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3715ThetechnicalprotocolofproductionandpreservationforfreshsemenofdezhouI本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定术推广服务中心、聊城市东昌府区畜牧兽医事业传良、于杰、李玉华、王守山、刘文强、王涛、1德州驴鲜精生产与保存技术规程精液离心液semencentrifugat24基本要求4.1供精公驴4.3采精频率4.4采精时间4.5采精场所4.6处理室设置有精液质检区、平衡稀释区、分装区、鲜精保存区，室内温度22℃~25℃,避免光线直4.7器材设备4.8工作人员37.4采精员右手持假阴道，假阴道外口端斜朝向地面，站在公驴右前侧。待公驴爬跨时，左手轻扳阴4），离心10min～15min。去除上清液，将各离心管中的粥状精液用保存液进行最后稀释。精液稀释按两步 X··························V0——采精量mL；C——精子密度，单位为108个每毫升m——精子快速前进活力%；0.7——精液离心后精子的回收系数；V1——每头份的体积，单位为毫升（mL）9精液分装9.2装精液用的瓶或管选用对精子无毒9.4标明公驴号、生产日期、生产单位和有效保存时间。5A.1精液离心液A液配方成份A.2精液离心液配制方法A.2.1A液：用校准的电子天平依次称取所需药品，用灭菌超纯水定容至100mL，配置完成后经0.22A.3精液保存液配方及配制方法A.3.1选取新鲜无疫病鸡蛋，用75%酒精进行表面消毒，待酒精挥发完毕后抽取内部卵黄；A.3.2卵黄与离心液1:4混合，2800rpm/min离心A.3.3C液：离心液=1:3~1:7混合，得精液保存液，4℃保存，保存时间不超过14d。67取稀释后精液一小滴，滴于洁净载玻片(B)一端，用另一边缘光滑的盖玻片(A)与有样品的载玻片呈35°夹角，将样品均匀地涂布于载玻片上，自然风干，每样品制作二个抹片。C.2固定在已风干的抹片上滴上1.0mL～2.0mL中性福尔马林(浓度3.2%)固定液(也可将风干后的抹片反扣在带有平槽的有机玻璃面上，把固定液滴于槽和抹片之间，让其充满平槽并使抹片接触固定液),C.3染色槽并使抹片接触染液，染色1.5h后用清水缓缓冲去染液，晾干待检。C.4镜检将制备好的抹片在显微镜(400X~600X)下观察，每个抹片观察200个以上的精子(分左、右二个区),取二片的平均值，二片的变异系数不得大于20%,

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