动物疫病诊断技术 α疱疹病毒

动物疫病诊断技术α疱疹病毒范围本文件规定了猪伪狂犬病，鸡马立克氏病，牛传染性鼻气管炎和马鼻肺炎的流行特点和诊断方法。本文件适用于猪、鸡、牛、马、驴α疱疹病毒的流行病学调查、诊断和检测。规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。流行特点猪伪狂犬病由猪伪狂犬病毒（Porcinepseudorabiesvirus，PRV）感染猪引起的一种急性传染病。猪是伪狂犬病毒的贮存宿主，患病猪、带毒猪以及带毒鼠类为主要传染源。本病主要通过空气传播，同时，在猪群中也存在鼻分泌物传播的现象。该病呈季节性流行，常发生在寒冷的季节。鸡马立克氏病由鸡疱疹病毒2型（GallidAlphaherpesvirus2，GaHV-2），即马立克氏病病毒（Marek’sdiseasevirus，MDV）感染鸡引起的一种淋巴细胞增生性疾病。病鸡和带毒鸡是主要传染源。本病主要通过空气传播，另外，污染的饲料和饮水，以及饲养人员流动也可传播该病。2月龄～5月龄的鸡常发。牛传染性鼻气管炎由牛疱疹病毒1型（Bovineherpesvirus1，BoHV-1）感染牛引起的一种接触性传染病。病牛和带毒牛是主要传染源，该病主要由飞沫经呼吸道传播，另外，也可通过生殖道黏膜、眼结膜传播。常发生于秋、冬寒冷季节。马鼻肺炎由马疱疹病毒1型、4型或8型（Equineherpesvirustype，EHV-1/4/8）感染马属动物引起的一种急性、热性传染病。病马或驴和恢复后带毒的马或驴是主要传染源。该病主要通过呼吸道传播，另外，部分带毒的公马或驴可通过交配传播。该病多发生于秋冬和早春。诊断临床诊断猪伪狂犬病潜伏期一般为2 天～6 天，刚配种的母猪发病时易出现隐形流产；母猪发病早期无显著症状，妊娠母猪分娩前或后1周出现食欲下降甚至废绝，且出现早产，流产，产死胎或弱胎；公猪出现睾丸萎缩，阴囊肿大，精子活力低。哺乳仔猪感染以后出现高热，抽搐，震颤和共济失调等神经症状。鸡马立克氏病潜伏期一般3周～4周，根据疱疹病毒侵害部位不同，分为四种类型。神经型：患病鸡出现站立不稳，呈“劈叉”姿势，翅膀下垂，低头或斜颈等为典型症状。内脏型：常见于50日龄～70日龄的鸡，病鸡精神萎顿，食欲减退，消瘦，羽毛松乱，鸡冠苍白或黑紫色、皱缩，伴有黄白色或黄绿色下痢，常因脱水导致死亡。眼型：病鸡出现瞳孔缩小，虹膜边缘不整齐，颜色常为灰白色。轻者对光线强度的反应迟钝，重者失明。皮肤型：病鸡常出现毛囊肿大或皮肤结节。牛传染性鼻气管炎潜伏期7 天左右，根据疱疹病毒侵害部位不同，分为四种类型。呼吸道型：病牛体温升至40 ℃以上，鼻黏膜充血，出现散发性小脓疱，伴随咳嗽、呼吸困难、咽下障碍。结膜角膜炎型：病牛出现结膜和角膜充血，眼睑肿大，流泪，角膜浑浊，有坏死性斑点。生殖器型：病母牛体温升高，精神沉郁，食欲废绝，外阴肿胀有小脓疱；出现子宫炎导致流产，产死胎。公牛感染出现传染性脓疱型包皮龟头炎，丧失配种能力。脑膜炎型：以6月龄以内的犊牛易发，体温升高，出现惊厥，共济失调，角弓反张等现象。马鼻肺炎潜伏期2 天～10 天，马属动物出现鼻肺炎，孕畜流产，以及神经症状等。患病初期体温升高，流鼻液，鼻黏膜，眼结膜充血，下颌淋巴结肿大，同时血液中白细胞数量明显减少，感染严重者因呼吸困难而死亡。孕马或孕驴出现流产，或驴驹死亡。以1岁～2岁马或驴多发，3岁后呈隐性感染。实验室诊断猪伪狂犬病样品采集按照NY/T541规定，采集患病猪的鼻拭子、血液、肺脏、淋巴结、脑和扁桃体等组织。聚合酶链式反应（PCR）检测与电泳分析鉴于PRV的检测需要鉴别是野毒感染还是疫苗毒，取200 μL鼻拭子或病料组织的上清液借助商品化试剂盒制备DNA，以DNA为模板，借助特异性引物分别进行PCR扩增（引物序列见表1，其中gE引物用于野毒鉴别，gB引物用于常规检测），具体操作步骤按照附录A规定执行。目的片段大小为368bp或480bp。