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GXASDetectionofAnimal-originChlamydiaI本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定1动物鹦鹉热衣原体实时荧光PCR检测方法本文件规定了动物鹦鹉热衣原体实时荧光PCR检测方法涉及的术语和定义、原理、试剂和材料、仪GB/T6682分析实验室用水规格MOMPmajoroutermembrane根据Cps基因特定序列的保守片段，合成一对特异性引物和一条特异性的荧探针两端分别标记一个荧光报告基团和一个荧光淬灭基团。当PCR扩增时，探针被酶切降解，使荧光报2针对CpsMOMP基因保守序列设计引物和探针，预期扩增产物大小为145bp。引物和探针序列详见附5.4质粒提取试剂盒6.6冰箱：2℃~8℃和-20℃及以下用无菌棉拭子采集喉头、泄殖腔、眼眶分泌物，浸入1使用真空管（含EDTA抗凝剂）采集动物全血2mL～5mL，密封后冷藏，并于24h内送至实验室立即取适量采集的组织样品置于组织匀浆器中充分研磨，加入灭菌的0.1mol/LPBS（pH7.4）制备10%组织匀浆液。3000r/min离心10min。取上清液，做好标识，立即进行Cps核酸检测或-20℃及以下储39.1核酸提取9.2核酸扩增9.2.1扩增体系PremixExTaq(ProbeDNA模板9.2.2扩增条件），9.3.1阴性对照采用含有Cps特定基因保守序列的重组质粒p-Cps作为阳性对照。重组质粒标准品p-Cps制备方法与4FAM-TTACCTATAACGGCTGGAACAACA-B5采用人工合成的方法合成一段含有CpsMOMP基因特定保守靶序列，该靶序列包含本文件5.3中引物受态细胞，挑取重组子菌落经PCR鉴定正确，采用质粒抽提试剂盒提取质粒，测算浓度，即构建成重组TCAAGCCCAGCACAATTTGTGATTCACAAACCAAGAGGCTATAAAGGAGCTAGCTCGAATTTTCCTTTACCTATAACGGCTGGAAGAAGCTACAGACACCAAATCAGCTACAATTAAATACCATGAATGGCAAGTAGGCCTCGCCCTGTCTTACAGATTGAATATGCTTGTTCCATATA
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