《生物化学中》课件

生物化学课件(供临床医学专业使用)2008，31完整版课件ppt蛋白质的结构与功能第一章StructureandFunctionofProtein2完整版课件ppt一、什么是蛋白质?蛋白质(protein)是由许多氨基酸(aminoacids)通过肽键(peptidebond)相连形成的高分子含氮化合物。概述3完整版课件ppt二、蛋白质的生物学重要性1.蛋白质是生物体重要组成成分分布广：所有器官、组织都含有蛋白质；细胞的各个部分都含有蛋白质。含量高：蛋白质是细胞内最丰富的有机分子，占人体干重的45％，某些组织含量更高，例如脾、肺及横纹肌等高达80％。4完整版课件ppt1）作为生物催化剂（酶）2）代谢调节作用3）免疫保护作用4）物质的转运和存储5）运动与支持作用6）参与细胞间信息传递2.蛋白质具有重要的生物学功能3.氧化供能5完整版课件ppt蛋白质的分子组成

TheMolecularComponentofProtein第一节6完整版课件ppt一、组成蛋白质的元素.主要有C、H、O、N和S。

有些蛋白质含有少量磷或金属元素铁、铜、锌、锰、钴、钼，个别蛋白质还含有碘

。7完整版课件ppt各种蛋白质的含氮量很接近，平均为16％。由于体内的含氮物质以蛋白质为主，因此，只要测定生物样品中的含氮量，就可以根据以下公式推算出蛋白质的大致含量：100克样品中蛋白质的含量(g%)=每克样品含氮克数×6.25×1001/16%

蛋白质元素组成的特点8完整版课件ppt二、蛋白质的基本单位-氨基酸

(一)氨基酸的结构(通式)存在自然界中的氨基酸有300余种，但组成人体蛋白质的氨基酸仅有20种(20-22)，且均属L-氨基酸（甘氨酸除外）如图示。9完整版课件pptH甘氨酸CH3丙氨酸L-氨基酸的通式R10完整版课件pptCH

COOH

RR:H甘AA;R:CH3丙AAR:CH-OH苏AACH3H2N11完整版课件ppt非极性側链氨基酸非电离极性側链氨基酸酸性氨基酸碱性氨基酸(二）氨基酸的分类*20种氨基酸的英文名称、缩写符号及分类如下:12完整版课件ppt甘氨酸

glycine

Gly

G

5.97丙氨酸alanineAlaA

6.00缬氨酸valineValV

5.96亮氨酸

leucineLeuL

5.98异亮氨酸isoleucineIleI

6.02苯丙氨酸phenylalaninePheF

5.48脯氨酸prolineProP

6.30非极性側链氨基酸目录13完整版课件ppt色氨酸tryptophanTryW

5.89丝氨酸serineSerS

5.68酪氨酸tyrosineTryY

5.66半胱氨酸cysteineCysC

5.07蛋氨酸methionine

MetM

5.74天冬酰胺asparagineAsnN

5.41

谷氨酰胺

glutamineGlnQ

5.65

苏氨酸

threonineThrT5.602.非电离极性側链氨基酸目录14完整版课件ppt天冬氨酸asparticacidAspD

2.97谷氨酸glutamicacidGluE

3.22赖氨酸lysineLysK

9.74精氨酸arginineArgR

10.76组氨酸histidineHisH

7.593.酸性氨基酸4.碱性氨基酸目录15完整版课件ppt几种特殊氨基酸脯氨酸（亚氨基酸）16完整版课件ppt

半胱氨酸+胱氨酸二硫键-HH17完整版课件ppt*以肽键相连接,肽键(peptidebond)是由一个氨基酸的

-羧基上的羟基与另一个氨基酸的

-氨基上的氢原子脱水缩合而形成的化学键,如图示:三.氨基酸在蛋白质中的连接方式18完整版课件ppt+-HOH甘氨酰甘氨酸肽键19完整版课件pptH2NCC

OHR1HN

HCCOOH

R2CNOHOH20完整版课件ppt*肽是由氨基酸通过肽键缩合而形成的化合物。*两分子氨基酸缩合形成二肽，三分子氨基酸缩合则形成三肽……*肽链中的氨基酸分子因为脱水缩合而基团不全，被称为氨基酸残基(residue)。*由十个以内氨基酸相连而成的肽称为寡肽(oligopeptide)，由更多的氨基酸相连形成的肽称多肽(polypeptide)。21完整版课件pptN末端：多肽链中有自由氨基的一端C末端：多肽链中有自由羧基的一端多肽链有两端*多肽链(polypeptidechain)是指许多氨基酸之间以肽键连接而成的一种结构。22完整版课件pptN末端C末端牛核糖核酸酶23完整版课件ppt.几种生物活性肽1.谷胱甘肽(glutathione,GSH)24完整版课件pptGSH过氧化物酶H2O22GSH2H2OGSSG

