新版高中生物第二节 一 微生物的培养技术及应用

第二节微生物的培养技术及应用一微生物的基本培养技术人教版（2019）

高中生物选择性必修三学习目标阐明微生物的基本培养技术，简述微生物培养基的配方，举例说明微生物纯培养。1.文化基础：微生物培养的条件和提纯。2.自主发展：掌握微生物的实验室培养和提纯3.社会参与：运用相关技术解决生产生活中有关实际问题从社会中来食用自制酸奶导致肠胃不适屡见不鲜发酵物混入杂菌葡萄酒变酸1．培养基人们按照微生物对_________________的不同需求，配制出供其___________________的营养基质。一、培养基的配制营养物质生长繁殖按物理性质分类液体培养基：不含凝固剂、曾液体状态的培养基固体培养基：呈固体状态的培养基（加入凝固剂：如琼脂）2．培养基的种类标准培养基类型配制特点主要应用物理状态固体培养基加入琼脂较多菌种分离,鉴定,计数半固体培养基加入琼脂较少菌种保存液体培养基不加入琼脂工业生产，连续培养成分合成培养基由已知成分配制而成，培养基成分明确菌种分类、鉴定天然培养基由天然成分配制而成，培养基成分不明确工业生产,降低成本用途，功能鉴别培养基添加某种指示剂或化学药剂菌种的鉴别选择培养基添加（或缺少）某种化学成分菌种的选择，分离碳源氮源凝固剂3．培养基的营养组成各种培养基一般都含有水、_________、_________和无机盐等营养物质，此外还需要满足微生物生长对_________、特殊营养物质以及_________的需求。例如：乳酸杆菌霉菌细菌厌氧微生物培养基特殊处理碳源氮源PHO2添加维生素调至酸性调至中性或弱碱性提供无氧条件培养基的成分及功能营养物质作用功能主要来源碳源能为微生物代谢提供碳元素构成生物体的细胞物质和一些代谢产物，有些是异养生物的能源物质无机碳源：CO2、NaHCO3等；有机碳源：糖类、脂质、蛋白质、有机酸等氮源能为微生物的代谢提供氮元素合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物无机化合物：N2、NH3、铵盐、硝酸盐等；有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨等水是生命活动所必需的不仅是优良的溶剂，而且可维持生物大分子结构的稳定外界摄入无机盐为微生物提供除碳、氮以外的各种重要元素，包括大量元素细胞内的组成成分，生理调节物质，某些化能自养菌的能源，酶的激活剂无机化合物二、无菌技术1．获得纯净的微生物培养物的关键：防止___________________。2．消毒和灭菌消毒和灭菌主要工作包括两个方面：（1）对操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。（2）将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。杂菌污染（4）避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。（3）为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行相关仪器高压蒸汽灭菌锅干热灭菌箱超净工作台比较消毒和灭菌

消毒灭菌概念使用较为____________的物理、化学或生物等方法杀死物体________或内部一部分微生物使用___________的理化方法杀死物体内外__________的微生物，包括_______________。常用方法________消毒法、巴氏消毒法、化学药物消毒法、紫外线消毒法__________灭菌、干热灭菌、__________灭菌适用对象操作空间、双手等接种环、接种针、玻璃器皿、培养基等温和表面强烈所有芽孢和孢子煮沸湿热灼烧常用方法对象作用消毒煮沸消毒法：在100℃下煮沸5-6min一般物品巴氏消毒法：70-75℃煮30min或在80℃下煮15min一些不耐高温的液体,如牛奶化学药剂消毒法如酒精擦拭双手，氯气消毒水源等紫外线消毒法：30W紫外灯照射30min。照射前，适量喷洒石碳酸或煤酚皂溶液等消毒液，可以加强消毒效果接种室、接种箱、超净工作台等消毒的具体方法杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢杀死绝大多数微生物，不破坏牛奶营养成分使微生物的蛋白质变性，失去正常功能而死亡杀死物体表面或空气中的微生物常用方法对象作用灭菌灼烧灭菌：酒精灯火焰的充分燃烧层接种工具，如接种环、接种针或其他金属用具干热灭菌：160-170℃下加热1-2h能耐高温的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具高压蒸汽灭菌：压力为100kPa，温度为121℃下灭菌15-30min培养基的灭菌(2)灭菌的具体方法：杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子3．用于生物消毒的微生物具有什么特点？1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？提示：无菌技术还能有效避免操作者被微生物感染。2．对培养基、培养皿、接种环、实验者的双手、空气和牛奶常采用的灭菌或消毒方法分别是什么？提示：分别为高压蒸汽灭菌、干热灭菌、灼烧灭菌、化学药物消毒、紫外线消毒、巴氏消毒。提示：用于生物消毒的微生物能产生杀死其他微生物的代谢产物或是寄生性的微生物。思考与讨论培养物纯培养物纯培养概念三、微生物的纯培养将接种于培养基内，合适条件下形成的含特定种类微生物的群体由单个体繁殖所获得的微生物群体获得纯培养物的过程酵母菌的纯培养(1)菌落：分散的微生物在适宜的________________表面或内部可以繁殖形成肉眼可见的、有一定形态结构的___________________。

