DB45T-奶水牛活体采卵操作技术规程编制说明

广西地方标准《奶水牛活体采卵操作技术规程》（征求意见稿）编制说明一、任务来源、起草单位、主要起草人根据《广西壮族自治区市场监督管理局关于下达2023年广西地方标准制修订项目计划的通知》（桂市监函（2023）2257号)文件精神，由广西壮族自治区农业农村厅提出，广西壮族自治区水牛研究所、广西皇氏赛尔生物技术有限公司共同起草的广西地方标准《奶水牛活体采卵操作技术规程》（项目编号：2023-1205）已获批立项。为高质量编制广西地方标准《奶水牛活体采卵操作技术规程》，由起草单位成立标准编制工作组并进行如下分工：姓名职称/职位工作单位主要负责工作覃广胜研究员广西水牛研究所统筹标准编制工作，组织人员进行标准发布后的宣贯培训。负责起草标准草案、征求意见稿和标准编制说明、送审稿及编制说明的编写工作及征求意见会、网上征求意见的汇总修改。黄荣春畜牧师广西水牛研究所负责起草标准草案、征求意见稿和标准编制说明、送审稿及编制说明的编写工作及征求意见会、网上征求意见的汇总修改。谭正准畜牧师广西水牛研究所负责起草标准草案、征求意见稿和标准编制说明、送审稿及编制说明的编写工作及征求意见会、网上征求意见的汇总修改。黄健畜高级畜牧师广西水牛研究所负责起草标准草案、征求意见稿和标准编制说明、送审稿及编制说明的编写工作及征求意见会、网上征求意见的汇总修改。李辉畜牧师广西水牛研究所负责起草标准草案、征求意见稿和标准编制说明、送审稿及编制说明的编写工作及征求意见会、网上征求意见的汇总修改。韦亮源技术主管皇氏赛尔生物科技（广西）有限公司负责起草标准草案、征求意见稿和标准编制说明、送审稿及编制说明的编写工作及征求意见会、网上征求意见的汇总修改。陈明棠正高级畜牧师广西水牛研究所负责起草标准草案、征求意见稿和标准编制说明、送审稿及编制说明的编写工作及征求意见会、网上征求意见的汇总修改。黄加祥正高级畜牧师广西水牛研究所负责起草标准草案、征求意见稿和标准编制说明、送审稿及编制说明的编写工作及征求意见会、网上征求意见的汇总修改。钟华配畜牧师广西水牛研究所负责起草标准草案、征求意见稿和标准编制说明、送审稿及编制说明的编写工作及征求意见会、网上征求意见的汇总修改。李兆和技术主管皇氏赛尔生物科技（广西）有限公司负责文献资料的查询、收集和整理工作，参与区内调查，协助项目实施。杨春艳正高级畜牧师广西水牛研究所对标准实施情况进行总结分析，不断对地方标准提出修正意见。郑海英高级畜牧师广西水牛研究所对标准实施情况进行总结分析，不断对地方标准提出修正意见。尚江华研究员广西水牛研究所对标准实施情况进行总结分析，不断对地方标准提出修正意见。二、制定标准的必要性和意义广西奶水牛存栏量及水牛奶产量均居全国第一，并拥有全国最大的良种水牛繁育基地、全国最大的水牛冷冻精液中心、农业部水牛遗传繁殖技术重点实验室。目前广西和广东存栏杂交水牛超过36.51万头，2019年广西和广东奶水牛相关产业产值近50亿元，带动约20万农民养殖户脱贫。2021年，广西水牛奶产量占全国80%，相关产业产值接近100亿元。奶水牛已成为广西特色鲜明、潜力巨大的优势产业。水牛奶产业上端连接农村农民，下端连接市场和消费者，中间是科技和加工企业，全产业链涵盖了一二三产业，对促进乡村振兴和一二三产融合发展有着非常重大的意义。尽管通过杂交改良我国水牛泌乳性状已经有了一定程度的提升，但是还没有形成可持续发展的种群规模，且在繁衍过程中泌乳性状不断退化，未从根本上扭转我国奶水牛种业自主创新能力弱、整体竞争力不强的局面。现阶段最突出问题是奶水牛良种种源匮乏，单产量低、种群数量少，杂交良种繁育周期长，奶源供应严重不足。