地标-标准文本-混合型饲料添加剂中解热镇痛类药物测定技术规范

ICS65.120CCSB46DBDeterminationofFourAntipyreticandAnalgesicDrugsinmixedfeedadditives:paracetamol,dipyrone,aminopyrineandantipyrine20××-××-××发布20××-××-××实施上海市市场监督管理局发布DB/T××××—20XX本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由上海市农业农村委员会提出，上海市畜牧业标准化技术委员会提出并归口。本文件起草单位：上海市动物疫病预防控制中心。本文件主要起草人：1DB/T××××—20XX混合型饲料添加剂中解热镇痛类药物测定技术规范本标准规定了混合型饲料添加剂中对乙酰氨基酚、安乃近、氨基比林、安替比林四种解热镇痛类药物的检测试验的基本要求（包括样品前处理要求、仪器要求、结果判定等）。本标准适用于指导混合型饲料添加剂中对乙酰氨基酚、安乃近、氨基比林、安替比林四种解热镇痛类药物的高效液相色谱法和液相色谱-串联质谱法分析试验。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T20001.5标准编写规则第5部分：规范标准GB/T23182饲料中兽药及其他化学物检测试验规程GB/T27417合格评定化学分析方法确认和验证指南GB/T20195动物饲料试样的制备3术语和定义GB/T27417-2017、GB/T32467-2015中界定的术语和定义适用于本标准。4采样和样品制备按GB/T14699规定的方法和程序进行采样。采样对象只限于混合型饲料添加剂。按GB/T20195制备样品，至少200g，粉碎使其全部通过0.425mm孔径的试验筛，充分混匀，装入密闭容器中，备用。5样品前处理要求5.1对照品溶液的制备精密称取目标对照品适量，用甲醇或者其他适宜溶剂配制成浓度合适的溶液，作为液相色谱法及液相色谱-串联质谱法的对照品溶液。5.2供试品溶液的制备一般包含提取、净化、富集/稀释等操作。首先称取样品细粉适量，用甲醇或者其他适宜溶剂（超声）定量溶解，净化，滤过，精密量取续滤液定量稀释（稀释倍数要确保不造成仪器污染或光谱图失真即得；液体制剂量直接精密量取或称取适量，稀释，即得。对于含有高浓度的有机盐和乳化剂等存在强烈的基质效应辅料的产品，应适当增加前处理步骤。提取效率可用以下方法进行试验：a)用阳性的标准物质或水平测试的阳性样品进行试验；b)阳性样品用同一溶剂反复提取，观察被分析物的浓度变化；c)用不同提取技术或不同提取溶剂进行比较。6仪器要求2DB/T××××—20XX6.1液相色谱—二极管阵列法高效液相色谱法本标准色谱条件与系统适用性试验根据可疑添加物性质，参照药品国家标准、兽药国家标准或者兽药残留检测方法标准的条件自建。6.2液相色谱—串联质谱法液质联用条件根据可疑添加物性质自建，采用离子扫描（SRM）或多反应监测（MRM）。定性离子对选用兽药残留检测方法标准中的定性离子对或者符合至少4个识别点数的要求。6.3液相色谱—高分辨质谱法本标准中所使用的高分辨质谱仪在执行目标物筛查确认程序时应符合实际分辨率不小于20000[质荷比(m/z)等于200,按半峰宽(FWHM)计］，质量准确性相对偏差不大于5ppm(m/z等于200)的基本要求；在同时执行非目标物分析程序时应符合实际分辨率不小于70000(m/z等于200,按FWHM计质量准确性相对偏差不大于3ppm(m/z等于200)的基本要求。仪器应定期进行校准调谐，确保筛查过程中处于正常工作状态，达到以上要求。参考条件见附录A。7结果判定7.1定性7.1.1液相色谱法：分别记录对照品和供试品溶液的色谱图与光谱图；通过与对照品液相色谱图保留时间、光谱图的比对，确定供试品溶液中是否含有疑似目标添加物。在供试品和对照品浓度接近的情况下，供试品色谱图中如出现与对照品峰保留时间一致的色谱峰（差异不大于±2.5%）；在一定的波长范围内，两者光谱图无明显差异；最大吸收波长一致（差异不大于±2nm），判为检出。