基于深度测序技术的非侵入性胎儿染色体非整倍体检测

中南大学湘雅医院产前诊断中心

湖南家辉遗传专科门诊部

邬玲仟

染色体非整倍体定义：体细胞染色体数目增加或减少一条或数条的个体类型：a.单体型：2n-1；X，21，22号丢失常见。b.三体型：2n+1；常染色体13、18、21三体常见，性染色体三体型有XXX、XXY、XYY。c.多体型：仅见于性染色体；如48，XXXX49，XXXYY。21三体综合征唐氏综合征（Down’sSyndrome，DS）先天愚型足月新生儿最常见的染色体疾病，发病率1/700至今没有根治方法我国每年约2000万新生儿,每年约有26600个DS儿出生。我国有大约60万以上的DS患者。特殊面容：面部扁平、鼻梁低平、眼距宽、外眦上斜、内眦赘皮、张口吐舌等智力障碍：患者智商（IQ）通常为30～60。生长发育迟缓和肌张力减退：出生体重偏低，肌张力低下，身材矮小，短颈，颈背皮肤松垂，手短而宽、通贯掌、小指弯曲等。至少1/3的患者伴发先天性心脏病。十二指肠闭锁和气管食管瘘等伴发症也较其它疾病常见。患白血病的风险为正常人群的15倍。临床表现18三体综合征18三体综合征是次于先天愚型的第二种常见染色体三体征。新生儿发生率约为1/7500。主要临床表现:智力障碍、生长发育迟缓、胸骨短、严重的心脏畸形以及肌张力亢进等。颅面部的畸形包括小颌畸形、枕部突出、小耳以及低位耳等。双手呈特征性的握拳状，摇椅足。13三体综合征发病率为1/20000～25000。主要临床表现：严重的中枢神经系统畸形，内脏畸形，颅面部的畸形，手足畸形等；13三体综合征21三体综合征二级预防模式早孕期筛查：NT+PAPP-A中孕期筛查：二联、三联或四联得到最终的风险值产前诊断母亲血清标记物和超声筛查的可信度结合母亲年龄的三联筛查，唐氏综合症检出率:~65%，假阳性率:4.5-5.0%增加抑制素A，可以将检出率增加到75%结合母亲年龄的NT测量，21三体检出率：77%，假阳性率：5%.结合生化分析和颈透明度的唐氏综合症的检测检出率可以达到89%，假阳性率：5%.WapnerR,etal.(2003)First-trimesterscreeningfortrisomies21and18.NEnglJMed349:1405–1413血清学筛查存在的问题染色体综合征侵入性产前诊断侵入性产前诊断的利与弊47,XY,+21利：目前金标准弊：a）一定的流产风险：1%b）报告周期长：1个月c）孕妇和家属承受较大思想压力

主要参考文献：TaborA,etal.RCTofamniocentesisin4606lowriskwomen.Lancet1986;1:1287-93全国妇幼卫生检测办公室的调查显示2007-2009年全国产筛4097801人，21三体高风险176130人，产前诊断的93504人，确诊为21三体胎儿6679例。产前诊断服务量不能满足需求基于FISH的产前诊断优点：所需样本量少，检测周期短（24h-48h）。缺点：价格昂贵，通量小。基于定量PCR的产前诊断优点：①所需样本量少，检测周期短（24h）。②价格便宜，通量大。缺点：对于嵌合型21三体，定理PCR可能会出现假阴性，样本中母血的污染也会影响结果的判断。目前快速产前诊断方法的利弊主要参考文献：Fetalcf-DNAdetectedviaYchromosome。LoYMetal.,Lancet1997母体血浆DNA的存在形式分娩后母体cffDNA快速降解Loetal.AmJHumGenet1998;62:768cffDNA半衰期16.3min，2h后检测不到VS

母血胎儿细胞持续存在数年血浆DNA的高母体DNA背景血浆母体DNA母体DNA高背景带来的检测难度血浆101121染色体3体带来的微量DNA变化采集母体血浆提取血浆DNA制备测序文库在第二代测序仪上测序测得的序列与人的参考基因组比对并作统计分析抽取外周血分离血浆文库制备生物信息分析新一代测序研究结果检测结果总结假阴性：0/28=0%假阳性：0/373=0%47,XY,+21[26]/46,XY[24]：Z=4.7746,XX,der(21;21)+21:Z=9.59T21检测结果假阴性：0/3=0%假阳性：0/398=0%假阴性：0/12=0%假阳性：0/389=0%T13检测结果T18检测结果X/Y染色体检测结果非侵入性，避免流产，