届硕士学位论文答辩会复习课程

2006届硕士学位论文答辩会鼻咽癌肿瘤干细胞及其表面标志物的初步研究

研究生：邵世宏导师：姚运红副教授

广东医学院病理教研室

2006年6月11日

研究背景以及国内外研究现状干细胞具有自我更新、高度增殖和分化能力，分为胚胎干细胞和成体干细胞，在胚胎发育和维持组织器官结构及功能完整性过程中起到重要的作用。现在发现，人体各种组织中都存在干细胞，包括以前认为的不可再生组织，如心肌和神经组织等研究背景成体干细胞具有可塑性，在体外培养超过4－5个月便会发生癌变。干细胞是突变的靶细胞，突变的干细胞即为肿瘤干细胞，其不断增殖分化形成异质性群体的肿瘤。肿瘤可能是一种干细胞疾病，是干细胞在长期的自我更新过程中累积损伤导致干细胞生长增殖分化失去调控，而停滞在分化的某一阶段无限增殖所形成的异常的组织或器官。

肿瘤干细胞是肿瘤治疗失败复发的根源

研究目的研究鼻咽癌中是否存在少部分细胞为肿瘤干细胞

研究E-cad、CD44H、β-cat和EBERs在鼻咽癌发生发展和转移中的作用;探讨各指标与鼻咽癌干细胞的关系探讨针对肿瘤干细胞的治疗方法在鼻咽癌治疗中的可行性,为临床上鼻咽癌的治疗提供一个新的方向。

技术路线

临床病理部分技术路线临床病理部分鼻咽粘膜慢性炎鼻咽癌淋巴结转移灶鼻咽癌CD44H、β-cat和E-cad的表达IHCEBERs的表达ISH

技术路线实验病理部分CNE-2Z细胞裸鼠移植瘤成瘤率及其生长情况CD44H、β-cat和E-cad的表达

EBERs的表达鼻咽癌原代细胞克隆形成能力接种裸鼠IHCISH

结果和讨论

临床病理部分组

别NE-cadherinCD44Hß-catenin

Positive(%)Positive(%)Positive(%)鼻咽粘膜慢性炎1919(100.0)2(10.52)17(89.47)鼻咽癌3318(54.54)25(75.76)16(48.48)鼻咽癌淋巴结转移287(25.00)27(96.43)22(78.56)E-cadherin、CD44H和ß-catenin在鼻咽粘膜慢性炎、鼻咽癌及鼻咽癌淋巴结转移组织中的表达χ2检验：E-cad、CD44H和ß-cat的表达在鼻咽粘膜慢性炎组和鼻咽癌组间比较，差异均有显著性(P<0.05)，χ2值分别为15.850，12.076和9.952。E-cad、CD44H和ß-cat的表达在鼻咽癌组和鼻咽癌淋巴结转移组间比较，差异均有显著性(P<0.05)，χ2值分别为5.467，5.146和5.838。临床病理部分结果临床病理部分鼻咽癌中E-cadherin和ß-catenin表达的相关分析

E-cadherin

ß-catenin

正常表达

异常表达

-312

+144Spearman相关分析：ß-catenin异常表达和E-cadherin失表达具有相关性，r=0.555，P<0.001

结果

结果

空白对照(SPx200)

E-cad在鼻咽粘膜慢性炎中的阳性表达

（SP×400）结果E-cad在鼻咽癌中的阳性表达（SP×200）E-cad在鼻咽癌淋巴结转移灶的阳性表达（SP×200）

结果CD44H在鼻咽粘膜慢性炎中的阳性表达（SP×400）

CD44H在鼻咽癌中的阳性表达

（SP×200）结果

CD44H在鼻咽癌淋巴结转移灶的表达（SP×200）β-cat在鼻咽粘膜慢性炎中的阳性表达（SP×200）

结果β-cat在鼻咽癌中的异常表达（SPX200）β-cat在鼻咽癌淋巴结转移灶中的异常表达（SPX400）临床病理部分(ISH)