普通PCR引物信息名称序列（5’→3’）片段大小PRV-gE-FTTTGGATCCATGCGGCCCTTTCTG368 bpPRV-gE-RTTTGAATTCTTACGACACGGCGTCGCAPRV-gB-FAGGTGTCGTTGGTGGTGT480 bpPRV-gB-RACGGCGACCTGGACG实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测鉴于PRV的检测需要区分野毒感染还是由疫苗免疫造成，以5.2.1.2纯化的DNA为模板，利用特异性引物分别进行PCR检测（引物序列见表2，gE引物用于鉴别野毒，gB引物用于常规检测），qRT-PCR具体操作步骤按照附录B规定执行。荧光定量PCR引物信息名称序列（5’→3’）片段大小qPRV-gE-FCTGTACGTGCTCGTGATGAC96 bpqPRV-gE-RCTCCTTGRTGACCGTGACGqPRV-gB-FGTCCGTGAAGCGGTTCGTGAT95 bpqPRV-gB-RACAAGTTCAAGGCCCACATCTAC野毒分离与检测分析核酸电泳结果，或qRT-PCR结果，选取判定为猪伪狂犬病毒阳性的脑，肺脏或淋巴结等病料借助研磨仪匀浆后，经反复冻融3次后，5 000 rpm离心10 min。收集上清借助0.22 μm滤膜除菌后，接种至猪肾细胞（PK-15）中，同时添加1 000 IU/mL青霉素和1 000 μg/mL链霉素，设置空白对照组。37 ℃吸附后1h，换成3%FBSDMEM，放置培养箱3 天～5 天，每天借助倒置显微镜观察是否出现细胞病变（CPE）。数据处理分析将PCR产物借助1.0%核酸胶进行分析，参照DNA标准分子量，若待测样品中扩增出片段大小分别为368bp或480bp符合预期，且空白对照没有条带，将阳性片段克隆至pMD-18T载体，送生物公司测序，若测序的序列与NCBI公布的标准序列（参考附录C）同源性大于95%，则可确诊为猪伪狂犬病毒感染阳性，否则判定为阴性。qRT-PCR结果显示待检测样品Ct值大于35且无“S”型扩增曲线时判定为阴性，Ct值小于35且出现“S”型扩增曲线时判定为阳性。若PK-15细胞出现CPE，即细胞出现变圆、聚集、拉丝，并最终全部脱落。需进一步收取细胞提取DNA，借助上述特异性引物，进行PCR或qRT-PCR检测和测序确定，若易感细胞未出现CPE，应将细胞培养物冻融后盲传3代，若盲传后没有CPE出现，则判定为未分离到病毒。鸡马立克氏病采集病料样品采集患病鸡的血液、淋巴组织、脾脏组织或肿瘤细胞或羽髓匀浆等，参考NY/T541要求进行。PCR检测与电泳分析将待测病料样品借助试剂盒提取DNA，作为模板，借助特异性引物（序列参见表3）进行PCR检测，具体操作步骤参照附录A。将PCR产物利用1.0%的核酸胶进行电泳分析，目的片段大小为360 bp。qRT-PCR检测以5.2.2.2纯化的DNA为模版，利用特异性引物分别进qRT-PCR检测（序列参见表3），qRT-PCR具体操作步骤参照附录B。引物信息名称序列（5’→3’）片段大小MDV073-FATTTGATTCAGATTTTGTTTCT360 bpMDV073-RGCTGTTGTACATTCCGTTCGCGCqMDV073-FGTTTCTCCAGATTCCACCTC213 bpqMDV073-RTGCAACAATGCGTTCTTAT野毒分离与检测分析核酸电泳结果，或qRT-PCR结果，选取判定为鸡疱疹病毒2型阳性的病料组织借助研磨仪匀浆后，经反复冻融3次后，5 000 rpm离心10 min。收集上清借助0.22 μm滤膜除菌后，接种至鸭胚成纤维细胞（DEF）中，同时添加1 000 IU/mL青霉素和1 000 μg/mL链霉素，设置空白对照组。37 ℃吸附后1 h，换成3%FBSDMEM，放置培养箱3 天～5 天，每天借助倒置显微镜观察是否出现细胞病变（CPE）。数据处理分析PCR产物经1.0%核酸胶电泳分析后，参照DNA标准分子量，若待测样品中扩增出片段为360 bp，大小符合预期，且空白对照没有条带，将阳性片段克隆至pMD-18T载体，送生物公司测序，若测序的序列与NCBI公布的标准序列（参考附录C）同源性大于95%，则可确诊为鸡疱疹病毒2型感染阳性，否则判定为阴性。qRT-PCR结果显示待检测样品Ct值大于35，且无“S”型扩增曲线时判定为阴性，Ct值小于35，且出现“S”型扩增曲线时判定为鸡疱疹病毒2型感染阳性。若DEF细胞出现CPE，即细胞出现变圆、聚集、拉丝，并最终全部脱落。