亲和层析法纯化蛋白质虚拟仿真软件操作手册

亲和层析法纯化蛋白质虚拟仿真软

件操作手册

(VI.0)

目录

1.背景概述1

2.系统登录1

3.实验介绍模块2

4.实验操作模块5

5.实验评价模块错误!未定义书签。

6.实验报告模块19

1.背景概述

“亲和层析法纯化蛋白质虚拟仿真实验”，是基于嘉兴学院核心课程进行设计开发虚拟

仿真软件。在专业建设方面，由于进口层析设备费用昂贵，维护困难等原因。本着“以虚补

实”的教学宗旨，故针对亲和层析法纯化蛋白质实验进行仿真开发。仿真软件不仅弥补了教

学方面的缺失，也同M满足了学生随时随地的进行操作实习的需求，而不再受困于场地和设

备的局限。也丰富了老师的教学手段，为人才目标的实现起到了保驾护航的作用！

2.系统登录

>在文件夹或者桌面双击软件程序图标e打开进入系统界面；

>在系统登录界面输入对应账号（admin）和密码（123456）.点击登录系统.

>系统登录成功后将直接跳转到软件模块登录接口界面（若无法进入该界面或无法登陆等

情况请于技术人员联系）；登陆成功界面如图所示:

3.实验介绍模块

实验介绍模块包括：实验原理、亲和层析的特点、实验常见问题及解决方案、实验设备介绍

等内容。

>点击进入实验介绍模块后，如图所示:

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♦>实弱原理

亲和层析是利用生物大分子所具有的专一亲和力而设计的纯化技术。6个组氨

酸残基组合的融合标签（His-tag）在原核蛋白表达中的应用最为显著。His-tag可

结合在目的蛋白的C末端或N末端，形成特殊的结构，使之与金属离子发生相互作

用，从而对蛋白质进行亲和纯化。

1/5

>点击》后进行下一页查看，如图所示:

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♦)避和居所的特点

亲合层析具有配体简单、吸附量大、分离条件温和、通用性强等特点，所以可

选择范围广，高盐，存在变性剂以及去垢剂的上样条件下进行纯化，His-Tag正渐

成为分离纯化蛋白质最有效的技术之一。His-tag作为蛋白纯化时的首选标签，其

优势在于：

1.N-端的His-Tag与细菌的转录翻译机制兼容，有利于蛋白表达；»

2.His-tag对目的蛋白本身特性几乎没有影响，不会改变目的蛋白本身的可溶性和

生物学功能；

3.His・tag非常小，在融合蛋白结晶后对蛋白的结构没有影响；His-tag的免疫原性

相对较低，可将纯化的蛋白直接注射入动物体内进行免疫并制备抗体；

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•＞益和居所的特点.

4.与其它亲和标签构建成双亲和标签，并可应用于多种表达系统；

His-tag融合蛋白的适用范围也较广，既可以在非离子型表面活性剂存在的条件下

/纯化,也可以在变性条件下进行纯化。前者通常用来纯化疏水性强的目的蛋白，＞

X而后者则通常纯化包涵体蛋白。'

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♦>］实典常见问题及解决方案

蛋白不吸附:是本实验最常见的问题，通常的原因有

①是标签不暴露，被折叠在蛋白的结构内，可以在变性的条件下去纯化，

②可以选择作用力更强，配基密度更高的填料

③样品的pH过低或者沉淀导致不能吸附，所以样品和缓冲液的pH要尽量一致，避免沉淀。

④加吐温可以可以降低表面张力，同时也可以降低疏水相互作用力了，使蛋白不会因为别

的作用力而被吸附到柱子上，同时增强了洗脱能力。

⑤缓冲液条件不正确，检查漂洗缓冲液的pH值和组成，逸保体系中不含鳌合剂及还原剂。

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PDF文档

A查看至实验设名介绍，点击1―，依次单击查看相关PDF文档。

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>视频操作内容点击"，进行视须观看及暂停:

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4.实验操作模块

实验操作内容主要由层析实验、电泳实验两部分组成。

>在软件主界面单击实验操作按钮，进入实验操作模块:

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>实现操作引导如下图所示示:

X

I操作帮助向前移动

按下井拖拽

点击物品控制方向

Esc退出场景进行操作

W

Tab切换人称视角

ASD

向左移动

向后移动向右移动

Ctrl第一人称视角蹲下

1.通过键盘w、A、S、D键进行对应的前、左、后、右方向的移动操作；Tab键可进行

第一人称与第三人称切换；Ctrl键在第一《孚华军可以蹲下，降低视角。

2.按住鼠标右键，上下左右拖动，可进行视角的修正；按住鼠标左键可进行触发操作。

3.工具栏：实骐步骤中涉及清洗工具、物料桶、其他辅助设备均在工具栏获取

4.全屏模式：界面右下角箭头按钮或快捷键P可切换至全屏，获得最好体验

根据左下角步骤提示和实时箭头引导，进行交互操作，鼠标右键为功能触发健，左键为

功能执行键:

根据引导完成样品的准备工作。

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>上样前进行开机、装柱、装缓冲液。

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>根据理论教学内容填写正确的洗脱液组分:

>按照引导文字进行上样处理。

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>学习查看相关知识点。

>学习亲和层析原理:

>查看亲和层析图谱:

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>正确填写电泳样品的成分比例;

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>电泳样品的配置:

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■

>电泳上样:

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>安装电泳仪:

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>调节电压开始电泳:

>拆洗电泳板:

>剥离电泳胶:

>染色处理:

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>摇床染色2小时:

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>染色液回收:

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>脱色40min处理:

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4

>杳看条带:

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5.实验评价模块

实验评价模块主要由实验评价试题组成。

>在软件主界面单击实验操作按钮，进入实验评价模块:

>试题由单选、多选题组成，在选择答案后进行提交:

6.实验报告模块:

实验报告模块主要统计实验操作和实验评价中