DB37T 2959-2017 甲砜霉素粉添加磺胺二甲嘧啶的测定 高效液相色谱法　

DB37DB37/T2959—2017甲砜霉素粉添加磺胺二甲嘧啶的测定高效液相色谱法山东省质量技术监督局发布IDB37/T2959—2017本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由山东省畜牧兽医局提出并管理。本标准由山东省畜牧业专业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：山东省兽药质量检验所。本标准主要起草人：高迎春、徐恩民、杨修镇、李淑花、陈玲、王燕、薄永恒、魏秀丽、刘少宁、1DB37/T2959—2017本标准规定了甲砜霉素粉中添加磺胺二甲嘧啶的高效液相色谱(HPLC)测定方法。本标准适用于甲砜霉素粉中添加磺胺二甲嘧啶的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。光谱对照定性，外标法定量。4试剂或材料4.1乙腈(CH₃CN):色谱纯。4.2冰乙酸(CH3COOH):优级纯。4.3氢氧化钠溶液(0.1mol/L):称取氢氧化钠4g(准确至0.01g),加水溶解，转移至1000mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。4.427%乙腈：量取乙腈27mL,置100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。4.50.2%冰乙酸溶液：吸取冰乙酸(4.2)2.0mL,置1000mL容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，4.6乙腈+0.2%冰乙酸溶液(27+73):量取乙腈(4.1)270mL与0.2%冰乙酸溶液(4.5)730mL,4.8磺胺二甲嘧啶对照品：含量≥98%。注：除非另有规定，所用试剂均为分析纯；水符合GB/T6682一级水的规定。5仪器设备5.1高效液相色谱仪：配二极管阵列检测器。5.2分析天平：感量0.00001g、0.0001g、0.01g。2DB37/T2959—20176试验步骤6.1对照品溶液的制备称取磺胺二甲嘧啶对照品(4.8)50mg(准确至0.01mg),置50mL容量瓶中，加0.1mol/L氢氧化钠溶液(4.3)5.0mL并用27%乙腈(4.5)稀释至刻度，摇匀，精密量取5mL置50mL容量瓶中，用27%乙腈稀6.2供试品溶液的制备化钠溶液(4.3)5.0mL溶解，用27%乙腈(4.5)稀释至刻度，摇匀，精密量取5mL置50mL容量瓶中，用27%乙腈稀释至刻度，摇匀，待测。6.3仪器参考条件6.3.1液相参考条件色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，4.6mm×250mm,5μm,或性能相当者；流动相：乙腈+0.2%冰乙酸溶液(27+73)(4.6);流速：1.0mL/min;柱温：25℃;6.3.2二极管阵列检测器参考条件定性采集波长范围：200nm～400nm;定量波长：270nm。6.4.1定性测定通过保留时间和色谱峰的紫外光谱相对照定性。样品溶液与对照品溶液保留时间的相对偏差不大于2.5%;样品溶液色谱峰的紫外光谱与对照溶液色谱峰的紫外光谱特征峰一致，则可判断样品中存在磺胺二甲嘧啶，典型的磺胺二甲嘧啶光谱图参见图A.1。6.4.2定量测定取供试品溶液和对照品溶液各10HL注入液相色谱仪，在上述色谱条件下进行测定，提取270nm波长处的色谱图，外标法定量，典型的色谱图参见附录A.2～A.3。7试验数据处理样品中磺胺二甲嘧啶的含量(mg/g)按下式计算：3DB37/T2959—2017X——供试品中磺胺二甲嘧啶的含量，单位为毫克每克(mg/g);Cx——供试品溶液中磺胺二甲嘧啶浓度，单位为微克每毫升(μg/mL);Cs——对照品溶液中磺胺二甲嘧啶浓度，单位为微克每毫升(μg/mL);Ax——供试品溶液中磺胺二甲嘧啶峰面积；As——对照品溶液中磺胺二甲嘧啶峰面积；m——供试品取样量，单位为克(g)。测定结果用平行测定的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。8检测方法的灵敏度、准确度和精密度本方法的检出限为0.03mg/g(甲砜霉素粉规格5%)、0.10mg/g(甲砜霉素粉规格15%),本方法的报告限为1mg/g(甲砜霉素粉规格5%)、3mg/g(甲砜霉素粉规格15%)。8.2准确度本方法在150mg/g~600mg/g添加浓度水平上的回收率为95%～105%。8.3精密度本方法重复性测定条件下，两次测定结果的相对偏差≤2%。4(资料性附录)光谱图和色谱图光谱图和色谱图见A.1～A.3。3.692提取的0.900.80266.60.700.600.400.300.200.100.00220.00240.00260.00280.00300.00DB37/T2959—2017320.00340.00360.00380.00400.00图A.1磺胺二甲嘧啶光谱图蜂十…3.687蜂十…3.6870.60足0.103.00ZZ图A.2磺胺二甲嘧啶对照品色谱图5D