目前国内纯种河流型乳用水牛不足1000头，主要饲养在广西水牛研究所，经过几十年的杂交改良，累计出生的杂交水牛超过100万头，但主要作为肉用，可用于挤奶的杂交水牛数量相对较少，现有4.3万头挤奶水牛，集中分布在广西、广东、云南、福建、浙江等省区，绝大多数为杂交母牛，平均单产1000～1400千克，由于高产奶牛群体较少，高产群体数量的产奶量与国际水平2.1吨相比差距显著，水牛作为奶畜资源未能得到充分挖掘。种源生产和供应能力跟不上产业发展需要，品种改良能力已达到极限，国内年产河流型乳用种公牛约100头，年产冻精60万支，全部以冻精改良计，仅能配种母牛28.5万头，而广西的水牛能繁母牛有180多万头，若全部以冻精改良计，年需冻精近360万支，需有采精种公牛700头，种公牛数量缺口之大显而易见。如果推广国外以本交为主的经验，则缺口更大，根本无法满足实际需要。因此，采用胚胎生物技术挖掘良种奶水牛种质资源，以本地水牛作为受体牛进行胚胎移植，缩短良种繁育周期，扩大繁育培育优质种群，助推产业升级已迫在眉睫。随着奶水牛胚胎生物技术与胚胎移植技术的不断发展，对遗传基因明确的胚胎和卵母细胞需求量不断增大，虽然可通过超数排卵技术获得比自然发情状态下更多的胚胎，但由于水牛超排效果不稳定，效率低，不能预知供体对超排的反应，至今仍无法完全掌握其规律；而取自屠宰后牛卵巢的卵母细胞，虽经济方便，但往往存在对供体母牛种用价值不了解和不能重复利用等缺点。因此，如何获取数量较多遗传背景清楚的卵母细胞已成为胚胎生产走向产业化推广应用的关键。而活体采卵是继体外受精、胚胎移植之后的又一项胚胎工程技术，它与体外受精、胚胎移植等配套综合利用，不仅可反复从良种动物体内采集卵母细胞生产胚胎，提高母畜繁殖效能、缩短世代间隔，加速动物育种进程，而且具有胚胎生产成本低、效率高，对供体母畜的生产和繁殖性能无不良影响等特点，因而越来越受到人们的重视，成为今后良种胚胎生产的主要方向。随着畜牧业的发展和胚胎生物工程技术研究的深入，为活体采卵技术提供了广阔的市场和美好的前景，它和体外受精-胚胎移植结合已经成为欧美和大洋洲等畜牧业发达国家扩大良种牛群的重要繁殖技术，已经用于商业化生产，国内诸多乳企也争相引进活体采卵和体外受精-胚胎移植技术，以加速良种牛的繁育速度，优化牛群结构。但活体采卵操作技术含量高，远比人工授精复杂，对技术人员的专业操作技术要求高，目前我国专门从事活体采卵的人员非常匮乏，尤其是专家型、技能型活体采卵人才更加短缺，而且目前国家标准、行业标准和地方标准上尚缺乏与活体采卵相关的标准操作规程，这些都极大地限制了活体采卵技术的推广。通过制定广西地方标准《奶水牛活体采卵操作技术规程》，以标准为抓手，统一规定采卵前准备、采卵操作、采卵后工作、采集卵母细胞资料记录等技术要求，对提高广西奶水牛活体采卵操作技术水平，填补奶水牛活体采卵相关技术标准的空白，推动广西水牛产业高质量发展，助力乡村振兴具有重要意义。三、主要起草过程（一）成立标准编制工作组广西地方标准《奶水牛活体采卵操作技术规程》项目任务下达后，广西壮族自治区农业农村厅成立了标准编制工作组，起草单位制定了起草编写方案与进度安排，明确任务职责，确定工作技术路线，开展标准研制工作。具体标准编制工作由广西壮族自治区水牛研究所、广西皇氏赛尔生物技术有限公司组成标准编制工作组完成。编制工作组下设二个组分别是资料收集组、草案编写组资料收集组负责国内外有关奶水牛活体采卵操作技术的文献资料的查询、收集和整理工作，查阅前人对奶水牛活体采卵操作技术的有关研究情况和目前科学界奶水牛活体采卵操作技术的研究进展。草案编写组负责起草标准草案及后续征求意见稿和标准编制说明、送审稿及编制说明等编写工作，包括后期召开征求意见会、网上征求意见，以及标准的不断修改和完善。（二）收集整理文献资料标准编制工作组收集了国内奶水牛、活体采卵相关文献资料。