需进一步收取细胞提取DNA，借助上述特异性引物，进行PCR或qRT-PCR检测和测序确定，若易感细胞未出现CPE，应将细胞培养物冻融后盲传3代，若盲传后没有CPE出现，则判定为未分离到病毒。牛传染性鼻气管炎病料样品采集采集鼻拭子，血液，流产胎儿肺脏，生殖道分泌物等病料，按NY/T541要求进行。PCR检测将待测病料样品借助试剂盒提取DNA，作为模板，借助特异性引物（序列参见表4）进行PCR检测，具体操作步骤参照附录A。将PCR产物利用1.0%核酸胶进行电泳分析，目的片段大小为479 bp。qRT-PCR检测以5.2.3.2纯化的DNA为模板，利用特异性引物分别进行qRT-PCR检测（序列参见表4），qRT-PCR具体操作步骤参照附录B。引物信息名称序列（5’→3’）片段大小BoHV-1gB-FTACGACTCGTTCGCGCTCTC479bpBoHV-1gB-RGGTACGTCTCCAAGCTGCCCqBoHV-1gB-FCTGGCACACGACGGACGATG97bpqBoHV-1gB-FCGCCTCCACTTCTTCCACGATG野毒分离与检测分析核酸电泳结果，或qRT-PCR结果，选取判定为牛疱疹病毒1型阳性的组织病料借助研磨仪匀浆后，经反复冻融3次后，5 000 rpm离心10 min。取上清用0.22 μm滤膜除菌后，接种至牛肾细胞（MDBK）中，同时加入1 000 IU/mL青霉素和1 000 μg/mL链霉素，设置空白对照组。37 ℃吸附后1 h，换成3%FBSDMEM细胞培养液，放置培养箱3 天～5 天，每天借助倒置显微镜观察是否出现细胞病变（CPE）。数据处理分析PCR产物借助1.0%核酸胶进行分析，参照DNA标准分子量，若待测样品中扩增出片段大小为479 bp，符合预期，且空白对照没有条带，将阳性片段克隆至pMD-18T载体，送生物公司测序，若测序的序列与NCBI公布的标准序列（参考附录C）同源性大于95%，则可确诊为牛疱疹病毒1型感染阳性，否则判定为阴性。qRT-PCR结果显示待检测样品Ct值大于35，且无“S”型扩增曲线时判定为阴性，Ct值小于35，且出现“S”型扩增曲线时判定为牛疱疹病毒1型感染阳性。若MDBK细胞出现CPE，即细胞出现变圆、聚集、拉丝，并最终全部脱落。需进一步收取细胞提取DNA，作为模板，借助上述特异性引物进行PCR或qRT-PCR检测和测序确定，若易感细胞未出现CPE，应将细胞培养物冻融后盲传3代，若盲传后没有CPE出现，则判定为未分离到病毒。马鼻肺炎病料样品采集采集鼻拭子，血液，马或驴的流产胎盘，肺脏和脑等病料组织，按NY/T541要求进行。PCR检测将待测病料样品借助试剂盒提取DNA作为模板，借助特异性引物（序列参见表5）进行PCR检测，具体操作步骤参照附录A。将PCR产物利用1.0%核酸胶进行电泳分析，目的片段大小为792bp，482bp或316

bp。PCR引物信息名称序列（5’→3’）片段大小EHV-1gB-FGAACCTCAGCCAACCCA792 bpEHV-1gB-RGCACTTTGCGGACGAACEHV-4gB-FTTGCCGCAACTCGCTCGTCAAG482 bpEHV-4gB-FCTTAATCGCATTTAGACCGAEHV-8gG-FTCAGACTGTCACTCGTGGGA316 bpEHV-8gG-RCCTGAAGGCCGTTTAACACAqRT-PCR检测以5.2.4.2纯化的DNA为模板，利用特异性引物分别进qRT-PCR检测（序列参见表6），qRT-PCR具体操作步骤参照附录B。qRT-PCR引物信息名称序列（5’→3’）片段大小qEHV-1gB-FGCCATACGTCCCTGTCCGACAA302 bpqEHV-1gB-RCCTCCACCTCCTCGACGATGCqEHV-4gB-FCGCAGAGGATGGAGACTTTTACA78 bpqEHV-4gB-FCATGACCGTGGGGGTTCAAqEHV-8gG-FGACGCGTAACGTTGGATGTG178 bpqEHV-8gG-RAATGTAACGTTTGCCCACGC野毒分离与检测分析核酸电泳结果，或qRT-PCR结果，选取判定为马疱疹病毒（EHV-1/4/8）阳性的组织病料借助研磨仪匀浆后，经反复冻融3次后，5 000 rpm离心10 min。