7.1.2液相色谱串联质谱法：分别记录对照品和供试品溶液中的特征离子质量色谱图；通过与对照品溶液色谱图保留时间、离子丰度比的对比，确定供试品溶液中是否含有可疑添加物。供试品色谱图中如出现与对照品峰保留时间一致的色谱峰（差异不大于±2.5%）；供试品离子丰度比应与对照品的一致，判为检出。7.1.3液相色谱高分辨质谱法：分别记录对照品和供试品溶液中的液相色谱图及一级质谱图与二级质谱图；通过与对照品溶液色谱图保留时间、质谱图的对比，确定供试品溶液中是否含有可疑添加物。结果判定：供试品色谱图中如出现与对照品峰保留时间一致的色谱峰（保留时间相对偏差不大于2.5%供试品质谱图与对照品的应一致（包括分子离子和至少一个碎片离子，质量数差异小于等于5ppm），判为检出非法添加物。供试品与对照品分子离子峰的质量数偏差不大于5ppm，且二级质谱图与对照品的二级质谱图一致，判为检出。具体要求应符合表1判定条件。表1目标物确认判定条件判别项判定条件保留时间化合物的保留时间应至少大于死时间的2倍。目标物与参考标准品以相同条件测定所获保留时间的绝对偏差应不大于0.2min。质量准确性一级母离子的mlz相对偏差亥5ppm;二级子离子的mlz相对偏差10ppm;当mlz<200时，其绝对偏差应<1mDa。DB/T××××—20XX同位素峰应将确认样品调整至适当的进样浓度确保主要同位素峰可测，同位素峰的mlz应符合目标物确认的质量准确性要求。碎片相对离子丰度比比较二级碎片质谱图，其主要碎片离子有2个或2个以上符合表中质扯准确性要求，且其相对离子丰度比符合表3的最大允许偏差要求。7.2定量通过定性判别确认为目标物后，用标准曲线或者单点校准方式计算目标物含量。按照试剂空白、样品空白、标准曲线、试样的顺序进样测定。标准曲线至少6个点（包括零点）均匀分布于线性范围内，其最低点应低于或等于方法定量限对应的浓度；定量方法的线性回归方程相关系数不低于0.99。(资料性)参考条件4DB/T××××—20XX1.1前处理参考条件平行做两份试验。称取试样2g（精确至0.01g于50mL离心管中，准确加入25mL甲醇，涡旋1min，振荡提取20min，9000r/min离心5min，准确移取上清液5mL于10mL棕色容量瓶中，用甲醇定容，混匀，微孔滤膜过滤，待测。1.2液相色谱参考条件液相色谱参考条件如下：a)色谱柱：C18柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒径5.0μm，或性能相当者；b)柱温：40℃;c)检测波长：245nm；d)流速：1.0mL/min；e)进样量：20μL。f)流动相：A相为磷酸盐缓冲液（取磷酸氢二钠3.0g，加水1000mL，用磷酸调pH值至7.0B相为乙腈，梯度洗脱程序见表1.1。表1.1梯度洗脱程序%%2.1前处理参考条件提取：平行做两份试验。称取试样2g（精确至0.01g），于50mL离心管中，准确加入20mL甲醇，涡旋1min，振荡提取20min，于9000r/min离心5min，准确移取0.5mL上清液于10mL离心管中，加入2.5mL0.1%甲酸溶液，涡旋混匀。备用。净化：依次用3mL甲醇（5.2.2）和3mL水活化固相萃取小柱（5.2.10），取备用液（5.5.1）全部过柱，用3mL水淋洗，抽干小柱，用3mL5%氨水甲醇溶液（5.2.5）洗脱，收集洗脱液于50℃下用氮气吹干，准确加入2.5mL甲醇（5.2.2），涡旋溶解，过膜（5.2.11），待测。净化过程需全程避光操作。2.2液相色谱参考条件液相色谱参考条件如下：a）色谱柱：C18柱，柱长100mm，内径2.1mm，粒径1.7μm，或性能相当者；b）流动相：A相为0.1%甲酸溶液（5.2.6）,B相为乙腈（5.2.3）,梯度洗脱程序见表2；c）柱温：35℃;d）流速：0.3mL/min；e）进样量：2μL。DB/T××××—20XX表1.2梯度洗脱程序%%2.3质谱参考条件注意：安乃近在提取净化过程中全部转化为4-甲氨基安替比林，故使用4-甲氨基安替比林作为安乃近的标记物定量。质谱参考条件如下：a)