主要有：DB53/T344.2-2011《奶水牛养殖第2部分:繁殖技术》DB45/T2313-2021《奶水牛同期发情一人工授精操作技术规程》DB53/T344.4-2011《奶水牛养殖第4部分:养殖技术》DB45/T916-2013《水牛胚胎体外生产技术操作规程》（三）研讨确定标准主体内容标准编制工作组在对收集的资料进行整理研究之后，标准编制工作组召开了标准编制会议，对标准的整体框架结构进行了研究，并对标准的关键性内容进行了初步探讨。经过研究，标准的主体内容确定为术语和定义、供体牛的选择和饲养管理、采卵频率、采卵前准备、采卵操作、采卵后工作和采集卵母细胞资料记录。（四）调研、形成草案、征求意见稿2023年6月～8月，标准起草工作小组进行了广泛实地调研工作，查阅了大量的国内外文献资料，对奶水牛活体采卵操作技术的前人研究成果进行系统总结。调研的同时召集广西壮族自治区水牛研究所、广西皇氏赛尔生物技术有限公司等单位开展了标准研讨会，对奶水牛活体采卵操作技术的有关研究情况和目前科学界奶水牛活体采卵操作技术进行系统总结。形成了标准的基本构架，对主要内容进行了讨论并对项目的工作进行了部署和安排。2023年9月～10月，在前期工作的基础之上，通过理清逻辑脉络，整合已有的参考资料中有关奶水牛活体采卵操作技术的部分，在广西区内相关单位、企业等进行广泛实地调研及查阅资料的基础上，按照简化、统一等原则编制完成广西地方标准《奶水牛活体采卵操作技术规程》（草案），并提出申请立项。2023年8月22日，根据《广西壮族自治区市场监督管理局关于下达2023年广西地方标准制修定项目计划的通知》广西地方标准《奶水牛活体采卵操作技术规程》获批立项。2023年11月～12月，标准起草工作组再次深入广西区内各相关单位、企业进行实地调研。通过实地调研，掌握各相关单位关于奶水牛活体采卵的具体技术要求。以草案为基础，提炼核心技术细节，在广西内广泛开展技术对比和总结，并实际征求意见，通过收集反馈了大量意见，标准编制工作组多次召开会议，对标准草案进行了反复修改和研究讨论。进一步讨论完善标准草案，形成广西地方标准《奶水牛活体采卵操作技术规程》（征求意见稿）和（征求意见稿）编制说明。四、制定标准的原则和依据，与现行法律、法规的关系，与有关国家标准、行业标准的协调情况（一）编制原则1、实用性原则本文件是在充分收集当前国内、外最新的研究资料，结合起草单位多年积攒的实践经验和实验数据的基础上而总结起草的，针对奶水牛活体采卵技术规定明确的、详细的操作内容和步骤，对生产上活体采卵操作人员起到很好的标杆和指导作用，有利于培养更多的高素质活体采卵技能型人才，具有较强的实用性和可操作性。2、协调性原则本文件编写过程中注意了与奶水牛活体采卵操作技术相关法律法规的协调问题，在内容上与现行法律法规、标准协调一致。3、规范性原则本文件严格按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》编写本标准的内容，保证标准的编写质量。4、前瞻性原则本文件在兼顾当前广西奶水牛活体采卵操作技术现实情况的同时，还考虑到了研究机构奶水牛活体采卵操作技术需求快速发展的趋势和产业结构调整需要，在标准中体现了个别特色性、前瞻性和先进性条款，作为对奶水牛活体采卵操作技术发展的指导。（二）编制依据本标准严格按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规则起草，标准主要内容参考相关标准文件并结合起草单位多年的实践经验和实验数据总结进行起草。（三）与现行法律、法规的关系，与有关国家标准、行业标准的协调情况本编制工作组承诺本标准内容与各项指标不违反相关法律法规要求，且不低于国家强制性标准。推荐性国家标准和行业标准要求。