梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒(酶联免疫法)标准操作规程

PAGEPAGE6医院检验科免疫室梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）标准操作规程文件编号：生效日期：年月日版本：第1版第页，共页检验申请单独检验项目申请：梅毒螺旋体抗体（缩写TPELISA）测定。临床医生根据需要提出检验申请。标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2ml，不抗凝，置普通试管中，或采用含分离胶的真空采血管。也可采集血浆，用肝素、EDTA或枸橼酸盐抗凝。2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。2.1.5下列标本为不合格标本2.1.5.1标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。2.1.5.2对检测结果可能有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。2.1.5.3无法确认标本与申请单对应关系的。2.1.5.4其他如标识涂改、标本试管破裂等。2.2标本保存2.2.1接收标本后在置1-2h后将标本离心分离出血清或血浆，避免溶血。离心必须达到3000rpm15min，离心后的血清中不能含有颗粒物和微量纤维蛋白。2.2.2标本保存时间：室温（15-25℃）下可稳定48h，普通冰箱中（2-8℃）稳定7d，在-20℃最多可保存4周。避免反复冻融。不可使用热灭活的标本。2.2.3已完成测试的标本保持完整的识别号，置4-8℃冰箱内保存7d。2.3标本采集的注意事项采血前使受检者保持平静、松弛，避免剧烈活动。医院检验科免疫室梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）标准操作规程文件编号：生效日期：年月日版本：第1版第页，共页3．方法原理本试剂盒用梅毒螺旋体抗原包被反应板，用梅毒螺旋体抗原标记辣根过氧化物酶，应用双抗原夹心法原理，检测人血清或血浆样本中的梅毒螺旋体抗体。4．试剂及其他用品4.1试剂：梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒，由上海科华生物技术有限公司出品，试剂盒药品批准文号：国药准字S20010057(96人份)。未打开的试剂盒保存于2-8℃，不可冻存。微孔反应板打开包装后，应立即将未试用的板条装入有干燥剂的自封袋中密封，置2-8℃避光保存。未使用完的酶结合物、阳性对照、阴性对照、洗涤液、显色剂A、显色剂B和终止液，在没有其他试剂污染的情况下，保存于原试剂瓶，并拧紧瓶盖，置2-8℃中避光保存，可使用至标签标识有效期。4.2试剂盒组分微孔反应板阴性对照阳性对照酶结合物显色剂A显色剂B终止液洗涤液（蒸馏水1：25稀释）说明书封片4.3其他试剂及用品加液器：型号。离心机：型号。温箱（或水浴箱）：型号。洗板机：型号。酶标仪：型号。5．室内质控与室内质控规则医院检验科免疫室梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）标准操作规程文件编号：生效日期：年月日版本：第1版第页，共页5.1质控品：采用卫生部临床检验中心临床免疫室免疫质控血清，浓度mIU/ml。5.2质控品重建方法：采购来的质控品按每周用量分装-20℃冻存，复融后充分颠倒混匀。5.3质控品测定：在每一次（板）标本中测定质控血清。5.4质控规则：绘制质控图，求出SD和CV值。6．标本检测步骤（1）洗涤液配制：将浓缩洗涤液用蒸馏水（或去离子水）作1：25稀释。（2）加样：加入100μl待测样本和阴、阳性对照于反应孔中（共预留5孔做为对照孔，建议设阴性对照3孔、阳性对照1孔、显色剂空白对照1孔，用户也可自行调整。）。用封片覆盖反应板后，将反应板置37℃孵育60分钟。（3）洗板手工洗板：弃去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置30-60秒，甩干，重复5次后，在干净的吸水纸是上拍干。洗板机洗板：采用洗板机洗板，选择洗涤5次程序，用配置的工作浓度洗涤液注满每孔，每次工作浓度洗涤液在反应微孔中的停留时间为30-60秒，并确保每次吸净无残留，洗完后在干净的吸水纸上拍干。（4）在已加入待测样本和阴、阳性对照的孔中加入100μl酶结合物。混匀，用封片纸覆盖反应板，置37℃孵育30分钟。（5）重复操作步骤（3）。（6）显色：每孔加显色剂A液、B液各50微升，充分混匀后封板，置37℃孵育30医院检验科免疫室梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）标准操作规程文件编号：生效日期：年月日版本：第1版第页，共页 分钟。（7）终止：在所有孔内加入50μl终止液，振荡反应板5秒钟，使之充分混匀。（8）比色：使用酶标仪，波长450nm。（建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630nm或630相近的波长。若需扣除显色剂空白，则先用显色剂空白对照孔校零，然后读取各孔OD值。）比色须在10分钟内完成。7．结果判断：Cutoff值计算：COV=阴性对照平均OD值+0.100当S≥COV，说明该待测样本梅毒螺旋体抗体结果为阳性。当S＜COV，说明该待测样本梅毒螺旋体抗体结果为阴性。8．检验结果的报告及范围8.1结果的报告8.1.1结果经审核后，确认准确无误后发出报告。8.1.2报告单上标明结果的参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签名，并有与申请单相同的信息。8.1.3如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。8.2临界值：对临界值标本或阳性标本再以双孔重复试验确定它的结果。如果重复检测都是临界性结果的标本建议对其进行跟踪检测。9．操作性能9.1从冷藏环境中取出的试剂盒需平衡至室温后方可使用，余者应按前述方法保存和使用。在平衡试剂的同时，待测样本需平衡至室温后再行测试。9.2使用前试剂应摇匀。医院检验科免疫室梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）标准操作规程文件编号：生效日期：年月日版本：第1版第页，共页9.3显色过程必须封片。所有封片纸不能重复使用。9.4结果判断须在反应终止后10分钟内完成。9.5不同批号的试剂不可混用。9.6洗板机洗板时应时常检查加液头，确保其畅通无堵塞；洗板时所用的吸水纸请勿反复使用。洗板机的管路用纯化水冲洗，以防堵塞和腐蚀。9.7本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。10．参考范围及医学决定水平阴性结果：提示没有检测到梅毒螺旋体特异性抗体。11．临床意义11.1检测血清中梅毒特异性抗体11.2晚期梅毒，梅毒螺旋体转阴，反应素反应也常减退或转阴，只有特异性梅毒血清反应。11.3对于特异性抗体反应，晚期梅毒和梅毒治愈后仍保持阳性，IgG抗体在体内持续存在。12．结果审核以及分析与相关项目的联系12.1由资深专业人员负责检验结果的审核。12.2审核者认真审核每