GSH还原酶NADPH+H+NADP+25完整版课件ppt

体内许多激素属寡肽或多肽神经肽(neuropeptide)2.多肽类激素及活性肽26完整版课件ppt抗利尿素与催产素(9肽)、胰高血糖素（29肽）、脑啡肽（5肽）、降钙素（32肽）、ACTH（39肽）、胰岛素（51肽）肌肽（2肽）、P物质（10肽、属神经肽类）、β内啡肽（31肽）27完整版课件ppt蛋白质的分子结构

TheMolecularStructureofProtein第二节28完整版课件ppt蛋白质的分子结构包括

一级结构(primarystructure)二级结构(secondarystructure)三级结构(tertiarystructure)四级结构(quaternarystructure)高级结构29完整版课件ppt.概念：蛋白质的一级结构指多肽链中氨基酸的排列顺序。一、蛋白质的一级结构.主要的化学键(主键)肽键，有些蛋白质还包括二硫键。方向:N

C;

或

NH2末端羧基末端30完整版课件ppt.提示：一级结构是蛋白质空间构象和特异生物学功能的基础。它由遗传密码决定,其上有酶切位点,一级结构可测定,并不同种属间有同源性.目录31完整版课件ppt二、蛋白质的空间结构指蛋白质分子空间的三维结构,即立体,空间的构象，在蛋白质分子中各元素围绕某些化学键进行旋转,从而形成各种空间排布及相互关系(一).蛋白质的二级结构1.肽键平面(肽单元,肽平面,酰胺平面)是蛋白质的基本结构单位.如图:32完整版课件ppt参与肽键的6个原子C

1、、C、O、N、H、C

2位于同一平面，，此同一平面上的6个原子构成了所谓的肽单元

(peptideunit)

。肽键平面—形成二级结构的基础33完整版课件ppt有关对肽键平面的描述？34完整版课件ppt2.二级结构的概念与基本形式A.概念:一条多肽链中局部原子的空间排佈B.二级结构的基本形式（1）

-螺旋(

-helix)

（2）

-折叠(

-pleatedsheet)（3）

-转角(

-turn)（4）不规则卷曲(randomcoil)

35完整版课件ppt（1）、α螺旋特点

①、②、③、④（2）、β折叠特点

①、②、③（3）、β转角（4）、无规则卷曲36完整版课件ppt

-螺旋目录37完整版课件ppt38完整版课件pptRRRRRRRRR39完整版课件ppt

-折叠40完整版课件ppt

-折叠41完整版课件pptNCNCNCNC维系力:链内或链间氢键42完整版课件pptNC43完整版课件ppt

-转角

-转角44完整版课件ppt转角,含4个AA,3个肽键平面?45完整版课件pptβ-转角

①180°的转角部位②由4个氨基酸残基构成③由第一个残基的羰基氧（O）与第四个残基的氨基氢（H）可形成氢键④多含脯氨酸和甘氨酸46完整版课件ppt不规则卷曲环或卷曲结构：无规卷曲是用来阐述没有确定规律性的那部分肽链结构。相对没有规律性的排布，但是其同样表现重要生物学功用。C.二级结构的维系力:氢键47完整版课件ppt.模体在许多蛋白质分子中，可发现二个或三个具有二级结构的肽段，在空间上相互接近，形成一个特殊的空间构象，被称为模体(motif)。48完整版课件ppt钙结合蛋白中结合钙离子的模体锌指结构49完整版课件pptNCNC50完整版课件ppt.氨基酸残基的侧链对二级结构形成的影响蛋白质二级结构是以一级结构为基础的。一段肽链其氨基酸残基的侧链适合形成

-螺旋或β-折叠，它就会出现相应的二级结构。51完整版课件ppt(二)、蛋白质的三级结构氢键、离子键、疏水键、VanderWaals力等。2.主要的化学键（维系力）一条多肽链中全部氨基酸残基(全部元素)的相对空间位置。即肽链中所有原子在三维空间的排布位置。包括主链，側链的全部内容1.概念为非共价键，次级键（盐键）52完整版课件ppt目录53完整版课件ppt肌红蛋白(Mb)肌红蛋白为单肽链蛋白质，含153个氨基酸残基，它含有8个α螺旋区，依次称为A到H螺旋，并含有β转角及环-卷曲等二级结构。

