DB12T 1292-2023 花椰菜主要流行病害抗性鉴定技术规程　

12TechnicalstandardsforidentificationofresistancetoimportantepidemicdiseaI本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定本文件起草单位：天津科润农业科技股份有限公司、天津市农业科本文件主要起草人：孙德岭、姚星伟、张小丽、牛国保、单晓政、文正华、刘莉莉、江汉1花椰菜主要流行病害抗性鉴定技术规程GB/T6682分析实验室用水规格g，可溶性淀粉0.5g，吐温801.0g，胰酪胨5.0g，酵母膏5.0g和0.5gNaCl溶于蒸馏水并定容至250m4.2玉米粒培养基4.370%乙醇溶液量取10ml有效氯含量10%的次氯酸25.1恒温摇床回旋频率范围：40r/min～300r/min；温度控制范围：5℃~60℃。5.2恒温培养箱5.3低温冰柜箱内温度：-15℃~-25℃。5.4灭菌锅温度范围：0℃~135℃;灭菌时间：4min～120min；最高工作压力：0.22MPa。5.5超净工作台洁净等级：100级@≥0.5μ;平均风速：0.25m/s～0.6m/s。5.7血球计数板28℃摇床恒温培养1天后取出，加入适量无菌水稀释，用血球采集花椰菜霜霉病病叶表面着生的霉层及其附着物用无菌水冲净，再用无菌水冲洗3遍，将洗净的病叶放入无菌培养皿中置于温度20℃、相对湿度95%的培养箱中黑暗培养1d。之后用湿棉球将新产生的3用双层无菌纱布保湿48h，用无菌水洗刷孢子浓度至1×106CFU/ml，置于4将新鲜的花椰菜肿根取500g搅碎，4层纱布过滤，2500r/min离心5min，弃上清液；用浮沉淀，重复3次，用血球计数板统计接种液浓度至1×106CFU/ml，鉴定种子在1%次氯酸钠溶液中浸泡10min，清水冲洗后置于25℃恒温培养箱内催芽或直接播种于育苗盘内。装入准备好的育苗基质土，防虫网内或日光温室内育苗，室内温度白天控制在22℃~25℃,夜晚控制在17℃~20℃,待幼苗长至4片～5片真叶时进行抗病性鉴定。现露珠，第二天制备接种菌液并用小型喷雾器进行喷雾接种，均匀喷施至叶片上，在人工气候室内24h采用喷雾法接种。将菌液倒入小型喷雾器中，在接种材料的叶片背面喷洒，每株100μL。接种后将温度控制在18℃~25℃,黑暗条件下相对湿度95%～100%保湿24h，24h后降低相对湿度至80%~径5mm菌片带菌丝面贴于幼苗的第3片真叶，用保鲜膜保湿，接种后24h保持在20℃~23℃,相对湿度4采用喷雾法接种，将制备好的孢子悬液均匀喷洒于幼苗叶片表面，每株100µL。接种后将温度控给根系造成机械伤害，将1×108CFU/ml接种菌液5m9病情调查9.1病情级别0水孔处有黑色枯接种点上有稀疏病病斑仅出现在接病斑面积占整个根肿只附着在侧根，数量占根系全部的病斑从水孔向外发病叶片病斑面积占叶片面积的病斑面积占整个主根有根肿附着，侧病斑从水孔向外扩展，占叶面积叶片病斑向四处扩发病叶片病斑面积占叶片面积的病斑面积占整个病斑从水孔向外扩展，占叶面积病斑面积达50%~发病叶片病斑面积占叶片面积的病斑面积占整个病斑从水孔向外扩展，占叶面积发病叶片病斑面积占叶片面积的病斑面积占整个