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T/CVMA168—2024鸡传染性支气管炎病毒QX型荧光RT-PCR检测方法Real-timeRT-PCRfordetectionofinfectiousbronchitisvirusgenotypeQX2024-7-4发布2024-7-4实施中国兽医协会发布I疫病预防控制中心、四川省动物疫病预防控制中心、北京市动物疫病预1本文件适用于鸡咽喉拭子及气管、肺脏、肾脏、输卵管等组织中鸡传染性支气管炎病毒QX型的核2规范性引用文件IBV：鸡传染性支气管炎（InfectiouPBS：磷酸盐缓冲液（PhosphateBufferSolution）PCR：聚合酶链式反应（PolymeraseCRNA：核糖核酸（RibonucleicAcid）I荧光染料。当它与DNA双链结合时，发出荧光，从DNA双链上释放出来时，荧光信号急剧减弱。2除另有规定外，所有试剂均为分析纯，实验用水应符合高速冷冻离心机、电子天平、荧光定量PCR仪、-20℃8样品的采集处理及储存8.1.1样品的采集8.1.1.1咽喉拭子8.1.1.2组织样品8.1.2样品的处理8.1.2.1咽喉拭子的处理将装有棉拭子的离心管反复振荡，使用高速冷冻离心机3000r/min离心15min，取上清液待检。8.1.2.2组织样品的处理样品注明采样点名称、样品名称、编号及样品数量置于-80℃超低温冰箱9RNA的提取39.1若选用Trizol裂解法提取病毒RNA，参照以下步骤进行：9.2若使用RNA试剂盒提取病毒RNA，则按试剂盒说明书进行操作。11.1实验前20min从-20℃低），12.2盖紧PCR反应管盖，瞬时离心30s。转移至扩增区。4s，共40个循环，在每次循环进入退火时收集荧光。检测结束后，根据扩增曲线和Ct值判定结果。荧5引物序列根据已报道的QX型鸡传染性支气管炎病毒的S1基因物信息与基因片段大小如表A.1所示。6阳性对照制备方法：人工合成QX型IBVS1pMD19-T-QX，使用无核酸
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