马人工授精技术规程（征求意见稿）

1T/XXXXXXX—XXXX马人工授精技术规程本文件规定了马人工授精过程中精液采集、品质检查、精液稀释、发情鉴定、输精、妊娠鉴定等的技术方法和要求。本文件适用于马的人工授精。2规范性引用文件本文件没有规范性引用文件。3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1人工授精artificialinsemination在人工条件下，利用器械将公马的精液采出，经过处理后（品质检查、稀释、保存等），再用器械将合格精液输送到母马生殖道内，使其受孕的一种配种方法。3.2种公马stallion具有良好的体型外貌、完善的生长发育、肌肉强健、精液品质高、符合品种特征的健康公马。3.3母马mare身体健康、发情周期规律、繁殖机能正常、达到适配年龄的未妊娠母马。3.4发情鉴定estrusidentification综合利用外部观察法、直肠检查法和试情法等多种方法确定母马的发情状态。4采精前准备4.1采精场地应设有采精室或固定采精场地，采精场地应宽敞平坦、安全卫生，配有清洗消毒设施、假畜台。4.2设备器具假阴道外壳、内胎应依次用洗洁精、2%碳酸氢钠溶液清洗，再用干净纱布遮盖晾干。采精前30min，用75%酒精棉球对假阴道内胎壁、集精杯内外璧由内向外消毒。玻璃、金属器械等耐高温器械应用温水浸泡、洗净晾干后，再用干净纱布或白棉布包裹放置高压灭菌锅中消毒30min。玻璃器械应用75%酒精浸泡消毒，待酒精挥发后方能使用；塑料及橡胶制品放置在距离紫外线灯下60cm处照射灭菌30min以上。凡与精液、马生殖器（道）接触的其他器具均应彻底洗净后严格消毒，再用稀释液冲洗后使用。4.3台马选择健康无病、性情温顺、营养中等膘情发情母马为台马，保定并用绷带布包扎马尾并系于马体左侧，台马外阴部用0.1%高锰酸钾溶液清洗消毒，用消毒纱布或毛巾擦干。4.4种公马2种公马阴茎及包皮宜用1%来苏尔消毒液消毒，温水冲洗干净后用消毒纱布擦干。5采精5.1假阴道的安装5.1.1安装内胎假阴道外壳两端应光滑，将内胎放入外壳，使内胎露出外壳两端的部分等长，后将内胎翻转套在外壳上，内胎平整无扭曲，用橡胶圈固定两端。5.1.2注水在气阀口向假阴道内胎夹层灌入1500ml～3000ml温水，水量宜为外壳与内胎间容量1/3～1/2。5.1.3涂润滑剂在假阴道入口前1/3段，用玻璃棒均匀涂抹5ml灭菌甘油。5.1.4充气调压内腔充气压力视公马阴茎的粗细、长短调整，内胎呈“Y”或“X”字型，入口宜为较浅的漏斗状。5.1.5测温用水温计伸入假阴道中间部位，测量温度，宜为38℃~40℃。假阴道入口端用消毒纱布盖好，装入保温箱内备用。5.2采精采精员穿防护服，双手清洗消毒后戴橡胶手套，右手持假阴道把柄并靠在右臂肘处，站于台马右后侧，调整假阴道角度使之与公马阴茎伸出方向一致，左手托住阴茎基部使其自然插入假阴道。公马射精完毕后，将假阴道的集精杯端放低并打开活塞放气，充分排精后，缓慢将假阴道竖起并移开，将精液及时送至处理室。6精液品质检查6.1外观检查精液品质检查在20℃~25℃室温条件下进行。取下集精杯，用4层无菌纱布或专用滤网过滤，读取精液量，正常射精量应在40ml～70ml之间。检查色泽、气味，正常新鲜精液应为淡乳白色或灰白色，有特殊腥味。异常精液应废弃6.2显微镜检查6.2.1活率检查时显微镜载物台温度应保持37℃~38℃,用移液器取原精液，滴在洁净的载玻片上加盖玻片，在显微镜下放大400倍对精液样品进行观察，每个演片不少于3个视野，上下调节旋钮，观察不同层次内的精子运动情况，求其活力的平均值。视野中估算直线前进运动精子数所占全部精子的百分数，直线前进运动的精子为100%者评为1.0，90%者为0.9，以此类推。新鲜精液活率≤0.7时应废弃。6.2.2密度用移液器取原精液，滴在洁净的载玻片上加盖玻片，显微镜放大100倍观察。视野内精子彼此之间空隙小于一个精子的长度，评为“密”；视野内精子彼此之间空隙约为一个精子的长度，评为“中”；视野内精子彼此之间空隙大于一个精子的长度，评为“稀”。精子密度≤1×109/ml应废弃。