经调查，目前与“”相关或相似且已批准发布实施的国家、行业、地方标准有：（1）《DB53/T344.2—2011奶水牛养殖第2部分:繁殖技术》规定了水牛繁殖技术规范，包括种公牛的选择、细管冷冻精液制作、水牛人工授精技术、母牛发情鉴定以及母牛的妊娠诊断、分娩等技术要求。适用于奶水牛养殖。（2）《DB45/T2313-2021奶水牛同期发情一人工授精操作技》规定了奶水牛同期发情－人工授精技术的器械物资、母水牛选择、药品、时间、处理方案、发情鉴定、输精、孕检等要求。适用于广西行政区域内奶水牛的同期发情－人工授精操作。（3）《DB45/T916-2013奶水牛养殖第4部分:养殖技术》规定了奶水牛的犊牛、后备牛培育和能繁母牛、种公牛的饲养管理等基本技术要求。适用于奶水牛养殖。（4）《DB53/T344.4-2011水牛胚胎体外生产技术操作规程》规定了水牛胚胎体外生产的术语与定义、水牛卵母细胞采集、卵母细胞的体外成熟、精子的体外获能和精卵体外受精、受精后早期胚胎的体外培养和胚胎的形态学鉴定与分级等技术规程。适用于水牛体外胚胎生产技术的规范化操作。从以上分析可见，目前暂无与“奶水牛活体采卵操作技术规程”相关或相似的国家、行业、地方标准。主要条款的说明广西地方标准《奶水牛活体采卵操作技术规程》主要内容包括术语和定义、供体牛的选择和饲养管理、采卵频率、采卵前准备、采卵操作、采卵后工作和采集卵母细胞资料记录。（一）术语和定义活体采卵的术语和定义是根据活体采卵技术的特点及作用进行确定，活体采卵是卵母细胞的活体采集技术（简称活体采卵）是借助超声波或内窥镜观察，直接从活体母牛卵巢上抽取卵母细胞的技术，通过体外受精技术进行体外成熟培养，可生产大量系谱明确的胚胎。供体牛的术语和定义是根据供体牛的特点进行定义。（二）供体牛的选择和饲养项目起草单位在水牛活体采卵和胚胎生物技术方面积累了丰富的经验，开展了影响水牛活体采卵效果的因素研究，并且建立了一套稳定高效的奶水牛活体采卵技术方法和体系。供体牛的选择在供体牛的选择上，起草单位在供体牛的年龄及个体、季节和品种对活体采卵效果的影响方面开展了相关研究：（1）年龄及个体对活体采卵效果的影响由长期的活体采卵实验结果可知，各年龄段的母牛均可用作活体采卵的供体。青年母牛(13～15月龄)甚至性成熟前的犊牛(6～9月龄)均可作为活体采卵的供体，而且不会影响这些牛卵巢的功能和以后的妊娠率；但水牛的性成熟较晚，育成母牛卵巢也普遍较小，因此业内较少开展育成母水牛的活体采卵。目前，有通过激索处理对水牛幼畜进行活体采卵的研究，广西水牛研究所黄右军等将42头河流型奶水牛按年龄分为A组(3～7岁)、B组(8～12岁)和C组(13～17岁)进行活体采卵，每周采集2次，结果表明，A组获得的可用卵母细胞为(4.35±3.14)枚，明显高于B组（2.47±2.58）枚、C组(2.36±2.24)枚，由此可见3～7岁母水牛较适宜用于活体采卵，不同个体差异也非常明显。（2）季节对活体采卵效果的影响水牛的发情具有较强的季节性，这一特性也影响了水牛的活体采卵效果。庞春英等统计了2006～2008年活体采卵数据，春季活体采卵每头牛平均回收卵子数为(4.80±1.77）枚，可用卵子(2.77±1.19)枚；夏季每头牛平均回收卵子数为(3.72±1.58)枚，可用卵子(2.11±1.11)枚；秋、冬季每头牛平均回收卵子数为(5.88±2.84)枚，可用卵子(3.56±1.51)枚，表明水牛活体采卵效果受季节影响较大，秋、冬季节活体采卵效果最好，春季次之，夏季最差。原因可能是在发情旺季时水牛卵巢上有较多的卵泡发育，可采集的卵泡数较多，每头牛平均回收卵子数随之增加，但各个季节的卵母细胞可用率差异不显著(P>0.05)。