T-GXAS 488-2023 A型塞尼卡病毒与O型、A型、亚洲I型口蹄疫病毒鉴别检测方法_第1页
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GXASI 2 2 2 2 3 3 4 2本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定1A型塞尼卡病毒与Ο型、A型、亚洲I型口蹄疫病毒鉴别检测多重RT-PCR和多重qRT-PCR法NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范FMDV：口蹄疫病毒（Foot-andRT：反转录（ReverseTranscripPCR：聚合酶链反应（PolymeraseChainReactRT-PCR：反转录聚合酶链反应（ReverseTranscriptionPolymerqRT-PCR:实时荧光定量反转录聚合酶链反应（QuantitativeRealCt值：每个反应管内的荧光信号量达到设定的阈值时所经历的循环数（Cyc的多重RT-PCR。经反转录酶的作用，从RNA合成cDNA，再以cDNA为模板，在DN接受的荧光信号，通过标准曲线对未知模板进行定量分2应按照普通PCR仪和实时荧光PCR仪的不同型号选取合适的PCR和qRT-PCR扩增试剂。组织样品、水泡液、食道-咽喉分泌物(Ο-P液）等样品采集按NY/T541执行。9.1反转录（RT）39.2.1反应体系的配制加完试剂后瞬时离心混匀。将PCR反应管置于普通PCR仪内，设置如下反应参数：94℃3min；用重组质粒pSVA-3D、pΟ-VP1、pAs412.1.2.1当阴性对照无任何扩增带，而阳性对照在460bp、320bp、24注：多重RT-PCR检测电泳图见图A.1根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正5ACAAGGCCCTCCATCTAGCCCCACGCACGTCATTGACACCCGCGCCGCGAGAGACCAGCCCAAGAGCACCCAAACCCACGGCGGTCTTGTGTGGTGTC6TTAAAGAATTTGGAAGCCAAACAGATTGCAGCTTCTCGAGTAGCY5-CCTACTTCAAACCAGGAAAACAGCTGAGGAYTTYGTGAGCFAM-AACGGTTCTTCAAAACCCACCTGTT-BHTXR-TGCCCCAGGCCACTACTGGCA-BJOE-CGAAAACATCACTGAGCTGCTGATCCG-7

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