54完整版课件ppt2.维系力亚基之间的结合力有疏水作用，VanderWaals力以及氢键和离子键,还有二硫键。（三）蛋白质的四级结构(或蛋白质分子中各亚基的空间排布及亚基接触部位的布局和相互作用，称为蛋白质的四级结构。)1.概念有些蛋白质分子含有二条或多条多肽链，每一条多肽链都有完整的三级结构，称为蛋白质的四级结构.而每条多肽链被称为亚基(subunit)。55完整版课件ppt.蛋白质的四级结构具有四级结构蛋白质56完整版课件pptreview57完整版课件pptSummary58完整版课件ppt三、蛋白质结构与功能的关系(一)、蛋白质的一级结构与功能的关系

(二)、蛋白质的空间结构与功能的关系59完整版课件ppt.一级结构是空间构象的基础(一)、蛋白质一级结构与功能的关系牛核糖核酸酶的一级结构二硫键60完整版课件ppt.一级结构与功能的关系例：镰刀形红细胞贫血N-val·his·leu·thr·pro·glu·glu·····C(146)HbSβ肽链HbAβ肽链N-val·his·leu·thr·pro·val

·glu·····C(146)这种由蛋白质分子发生变异所导致的疾病，称为“分子病”。（谷AA）（颉AA）61完整版课件pptSSSSSSNNA链、21AAB链、30AA胰岛素A5A6A10B30人ThrSerIleThr猪ThrSerIleAla62完整版课件ppt.肌红蛋白与血红蛋白的结构(二)、蛋白质空间结构与功能的关系目录63完整版课件pptHb与Mb一样能可逆地与O2结合，Hb与O2结合后称为氧合Hb。氧合Hb占总Hb的百分数（称百分饱和度）随O2浓度变化而改变。.血红蛋白的构象变化与结合氧64完整版课件ppt肌红蛋白(Mb)和血红蛋白(Hb)的氧解离曲线65完整版课件ppt*协同效应(cooperativity)一个寡聚体蛋白质的一个亚基与其配体结合后，能影响此寡聚体中另一个亚基与配体结合能力的现象，称为协同效应。如果是促进作用则称为正协同效应(positivecooperativity)如果是抑制作用则称为负协同效应

(negativecooperativity)66完整版课件ppt67完整版课件pptO2血红素与氧结合后，铁原子半径变小，就能进入卟啉环的小孔中，继而引起肽链位置的变动。68完整版课件ppt变构效应(allostericeffect)蛋白质空间结构的改变伴随其功能的变化，称为变构效应。69完整版课件ppt天然状态，有催化活性尿素、β-巯基乙醇去除尿素、β-巯基乙醇非折叠状态，无活性70完整版课件ppt.蛋白质构象改变与疾病蛋白质构象疾病：若蛋白质的折叠发生错误，尽管其一级结构不变，但蛋白质的构象发生改变，仍可影响其功能，严重时可导致疾病发生。71完整版课件ppt蛋白质构象改变导致疾病的机理：有些蛋白质错误折叠后相互聚集，常形成抗蛋白水解酶的淀粉样纤维沉淀，产生毒性而致病，表现为蛋白质淀粉样纤维沉淀的病理改变。这类疾病包括：人纹状体脊髓变性病、老年痴呆症、亨停顿舞蹈病、疯牛病等。72完整版课件ppt疯牛病中的蛋白质构象改变疯牛病是由朊病毒蛋白(prionprotein,PrP)引起的一组人和动物神经退行性病变。正常的PrP富含α-螺旋，称为PrPc。PrPc在某种未知蛋白质的作用下可转变成全为β-折叠的PrPsc，从而致病。PrPcα-螺旋PrPscβ-折叠正常疯牛病73完整版课件ppt第三节蛋白质的理化性质ThePhysicalandChemicalCharactersofProtein74完整版课件ppt蛋白质分子除两端的氨基和羧基可解离外，氨基酸残基侧链中某些基团，在一定的溶液pH条件下都可解离成带负电荷或正电荷的基团。*蛋白质的等电点(isoelectricpoint,pI)当蛋白质溶液处于某一pH时，蛋白质解离成正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子，净电荷为零，此时溶液的pH称为蛋白质的等电点。一、蛋白质两性解离和等电点75完整版课件ppt