（3）品种对活体采卵效果的影响梁贤威等通过进行不同品种水牛活体采卵和体外受精效果比较得知：摩拉、尼里-拉菲水牛每头次可采卵泡数、头均回收卵母细胞数、头均可用卵母细胞和回收率均差异不显著(P>0.05)，活体采集的摩拉水牛和尼里-拉菲水牛卵母细胞体外受精后囊胚率分别为21.25%和18.92%，差异也不显著(P>0.05)。结果见表1、2：表1不同品种水牛活体采卵效果品种采卵头次穿刺卵泡数回收卵数可用数卵母细胞回收率%）摩拉607.82±0.415.51±0.413.96±0.2470.02尼里-拉菲607.60±0.525.20±0.303.63±0.3167.41表2不同品种水牛活体采集卵母细胞体外受精效果品种卵数分裂分裂率（%）囊胚囊胚率（%）摩拉24013757.085121.25尼里-拉菲22212054.054218.92综上，根据起草单位的具体实验探究并结合起草单位多年的经验进行拟定，宜选择年龄在2.5～10岁之间、品种优良、生产性能好、遗传稳定、谱系清楚，且生殖器官发育正常，尤其是卵巢饱满富有弹性，周长半径约2cm以上，卵巢韧带够长，无阴道炎、子宫内膜炎、卵巢囊肿等疾病，体质健壮、繁殖机能正常，无遗传和传染性疾病的供体牛。供体牛的饲养供体水牛饲养在相对固定栏舍内，密度适中，环境卫生好；活体采卵前5周，加强饲养管理，在饲料中添加多维（包括维生素A、D、E）和微量元素，剂量参见产品说明；饮水清洁卫生；采卵前2周，避免疫苗注射和转群应激。（三）采卵频率由活体采卵的操作机理可知，只要采卵针能经母牛阴道穹窿顶部穿刺到卵巢(卵泡)即可开展活体采卵，因此无论性周期是哪一天还是乏情的母水牛，即使处于产奶、干奶、怀孕的母水牛均可用于活体采卵，唯有需要考虑的是活体采卵效率或者供体牛的遗传价值。一般处于乏情期的母水牛卵巢上可采卵泡数较少，卵巢质地偏硬，育成母牛卵巢普遍较小，不宜对两者进行活体采卵。而在性周期方面，虽然在性周期的不同时间可采卵泡数有所不同；但经第1次采卵后，各卵巢上的可采卵泡已基本采出，卵泡期趋于一致，后续的采出效率基本相同，因此对于长期批量活体采卵无需刻意选择性周期的哪一天进行活体采卵，需要考虑的是活体采卵间隔。因此，起草单位开展了活体采卵间隔及持续时间对活体采卵效果的影响研究：表3采卵批次对活体采卵卵母细胞质量的影响批次采卵头次卵母细胞优质卵母细胞百分率/%卵母细胞回收率/%ABCD19214.29±2.2941.35±2.2239.76±2.67a2.41±0.8255.64±2.98b65.91±2.91a29213.60±2.4350.45±3.8324.65±3.02b1.36±0.5564.05±3.63b48.16±3.08b39214.76±2.6155.52±3.9521.17±3.20b0.94±0.5070.28±3.82a43.54±2.73b49216.93±2.8452.37±3.9923.42±2.93b0.57±0.3969.30±3.45a50.77±3.03b59215.04±2.6352.61±3.8516.51±2.53b0.74±0.4667.65±3.85a47.31±3.27b平均14.40±1.1451.07±1.8325.16±1.331.20±0.2566.05±1.7650.98±1.39P值0.9950.087<0.00010.1470.026<0.0001如表3显示，连续5次活体采卵时，第1次卵母细胞回收率（65.91%）显著高于第2～5次卵母细胞，而第2、3、4、第5次之间差异不显著，这可能是第1次卵母细胞可穿刺的中等卵母细胞比第2～5次卵母细胞多，便于穿刺，回收率高，而第2～5次小卵泡多。优质卵母细胞（A+B级）1～5次的回收率分别为55.64%、64.05%、70.28%、69.30%、67.65%，优质卵母细胞的平均百分率为66.05%。