6.2.3畸形率3T/XXXXXXX—XXXX用移液器取原精液，滴在洁净的载玻片上加盖玻片，显微镜放大200倍～400倍观察畸形精子数，计算畸形精子的百分率。精子畸形率≥10%时应废弃。6.2.4存活时间在15℃~20℃常温保存状态下，精子存活时间应在48h以上，精子活率≥0.7；在超低温环境下，精子可长期保存，解冻后活率≥0.35。活率异常应废弃。6.3数据记录精液品质检查相关数据应准确记录，记录表参照附录A.7精液稀释7.1稀释液的选择可选用商品专用稀释液，或自配稀释液，自配稀释液现配现用。7.2稀释倍数根据精液密度及活率确定适合的稀释倍数，稀释倍数宜为2倍～4倍。精液稀释后，每ml精子数不少于5000千万。7.3稀释方法原精存放时间不应超过20min，品质检查后应尽快稀释。精液等温稀释，稀释液的温度根据精液温度来调节，二者温差不超过1℃。稀释时，将稀释液沿量杯内壁缓慢加入到精液中，用玻璃棒轻拌混合均匀。8母马发情期鉴定8.1外部观察母马发情期表现为经常嘶叫，眼光锐利，精神紧张不安，叉腿弓腰，尾根举起，愿意接受爬跨，阴唇表现节奏性收缩，阴蒂外露，排尿或有排尿线，阴道黏液有时流出阴门，黏着在尾毛上。8.2直肠检查卵泡发育一瑞卵巢增大并下沉，卵泡直径4cm～6cm。卵巢壁簿，触诊弹性强、波动明显。排卵窝被充满，无洼陷感。触摸卵巢，母马有疼痛感，抬起一侧后肢。8.3超声波检查使用B超仪检查卵泡发育情况，卵泡直径4cm左右，卵泡壁呈现增厚。9输精9.1输精前准备9.1.1输精用品准备橡胶输精导管或一次性塑料输精导管。橡胶导管每次输精前用稀释液或生理盐水润洗内管，每次用后应立即用自来水冲洗内外，然后用蒸馏水冲洗后晾干，再用75%酒精冲洗，酒精完全挥发后备用。9.1.2输精人员将手和手臂彻底洗净后，用1%～2%的来苏儿液或1%的新洁尔灭液浸泡消毒，再用无菌蒸馏水或2%碳酸氢钠液冲净至无味，戴无菌手套。9.1.3输精母马4将发情母马保定在保定栏内，尾部用绷带从尾根部缠绕约30cm后束在一起，用绳子将尾部拉向左前方。外阴部用消毒液冲洗后用纸巾擦干。9.1.4精液准备若使用冷冻精液应先解冻，加入20℃左右解冻液后混合均匀，输精前精液应升温至25℃~30℃。用注射器吸取20ml～30ml稀释好的精液，连接可视输精枪，用温毛巾包好注射器。9.2输精方法9.2.1子宫角细管输精将已装入细管精液的输精器缓缓插入阴道内，中指通过子宫颈口，另一只手握住输精器向前推送，使输精器枪头在中指下进入子宫内，推不动即停止推送并固定，将阴道内的手臂取出五指并拢伸入直肠深处，此时手掌向下可以感觉到输精器及马子宫分叉处。另一只手将输精器前端先斜向上，使输精器进入排卵侧子宫体内使其和输精器成直线，然后将输精器前端缓慢导入此侧子宫角内输精。9.2.2子宫体输精将连接有精液玻璃注射器的输精胶管插入阴道内。四指握住输精胶管将输精胶管推送到马子宫颈口至子宫体分叉处，另一只手握住玻璃注射器，利用下巴或前胸向前推送，将精液推送至子宫内。9.3输精次数卵泡发育至四期时开始输精，一个发情期输精次数应在3次以内。宜在排卵前和排卵后各输精一次，早、晚输精。输精间隔时间36h～48h。9.4数据记录输精信息应记录并保存。10妊娠鉴定10.1外部观察妊娠母马外部表现发情周期停止，食欲增进，被毛光泽，性情温顺，不愿合群。10.2直肠检查妊娠14d～16d，马子宫角收缩呈圆柱状，角壁肥厚，用手触捏有实心感，略有弹性，一侧卵巢有黄体存在。妊娠17d～24d，马子宫角收缩，更加硬化，轻捏尖端捏不扁，实心感较强。在子宫角的基部，胚泡向下突出明显，如鸽蛋大小。妊娠25d～30d，子宫角收缩，坚硬，胎泡体积大如鸡蛋。妊娠30d～40d，胎泡增长速度较快，胎泡如拳头大，触之柔软，波动明显。妊娠40d～50d，胎泡直径达10cm～12cm，孕角由于重量增加而稍下沉，此时胎泡处子宫明显变薄，其形态与充满尿液的膀胱相似。妊娠60d～70d，胎泡增长迅速，纵径大于横径，平均直径达12cm～16cm，两侧卵巢下降并彼此向体轴中线靠近。妊娠80d～90d，胎泡直径近25cm，如篮球大，两个子宫角几乎完全被胎儿所占据下沉，摸不到全部子宫和胎儿，子宫颈增粗，前移，牵拉有沉重感。妊娠90d以后，胎泡完全沉入腹腔，直肠检