DB4505T 0006-2023 岛礁海参生态增殖技术规范

4505TechnicalspecificationforecologicI 1 1 1 2 2 2 2 2 2 2 3 38生态增殖 38.1苗种转运 38.2适应性驯化 38.3底播增殖 4 4 4 411效果评估 4 4 5 512管理 5附录A(规范性)海参生态增殖放流情况记录表 6附录B(资料性)基于环境DNA的海参丰度计算 7 7 7 7 7附录C(资料性)基于微卫星分子标记的海参增殖群体回捕占比率计算 9 C.6海参回捕抽样样本的遗传区分及回 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定1岛礁海参生态增殖技术规范GB/T12763.6海洋调查规范第6部分：海洋SC/T9401.11水生生物增殖放流技术规程第11部分：投放生态增殖ecologicalenhanc适应性驯化adaptivedome通过播撒底栖生物苗种到适合的海底生境中，利用天然生产力增加放流种群产量的过从环境样本中提取的所有DNA的集合，包括环境微生物以及从生物体上脱落下来的活细胞DNA和因24海域选择4.1自然条件类的海参，筛选确定海参生态增殖的海域。增殖海域应生态环4.2海水理化条件表1增殖海域海水理化因子要求糙刺参(S.horrens)、玉足海参(Holothurialeucospilota)和糙海参(H.scabra)。6种苗培育及苗种要求6.2用于生态增殖的参苗应活力强、外观无损伤、无畸形、规格整齐。规格应符合表2的要求。表2生态增殖海参苗种规格规格等级g/头小规格中规格7苗种检验检疫3规格合格率≥90%以上，死亡个体比例、伤残采用PCR方法对引起海参腐皮病的弧菌病原进行检测，无病害8生态增殖8.1苗种转运a)在参苗运输桶或塑料袋内加入清洁海水，加水量不超过容器体积的2/3;制在小规格参苗150头/L或中规格参苗100头/L或大规格参苗50头/L;内充入纯氧，氧气与水体体积比为1:3,并用宽橡皮筋轧紧袋口；e)将运输桶或塑料袋放入转运车内，运送至待增殖海域。将海参苗种运输至待增殖海域后，在海域浅水区放置规格为2m×2m×2m的沉水式小型网箱，使其底部与海底接触，每个网箱可暂养小规格参苗4万头或中规格参苗3万头或大规格参苗2万头，暂养时间为3d,暂养期间每天观察参苗的摄食和存活情况。8.3底播增殖8.3.1底播时间8.3.2底播天气选择晴朗、多云或阴天进行海参底播生态增殖，海面最大风力≤5级，气温≤35℃。8.3.3运输船及暂养桶配置移动式增氧泵，可平稳放置暂养桶。暂养桶体积为100L~300L,每个暂养桶放置增氧气石1个，桶48.3.4苗种运输以抄网将参苗从暂养网箱内捞至装有清洁海水的暂养桶内，密度控制在小规格参苗150头/L或中规格参苗100头/L或大规格参苗50头/L,运输至底播预定海域。8.3.5苗种底播船速：2m/s~4m/s,投放密度：0.1头/m²~0.2头/m²,苗种底播按照SC/T9401.11中的方法进行，记录投放中心位点的经纬度、投放数量和覆盖范围，填写海参增殖放流情况记录表(见附录A)。9增殖容量不超过增殖海域历史上礁栖海参最大捕捞产量的2倍。10海参丰度监测10.1潜水员和设备按GB/T12763.6的规定进行潜水员配备和设备准备。10.2潜水断面设置在生态增殖海域每平方公里设置1个监测断面，断面应均匀分布于生态增殖海域，每个断面宽1.2m,直线距离50m,断面设置方法为：在监测海域内，通过潜水设定起点，沿礁石走向拉皮尺至终点，起点到终点总距离为50m。