进行连续活体采卵时，第1、2次优质卵母细胞的百分率比第3、4、5次效果差，第1、2次的优质卵母细胞的百分率与其他批次优质卵母细胞百分率差异显著。第1次活体采卵回收C级卵母细胞（裸卵和网状细胞）所占比例（39.76%）最大，与第2、3、4、5次差异显著。随着重复活体采卵次数的增加，D级卵母细胞（裸卵和网状细胞）所占的比例不断减少。因此，根据实验结果及起草单位的多年经验，处于空怀期，或怀孕1～3月内的奶水牛，宜每周采卵2次，中间间隔3d。同一批牛连续采卵最好不超过3个月。（四）采卵前准备1.仪器设备活体采卵的仪器设备包括B超活体采卵系统和其他固定奶水牛、消毒等过程所需的仪器设备，主要依据起草单位多年的经验以及实验的实际操作进行确定。2.药品试剂药品试剂主要包括消毒液、润滑液、超排药物、促黄体溶解、麻醉药、苏醒药和采卵液等类型的药物，主要依据起草单位多年的经验以及实验的实际操作进行确定。其中外源性激素可促进卵巢卵泡发育，使可供采集卵母细胞数增加，提高质量。因此，起草单位也进行了激素处理对活体采卵效果的影响研究。在活体采卵前用2000U孕马血清促性腺激素（PMSG）和2000U人绒毛膜促性腺激素（HCG）对15头地中海青年母水牛（5～9月龄）进行处理，结果表明，激素处理并不增加卵巢的卵泡总数，但可以增加中等以上卵泡数，并提高可用卵母细胞数。3.供体牛的准备在进行奶水牛活体采卵前，还需要先将供体牛固定到保定架内。并根据供体牛只的个体差异、应激敏感程度选择是否对牛只进行麻醉处理，在母水牛受应激反应小，但进行活体采卵时，臀部容易左右摆动，且爱甩动尾巴，直肠强直收缩，影响卵母细胞取出的情况下采用局部麻醉，宜选择3％普鲁卡因荐尾间隙硬膜外传导麻醉；在母水牛性情狂躁，受应激反应过大，极为不配合，或经过局麻仍无法进行操作的情况下采用全身麻醉，宜选择肌肉注射5％静松灵小剂量镇静。采卵器械调试采卵器械的调试对奶水牛活体采卵的成功也很关键。其中B型超声波仪的安装和调试，应注意真空泵负压对活体采卵效果的影响，回收卵子可用率的高低主要取决于附着在卵子上卵丘细胞的多少和形态。在随着压力的增大，虽然回收率增加；但对卵母细胞及其周围颗粒细胞的形态损伤较大，卵母细胞受精率和囊胚率明显降低。因此，活体采卵所需真空度的压力大小取决于所用的仪器(包括采卵针类型和导管系统)以及牛的品种，根据起草单位多年的经验，将B型超声波仪装至器械车上，推至保定架后方，接通电源（220V)，真空泵汞柱压力宜调至40mmHg～50mmHg。并将把预先分装好的采卵液(每头母牛30mL～50mL)和1个空的50mL卵泡液收集管放入（38±0.5）℃恒温装置中。从消毒包中取出采卵针及连接胶管，将采卵针安放于探头上的枪套卡槽内，胶管的另一端连接收集管，然后用采卵液通洗待用。5.采卵人员准备进行活体采卵实验时，采卵技术人员要磨平指甲，带上长臂手套，涂上润滑油。这些措施是为了确保操作的安全性和手术的顺利进行。磨平指甲是为了防止指甲表面的不平整损坏卵子或对实验产生负面影响。平整的指甲表面可以减少指甲对卵子的潜在伤害，同时也增加了实验操作的灵活性。长臂手套可以防止技术人员的皮肤接触卵子，防止交叉感染和外部污染物的污染。润滑油可以降低实验中器械与卵子之间的摩擦力，使得操作更加顺利。另外，润滑油还可以提供额外的保护，保持卵子的完整性和稳定性。（五）采卵操作采卵操作是依据起草单位多年的实验经验总结出来的，形成一套稳定高效的奶水牛活体采卵技术方法，并整理出了一套明确的、详细的操作内容和步骤。（1）掏净供体牛直肠中的粪便，先用自来水洗干净后躯和外阴部，再用0.1％新洁尔灭消毒，最后用干净的毛巾擦干。（2）操作者右手伸入直肠固定右侧卵巢。（3）左手将安装有采卵针的探头慢慢插入阴道，直抵阴道穹隆，把探头放在穹窿的右侧