取上清用0.22μm滤膜除菌后，接种至兔肾细胞（RK-13）中，同时加入1 000 IU/mL青霉素和1 000 μg/mL链霉素，设置空白对照组。37 ℃吸附后1 h，换成3%FBSMEM，放置培养箱3 天～5 天，每天借助倒置显微镜观察是否出现细胞病变（CPE）。数据处理分析PCR产物借助1.0%核酸胶进行分析，参照DNA标准分子量，若待测样品中扩增出片段大小为792 bp，482 bp或316 bp，符合预期，且空白对照没有条带，将阳性片段克隆至pMD-18T载体，送生物公司测序，若测序的序列与NCBI公布的标准序列（参考附录C）同源性大于95%，则可确诊为马疱疹病毒1型，马疱疹病毒4型或马疱疹病毒8型感染阳性，否则判定为阴性。qRT-PCR结果显示待检测样品Ct值大于35，且无“S”型扩增曲线时判定为阴性，Ct值小于35，且出现“S”型扩增曲线时判定为马疱疹病毒1型，马疱疹病毒4型或马疱疹病毒8型感染阳性。若RK-13细胞出现CPE，即细胞出现变圆、聚集、拉丝，并最终全部脱落。需进一步收取细胞提取DNA，作为模板，借助上述特异性引物，进行PCR或qRT-PCR检测和测序确定，若易感细胞未出现CPE，应将细胞培养物冻融后盲传3代，若盲传后没有CPE出现，则判定为未分离到病毒。综合判定若患病动物（猪，鸡，牛，马或驴）出现呼吸困难，流产和神经症状等，则可判定为疑似α疱疹病毒感染，需借助PCR，荧光定量PCR进行检测，最后结合病原分离和测序等方法进行确诊。

（规范性）

聚合酶链式反应（PCR）检测与分析方法命名聚合酶链式反应（polymerasechainreaction，PCR），又称为无细胞分子克隆系统，简称PCR。原理体外聚合酶促合成特异DNA片段的一种分子生物方法，主要由高温变性（95 ℃）、低温退火（55 ℃）和适温延伸（72 ℃）等3个步骤反复的热循环构成。体系包含DNA聚合酶，引物，模板等，常设定为30个循环。试剂或材料商品化Taqpremix酶。对应靶基因的特异性引物。实验室用水参考GB/T6682。不同病原DNA模板。0.2 mL透明PCR管。AgaroseX脂糖。标准DNA分子量maker。仪器设备普通PCR仪器。核酸电泳仪。试验步骤配制PCR体系参照表A.1，同时设置空白对照（以水为模板，参照GB/T6682执行）。反应条件：95 ℃预变性3 min；95 ℃60 s，55 ℃30 s，72 ℃60 s，30个循环。72 ℃延伸10 min，4 ℃保存。PCR产物用1.0%核酸胶进行分析，待电泳结束，借助凝胶成像系统观察电泳结果。PCR体系配制反应体系组分体积μL2×PCRMix10上游引物（10 μM）1下游引物（10 μM）1模板2去离子水6总体积20

（规范性）

实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测命名实时荧光定量PCR（Quantitativerealtimepolymerasechainreaction，qRT-PCR）称定量即时聚合酶链锁反应。实验原理qRT-PCR是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应（PCR）循环后产物总量的方法，通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。实验试剂与耗材该实验所需耗材：商品化SYBRGreenqPCRMix酶，对应靶基因的特异性引物，实验室用水参考GB/T6682，不同病原DNA模板，透明八联管。该实验所需要的仪器：荧光定量PCR仪。实验步骤配制PCR体系参照表B.1，同时设置空白对照（以水为模板，参照GB/T6682执行）。反应条件：95 ℃预变性30 s；95 ℃10 s，60 ℃30 s，40个循环。溶解曲线：95 ℃15 s，60 ℃60 s，95 ℃15 s，借助定量PCR仪分析系统观察结果。qRT-PCR体系配制反应体系组分体积μLSYBRGreenqPCRMix10上游引物（10 μM）1下游引物（10 μM）1DNA模板1去离子水7总体积20

（资料性）