鼻咽癌癌旁组织380(0)38(100.0)

鼻咽癌3832(84.21)6(15.79)EBERs在鼻咽癌癌旁组织及鼻咽癌中的表达

组别NEBERsPositive(%)negative(%)χ2检验：EBERs的表达在鼻咽癌组和鼻咽癌癌旁组织组比较，差异有极显著性(P<0.001)，χ2值为55.273.结果EBERs的阳性对照（ISH×200）

EBERs在鼻咽癌癌旁组织中阴性表达（ISHX200）

结果EBERs在鼻咽癌中的阳性表达（ISH×200）

临床病理部分CD44H高表达、ß-catenin异常表达和E-cadherin低表达与鼻咽癌的发生发展和转移有关。EBERs与鼻咽癌的发生有关，但不是鼻咽癌发生的必需条件。

CD44H、ß-catenin和E-cadherin在鼻咽癌中均为异质性表达，各种不同标记的癌细胞生物学特性有待进一步研究E-cadherin失表达与ß-catenin异常表达有关，机制有待进一步研究。

讨论

结果和讨论

实验病理部分结果

空白对照（SP×400）

ß-cat在CNE-2Z细胞中异常表达（SPX200）

结果CD44H在CNE-2Z细胞中的同质性阳性表达（SP×200）

E-cadherin在CNE-2Z细胞中的异质性表达（SP×200）

结果

空白对照（SP×400）

CNE-2Z细胞裸鼠移植瘤中CD44H异质性表达（SP×400）

结果CNE-2Z细胞裸鼠移植瘤中E-cad的异质性表达（SP×400）

CNE-2Z细胞裸鼠移植瘤中ß-cat的异常表达（SP×400）

结果CNE-2Z细胞裸鼠移植瘤中EBERs的阴性表达（ISH×400）

EBERs在CNE-2Z细胞中的阴性表达（ISH×200）

结果CNE-2Z细胞克隆形成率为（71.88±4.52）％组织块培养法对15例经临床病理证实的鼻咽癌新鲜组织进行原代培养，14例有癌细胞长出，随着培养时间的推移，细胞数量逐渐减少，最后仅剩余极少量细胞存活

实验病理部分鼻咽癌组织中除了一小部分细胞具有无限增殖能力以外，大多数细胞不能无限增殖。CD44H和ß-cat在CNE-2Z细胞系中均为同质性阳性表达，E-cad为异质性表达，EBERs为阴性表达。裸鼠移植瘤中CD44H、ß-cat和E-cad均为异质性表达，EBERs为阴性表达，CD44H阳性细胞可分化产生CD44H阴性细胞。CNE-2Z细胞系中含有大量鼻咽癌干细胞。鼻咽癌细胞CNE-2Z的生长增殖及转移成瘤不需要EBERs的参与，EBERs可能仅参与或促进鼻咽癌的发生发展。

讨论

小结鼻咽癌中仅有极少部分细胞能在体外存活并生长增殖，这部分细胞高表达CD44H蛋白，可能是鼻咽癌干细胞。CNE-2Z细胞同质性表达CD44H蛋白，可能含有极高比例的肿瘤干细胞。EBERs参与了鼻咽癌的发生发展，但不是必需条件，不能做为分选鼻咽癌干细胞的标志。CD44H阳性的细胞具有极高的克隆形成、转移成瘤和分化能力，CD44H可能成为鼻咽癌干细胞的表面标志。

致谢感谢导师姚运红副教授三年来在学习、生活上给予的关怀与帮助。在此，谨向精心指导和培育我的导师致以最诚挚的谢意！感谢教研室唐慰萍教授、陈小毅教授、孙宁教授、胡新荣教授、姜汉国副教授、卢庆林副教授、赵颖海副教授在课题设计、实验进展和论文完成过程中给予的宝贵指导和帮助！感谢邓惠华高级实验师、