PrCOOHNH3+OH-H+PrNH3+COO_OH-PrH+NH2COO-正离子pH＜pI两性离子pH﹦pI负离子pH＞pI76完整版课件ppt蛋白质等电点ProteinpIPepsin<1.0Serumalbumin4.9Urease5.0Hemoglobin6.8Myoglobin7.0Chymotrypsinogen9.5Lysozyme11.077完整版课件ppt二.蛋白质的胶体性质蛋白质属于生物大分子之一，分子量可自1万至100万之巨，其分子的直径可达1～100nm，为胶粒范围之内。*蛋白质胶体稳定的因素颗粒表面电荷水化膜78完整版课件ppt+++++++带正电荷的蛋白质－－－－－－－－带负电荷的蛋白质在等电点的蛋白质水化膜++++++++带正电荷的蛋白质－－－－－－－－带负电荷的蛋白质不稳定的蛋白质颗粒酸碱酸碱酸碱脱水作用脱水作用脱水作用溶液中蛋白质的聚合沉淀79完整版课件ppt三.蛋白质的变性、沉淀和凝固*蛋白质的变性(denaturation)在某些物理和化学因素作用下，其特定的空间构象被破坏，也即有序的空间结构变成无序的空间结构，从而导致其理化性质改变和生物活性的丧失。80完整版课件ppt引起变性的因素:物理、化学与生物学因素如如加热、乙醇等有机溶剂、强酸、强碱、重金属离子及生物碱试剂等。

变性的本质——破坏非共价键（次级键）和二硫键，不改变蛋白质的一级结构。81完整版课件ppt变性蛋白质的特点:

粘度增加，溶解度降低，易沉淀,易被蛋白酶降解,丧失生物学活性.82完整版课件ppt应用举例临床医学上，变性因素常被应用来消毒及灭菌。此外,防止蛋白质变性也是有效保存蛋白质制剂（如疫苗等）的必要条件。

83完整版课件ppt若蛋白质变性程度较轻，去除变性因素后，蛋白质仍可恢复或部分恢复其原有的构象和功能，称为复性(renaturation)。84完整版课件ppt天然状态，有催化活性尿素、β-巯基乙醇去除尿素、β-巯基乙醇非折叠状态，无活性85完整版课件ppt*蛋白质沉淀在一定条件下，蛋白疏水侧链暴露在外，肽链融会相互缠绕继而聚集，因而从溶液中析出。变性的蛋白质易于沉淀，有时蛋白质发生沉淀，但并不变性。*蛋白质的凝固作用(proteincoagulation)蛋白质变性后的絮状物加热可变成比较坚固的凝块，此凝块不易再溶于强酸和强碱中。

86完整版课件ppt四、蛋白质的紫外吸收由于蛋白质分子中含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸，因此在280nm波长处有特征性吸收峰。蛋白质的OD280与其浓度呈正比关系，因此可作蛋白质定量测定。（与TrpTyr有关）87完整版课件ppt五、蛋白质的呈色反应⒈茚三酮反应(ninhydrinreaction)

蛋白质经水解后产生的氨基酸也可发生茚三酮反应。⒉双缩脲反应(biuretreaction)蛋白质和多肽分子中肽键在稀碱溶液中与硫酸铜共热，呈现紫色或红色，此反应称为双缩脲反应，双缩脲反应可用来检测蛋白质水解程度。88完整版课件pptA、蛋白质的分离和纯化（一）透析及超滤法*透析(dialysis)利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。*超滤法

应用正压或离心力使蛋白质溶液透过有一定截留分子量的超滤膜，达到浓缩蛋白质溶液的目的。生物化学技术：89完整版课件ppt&.透析90完整版课件ppt（二）丙酮沉淀、盐析及免疫沉淀*使用丙酮沉淀时，必须在0～4℃低温下进行，丙酮用量一般10倍于蛋白质溶液体积。蛋白质被丙酮沉淀后，应立即分离。除了丙酮以外，也可用乙醇沉淀。*盐析(saltprecipitation)是将硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏，导致蛋白质沉淀。91完整版课件ppt*

免疫沉淀法：将某一纯化蛋白质免疫动物可获得抗该蛋白的特异抗体。利用特异抗体识别相应的抗原蛋白，并形成抗原抗体复合物的性质，可从蛋白质混合溶液中分离获得抗原蛋白。92完整版课件pptbindingwashelution免疫沉淀抗体ProteinA-agarose93完整版课件ppt（三）电泳蛋白质在高于或低于其pI的溶液中为带电的颗粒，在电场中能向正极或负极移动。这种通过蛋白质在电场中泳动而达到分离各种蛋白质的技术,称为电泳(elctrophoresis)

。根据支撑物的不同，可分为薄膜电泳、凝胶电泳等。

94完整版课件ppt几种重要的蛋白质电泳*SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，常用于蛋白质分子量的测定。*等电聚焦电泳，通过蛋白质等电点的差异而分离蛋白质的电泳方法。*双向凝胶电泳是蛋白质组学研究的重要技术。95完整版课件pptSDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳96完整版课件ppt（四）层析层析(chromatography)分离蛋白质的原理待分离蛋白质溶液（流动相）经过一个固态物质（固定相）时，根据溶液中待分离的蛋白质颗