10.3丰度监测与计算潜水员沿皮尺方向进行断面内海参调查，观察到的海参个体均计入海参数量，并根据海参形态辨别海参种类，进行断面内海参数量统计。调查海域的海参丰度计算见公式(1):Asc——调查海域的海参丰度，单位为头/hm²;S;——第i个断面内观察到的海参数量，单位为头。11效果评估11.1基于海参丰度的增殖效果评估11.1.1生态增殖实施一年后，潜水调查海参丰度，基于海参丰度的生态增殖效果评估值(Ro)计算见Ro——生态增殖效果评估值，用%表示；Ao₂——实施一年后生态增殖海域的海参丰度，单位为头/hm²;511.1.2按照表4的分级标准，进行海参生态增殖效果的分级评估。表4基于海参丰度的生态增殖效果评估分级增殖效果评估分级优良差11.2.1生态增殖实施一年后，调查增殖海域底层海水中的生态增殖种类海参DNA丰度(方法见附录B),基于环境DNA的海参生态增殖效果评估值(RE)计算见公式(3):RE生态增殖效果评估值，用%表示；11.2.2按照表5的分级标准，进行海参生态增殖效果的分级评估。表5基于环境DNA的海参生态增殖效果评估分级增殖效果评估分级优良差11.3基于增殖群体回捕占比率的增殖效果评估参增殖群体回捕占比率的计算方法(见附录C)计算增殖群体回捕占比率(Ra)。11.3.2按照表6的分级标准，进行海参生态增殖效果的分级评估。表6基于增殖群体回捕占比率的海参生态增殖效果评估分级增殖效果评估分级优良差6pH7分别针对所有用于生态增殖的海参种类的线粒体COI基因或基因组DNA特异区域设计种特异性qPCR!=6.02×10#×$%&⁄(660×&!)×10'(·········································(B.1)ST——质粒浓度，单位为拷贝/μL；CON——质粒检测浓度，单位为μg/μL；NT——质粒碱基数量，单位为bp。用本文件B.1设计的特异性引物进行qPCR扩增，以测得的扩增循环数(Ct值)为纵坐标，以质粒浓度的对使用标准采水器收集海参生态增殖海域的底层海水，每个点采集膜对底层海水进行过滤，剪碎滤膜，采用海洋动物组织基因组DNA提取试剂盒对滤膜上的生物样本进行B.4.2环境DNA的qPCR扩增及增殖种扩增体系为20μL，测量样品Ct值，通过标准曲线，求得Ct值8在调查海域至少设置采样点6个，采集采样点海域的底层海水500mL，提取环境DNA，并按照本文件B.4.2的方法对样品中生态增殖种类海参的DNA进行定量，底层海水中生态增殖种类海参DNA丰度的计算）：=∑∑)⁄+··························································a——生态增殖的海参种类个数；AEij——调查海域第i个采样点底层海水中第j种生态增殖种类海参DNA丰度，单位为拷贝/mL。9样本采集后，用剪刀剪取一块200mg～500mg的海参体壁组织，置于10mL离心管中，加入5mL95%采用常规的海洋动物组织基因组DNA提取试剂盒提取海参样本DNA，DNA浓度≥50ng/μL，对于每个用于生态增殖的海参种类，分别筛选具有种特异性的高度多态性SSR标记。筛选方法为：采集不同地理分布的各种海参群体，进行基因组测序并利用MISA软件分别查找具有地理差异的各种海组中分别筛选出20个～30个具有高度多态性伸6min。采用遗传分析仪对PCR扩增产物进行分型，获得所有海C.6海参回捕抽样样本的遗传区分及回捕占比利用本文件C.5的分型结果，通过GenAIEx6.51b2和原生种群间的遗传距离，如某一种类海参回捕抽样样本与该种类增殖苗种群体具有相似的分子遗传特征，且聚为一类时，可确定其为该种类增殖群统计每种海参回捕抽样样本中增殖群体的回捕个体数，计算海参增殖群