PCR和qRT-PCR目的基因序列猪伪狂犬病毒gE基因PCR参考序列（大小为368bp）TTTGGATCCATGCGGCCCTTTCTGCTGCGCGCCGCGCAGCTCCTGGCGCTGCTGGCCCTGGCGCTCTCCACCGAGGCCCCGAGCCTCTCCGCCGAGACGACCCCGGGCCCCGTCACCGAGGTCCCGAGTCCCTCGGCCGAGGTCTGGGACGACCTCTCCACCGAGGCCGACGACGATGACCTCAACGGCGACCTCGACGGCGACGACCGCCGCGCGGGCTTCGGCTCGGCCCTCGCATCCCTGAGGGAGGCGCCCCCGGCCCATCTGGTGAACGTGTCCGAGGGCGCCAACTTCACCCTCGACGCGCGCGGCGACGGCGCCGTGCTGGCCGGGATCTGGACGTTCCTGCCCGTCCGCGGCTGCGACGCCGTGTCG猪伪狂犬病毒gE基因qRT-PCR参考序列（大小为96bp）（用于鉴别野毒）CTGTACGTGCTCGTGATGACCCACAACGGCCACGTCGCCACCTGGGACTACACGCTCGTCGCCACCGCGGCCGAGTACGTCACGGTCAYCAAGGAG猪伪狂犬病毒gB基因参考序列（大小为480bp）（用于常规检测）AGGTGTCGTTGGTGGTGTGCCAGCCGCGGGTGCCGAGCGCGTTCAGGCGCGAGGGGCGCAGGTCCACCTCGACGGGGTTCTCGTCGCGGTCGAAGGCGGTCACCTTGTGGTTGTTGCGCACGTACTCGGCCTTGGAGACGCACTTGCCGCGGCGGTCGATCACGTCCGTGATCTCCTGCACGGGGACGGGCACGCGGTCCGTGAAGCGGTTCGTGATGGCCGCGTACGTGCTCCCGGACCACACGGTCGTGACGATGACGTTCTTGTAGTAGATGTGGGCCTTGAACTTGTGCGGGGCGATGTTCTCCTTGAAGAGCAAGGCGATCCCCTCCGTGAAGTTGCGCCCCTGCGAGTACTCGGGGCAGGCCTGCTCGGGCTCCAGGAGCACCACCGTGGAGCCGGACGGCGGCGGGCAGACGTAGAAGCGGTCCCGCTCGGTCGCGGCCGCGCGCACGGCCGTGCGCGCGTCCAGGTCGCCGT猪伪狂犬病毒gB基因qRT-PCR引物参考序列（大小为95bp）（用于常规检测）GTCCGTGAAGCGGTTCGTGATGGCCGCGTACGTGCTCCCGGACCACACGGTCGTGACGATGACGTTCTTGTAGTAGATGTGGGCCTTGAACTTGT禽疱疹病毒2型MDV073基因PCR参考序列（大小为360bp）ATTTGATTCAGATTTTGTTTCTCCAGATTCCACCTCCCCAGAATCCACTCCCCCAACGACAATGCCTGCACAGAAAGCCATTAACAAACATACAGTATCCCATAATGGTGTTTTTACGTCTGCCGTTCTACCGACTAACATACCAGCGAAAAATGACATGCACGATCCTAGTAATAATGATTTTGCAGAACAGATCAATGTAACCAGCATATAAGAACGCATTGTTGCATTCTCTGACTCCACGGATAGAATAGTACGGGGTCGTTGTACAAGAACCCGTTTTTTATTCAAATGCTCCCCCAATATATTTGGGTTTTGTCTTTCGGCCAGCATTAATGCGCGAACGGAATGTACAACAGC禽疱疹病毒2型MDV073基因qRT-PCR参考序列（大小为213bp）GTTTCTCCAGATTCCACCTCCCCAGAATCCACTCCCCCAACGACAATGCCTGCACAGAAAGCCATTAACAAACATACAGTATCCCATAATGGTGTTTTTACGTCTGCCGTTCTACCGACTAACATACCAGCGAAAAATGACATGCACGATCCTAGTAATAATGATTTTGCAGAACAGATCAATGTAACCAGCATATAAGAACGCATTGTTGCA牛疱疹病毒1型gB基因PCR参考序列（大小为479bp）TACGACTCGTTCGCGCTCTCGACCGGGGACATTATCTACATGTCGCCCTTTTACGGGCTGCGCGAGGGCGCGCACCGCGAGCACACCAGCTACTCGCCGGAGCGCTTCCAGCAGATCGAGGGCTACTACAAGCGCGACATGGCCACGGGCCGGCGCCTCAAGGAGCCGGTCTCGCGGAACTTTTTGCGTACACAGCACGTGACGGTAGCCTGGGACTGGGTGCCCAAGCGCAAAAACGTGTGCTCGCTGGCCAAGTGGCGCGAGGCGGACGAAATGCTGCGAGACGAGAGCCGCGGGAACTTCCGCTTCACGGCCCGCTCGCTCTCGGCGACCTTTGTGAGCGACAGCCACACCTTCGCGTTGCAGAATGTGCCGCTGAGCGACTGCGTGATCGAAGAGGCCGAGGCCGCGGTCGAGCGCGTCTACCGCGAGCGCTACAACGGCACGCACGTGCTGTCGGGCAGCTTGGAGACGTACC牛疱疹病毒1型gB基因qRT-PCR参考序列（大小为97bp）CTGGCACACGACGGACGATGTGTACACGGCGCTGGGCTCGGCGGGGCTCTACCGCACGGGCACCTCTGTGAACTGCATCGTGGAAGAAGTGGAGGCG马疱疹病毒1型gB基因PCR参考序列（大小为792bp）GAACCTCAGCCAACCCAAGATGGTGTGCATAGAGAACAAATTCTACATCGCTTGCACAAACGAGCAGTGGAGGCAACGGCAGGTACCGATTCTTCCAACGTCACCGCCAAACAGCTGGAGCTCATCAAAACCACGTCGTCTATCGAGTTTGCCATGCTACAGTTTGCATACGATCACATCCAATCCCACGTCAATGAAATGCTAAGTAGAATAGCAACTGCGTGGTGTACCCTCCAAAACAAAGAGCGGACCCTATGGAACGAAATGGTGAAGATTAACCCGAGCGCCATAGTCTCCGCAACCCTTGACGAGCGAGTTGCAGCGAGGGTCCTGGGGGACGTGATAGCTATAACGCACTGCGCCAAAATAGAGGGCAACGTGTACTTGCAAAACTCCATGCGCTCGATGGACAGTAACACGTGCTACTCCCGCCCCCCCGTAACATTTACAATTACTAAGAATGCAAACAACAGAGGGTCGATAGAAGGCCAGCTGGGAGAGGAGAACGAGATTTTCACGGAGCGCAAGCTGATCGAGCCGTGCGCCCTCAATCAGAAGCGCTACTTTAAGTTTGGCAAAGAGTACGTTTACTACGAGAACTACACGTTCGTCCGCAAAGTGCCCCCCACGGAAATCGAGGTTATCAGCACGTACGTTGAACTAAACTTGACCCTTTTGGAAGACCGCGAGTTTCTGCCCCTGGAGGTGTACACGCGGGCTGAGCTGGAGGACACCGGCCTGCTAGACTACAGCGAAATACAGCGCCGCAACCAGCTCCACGCTCTCAGGTTTT马疱疹病毒1型gB基因qRT-PCR参考序列（大小为302bp）GCCATACGTCCCTGTCCGACAGATACAATGACAGGGTTCCGGTTTCGGTGGAGGAGATCTTCGGTCTCATCGACAGTAAGGGAAAATGTTCGTCAAAGGCCGAGTACCTCAGAGATAACATCATGCACCACGCGTACCACGACGACGAGGACGAGGTGGAGCTTGATTTGGTGCCGTCCAAGTTTGCAACTCCGGGGGCCAGAGCCTGGCAGACCACCAACGATACTACGTCTTACGTGGGGTGGATGCCATGGAGGCACTACACGTCAACGTCTGTC