固体培养基子细胞群体菌落特征：大小、形状、光泽度、颜色、透明度等。鉴定菌种的重要依据平板划线稀释涂布平板(2)获得单菌落的方法：________________法和_________________法。配置培养基：称取去皮马铃薯200g切块,加水1000mL,煮烂，用纱布讨滤,加20g________，15—20g_________用蒸馏水定容至1000mL。灭菌：配制好的培养基转移到锥形瓶中进行___________灭菌；培养皿进行灭菌。倒平板：待培养基冷却至______0C，在__________附近倒平板①制备培养基②接种和分离通过_________在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步__________到培养基的表面。③培养酵母菌完成平板划线后，待菌液被培养基吸收，将接种后的平板和______的平板________，放入280C左右的__________的培养24—48h.葡萄糖琼脂高压蒸汽50酒精灯火焰接种环稀释分散未接种倒置恒温培养箱（3）方法步骤：4.倒平板的具体操作①拔出锥形瓶的棉塞。提示：500C，酒精灯火焰附近②将瓶口迅速通过该火焰③用拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，将培养基（10-20ml)倒入培养皿，立即盖上皿盖。④等待培养基冷却凝固后，将培养皿倒过来放置。5.平板划线法的具体操作①将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环的金属丝烧红。②在火焰旁冷却接种环。同时，拔出装有酵母菌培养液的试管的棉塞。③将试管口通过火焰。④在火焰附近用接种环蘸取一环菌液。⑤将试管口通过火焰，并塞上棉塞。⑥在火焰附近将皿盖打开一条缝隙，用接种环在培养基表面迅速划三至五条平行线，盖上皿盖。⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第一次划线的末端开始作第二次划线。重复以上操作，作第三、四、五次划线。注意不要将最后一次划线与第一次的划线相连。④划线用力要大小适当，防止用力过大划破培养基。(1)平板划线法的注意事项：①接种环的灼烧：a．第一次划线前：杀死接种环上的微生物，避免污染培养物。b．每次划线前：杀死残留菌种，保证每次划线菌种来自上次划线末端。c．划线结束后：杀死残留菌种，避免污染环境和感染操作者。②灼烧接种之后，要冷却后再进行操作，以免温度太高杀死菌种。③划线时最后一区域不要与第一区域相连。提示：未接种的培养基是不能有菌生长的,如果有菌生,长则说明受到污染或者灭菌不彻底.不仅表面不能有菌生长,内部也不能有菌生长.正确的做法是:配好培养基之后，将培养基放在温箱里培养24小时观察,长菌的培养基应该丢弃，无菌生长的方能使用.这样做的另一个好处是将培养基上的水气和培养基表面的水蒸发干,不会对细菌培养产生影响。1.在未接种的培养基表面是否有菌落生长?如果有，说明了什么?2.如果你观察到了不同形态的菌落，你能分析出可能是由哪些原因引起的吗?提示：培养基灭菌不彻底或接种过程中感染了杂菌。思考与讨论四、练习与应用1．下列关于灭菌和消毒的说法不正确的是(

)A．灭菌是指杀死环境中的所有微生物，包括芽孢和孢子B．灭菌和消毒实质上是相同的C