O

2825苏丹红IISudanredII3118-97-6C18H16N2O

2926苏丹红IIISudanredIII85-86-9C22H16N4O

3027苏丹红IVSudanredIV85-83-6C24H20N4O

3121苏丹黄Sudanyellow60-11-7C14H15N3

3210硫黄素TThioflavineT2390-54-7C17H19ClN2S

34内标苏丹红I-d5SudanI-d5752211-63-5C16H7N2OD5

35内标苏丹红II-d6SudanII-d61014689-15-6C18H10D6N2O

36内标苏丹红III-d6SudanIII-d61014689-17-8C22H10D6N4O

37内标苏丹红IV-d6SudanIV-d61014689-18-9C24H14D6N4O

8

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C

C

附录C

（资料性）

禁用脂溶性合成色素定量离子提取流图

禁用脂溶性合成色素定量离子提取流图（A组：10ng/mL；B组：100ng/mL），见图C.1。

std10ppb

20211112-327:MRMof28ChannelsES+

3.80

100253.3>237.7(B001)

5.09e6

%

0Time

-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00

1.碱性红5

std10ppb

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3.32

100288.1>195.2(B002)

7.07e6

%

0Time

2.004.006.008.0010.0012.0014.00

2.碱性红9

std10ppb

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4.68

100363.4>347.3(B007)

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%

0Time

-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00

3.碱性蓝1

std10ppb

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4.20

100330.4>223.1(B013)

4.18e6

%

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-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00

4.碱性紫2

9

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5.89e6

%

0Time

-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00

5.碱性橙21

std10ppb

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6.碱性橙22

std10ppb

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100268.2>147.2(B019)

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7.碱性嫩黄O

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8.碱性绿1

10

T/GDFDTAECXXXX—XXXX

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-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00

9.碱性蓝7

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-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00

10.硫黄素T

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-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00

11.碱性紫4

std10ppb

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0Time

2.004.006.008.0010.0012.0014.00

12.罗丹明6G

11

T/GDFDTAECXXXX—XXXX

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100443.3>399.2(B025)

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2.004.006.008.0010.0012.0014.00

13.罗丹明B

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4.68

100329.3>313.3(B026)

4.47e6

%

0Time

-0.002.004.006.008.0010.0012.0014.00

14.碱性绿4

std10ppb

20211112-321:MRMof32ChannelsES+

5.13

100372.3>356.2(B027)

2.06e7

%

0Time

2.004.00