微生物快速检测技术的发展现状课件

微生物快速检测技术的发展现状华粤行仪器有限公司邹黎明华粤行仪器有限公司微生物快速检测技术的发展现状常见微生物检测项目常规微生物项目：细菌总数、大肠菌群、大肠杆菌、酵母总数、霉菌总数致病微生物项目：沙门氏菌、李斯特菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌O157：H7、弯曲杆菌、致病弧菌、副溶血弧菌、志贺氏菌、假单胞菌等华粤行仪器有限公司微生物快速检测技术的发展现状政府检测机构为什么需要微生物快速检测？日益严峻的食品安全局势的需要提高检测效率节约人力资源成本与国际接轨微生物快速检测技术的发展现状企业为什么需要微生物快速检测？市场销售环节要求快速出货。尤其是一些保质期较短的产品。减少物流的压力，尽可能减少仓存，加快资金周转。节约人力资源成本（外资企业尤其突出）对于运行HACCP质量保证体系的企业来说，快速检测方法尤其重要。可以快速检测原料及半成品的污染情况，以采取相应的措施控制最终产品的微生物超标情况。微生物快速检测技术的发展现状快速方法势在必行国外许多政府检测机构都在大量使用快速检测方法，尤其是ATP法、免疫法、阻抗法和显色培养基法在国外应用相当成功。国内的许多政府检测机构也都已经在使用或正在考虑使用国外先进的快速检测技术。从长远发展趋势来说，快速方法是微生物检测的一大方向。微生物快速检测技术的发展现状常规微生物快速检测技术现状传统计数改良法：1、螺旋平板计数法：螺旋接种仪＋菌落计数2、滤膜法：常用于一些可过滤样品的检测。3、纸片法：培养基固体在载体上。省去制做培养基的时间。主要用于细菌总数检测。4、其它：如Simplate即用胶,改良MPN产品。华粤行仪器有限公司微生物快速检测技术的发展现状螺旋平板法DWS螺旋平板接种仪aColyte自动菌落计数仪微生物快速检测技术的发展现状螺旋平板原理平皿旋转接种针往外移动同时自动将样品稀释1000倍微生物快速检测技术的发展现状螺旋平板法的优缺点优点：与传统方法相比，无需稀释3个梯度，每个梯度倒2个平板，节省了大量人力物力。缺点：检测时间并没有缩短，菌落总数仍需要培养48小时。需要配合自动菌落计数仪，否则人工计数更麻烦。微生物快速检测技术的发展现状滤膜法滤膜法常用于可过滤样品的微生物检测。优点：灵敏度增大，菌落无扩散情况，便于计数。缺点：需要额外的支出购买真空泵，多联支架及一次性滤膜；如果抽滤过程空气洁净度不够，有可能造成二次污染，尤其是对菌数要求特别严格的产品，如啤酒，澄清果汁，桶装饮用水等。微生物快速检测技术的发展现状皿膜法—以纸片法为代表纸片法是目前被广泛接受的方法。国标餐具大肠菌群采用的就是纸片法。优点：无需制备培养基，携带方便，非漫延菌落计数较方便。缺点：不能节省检测时间。检测成本相对偏高。大肠菌群纸片存在与MPN法无法对应的问题，金黄色葡萄球菌纸片存在取样量太低的问题。目前仅细菌总数纸片有一些用户。微生物快速检测技术的发展现状其它即用胶，MPN改良法Simplatecolilert主要用于水样或澄清样品的大肠菌群或大肠杆菌检测微生物快速检测技术的发展现状常规微生物快速检测技术现状快速检测微生物数量的新方法：1、ATP法：目前产品较多，如CHARM，Biotrace,…..等。2、电化学法：Sy-Lab公司Bactrac4300，Tempo,…3、颜色变化：如梅里埃的Bact/Alert和Foss的MicroFoss。4、流式细胞技术及激光扫描技术5、其它：热量法，放射测量法华粤行仪器有限公司微生物快速检测技术的发展现状表面洁净的检测方法微生物学法：纸片、琼脂板、棉签拭子、海绵拭子非微生物学法（快速法）：ATP(三磷酸腺苷，蛋白质,降解糖、NADP(辅酶II)，其它。微生物快速检测技术的发展现状ATP---三磷酸腺苷ATP来源于细菌酵母霉菌生物膜组织残留废弃物污染人的污染微生物快速检测技术的发展现状1.

人接触设备或器具2.设备或器具被污染3.清洗不正常4.非正常的敏感物污染5.微生物污染ATP存在表明什么？微生物快速检测技术的发展现状检测原理荧光素荧光素酶腺苷一磷酸氧合荧光素荧光微生物快速检测技术的发展现状ATP法两大用途1、用于食品、化妆品和药品企业对生产线和管道进行快速清洁程度检测。政府检测机构用ATP方法缺乏法律依据。ATP法与微生物数量没有必然的联系。2、改良后用于食品、化妆品的商业无菌检测或终产品检验。微生物快速检测技术的发展现状LUM－T清洁程度快速检测微生物快速检测技术的发展现状PocketSwab

Plus<30

秒获得结果取样混合检测微生物快速检测技术的发展现状LUM-T的独特优势CHEF熟肉制品成熟度检验MicroQ水中微生物污染程度检测Cidelite杀虫剂残留初筛Paslite牛奶巴氏消毒效果Somalite体细胞计数SL/MRLtest抗生素残留检测（连接ROSA

imager)微生物快速检测技术的发展现状基于ATP原理的用于成品检测的

微生物检测系统Charm

LUM-96（用于UHT产品）BiotraceCelsis（主要用于化妆品）Millipore公司的MicroScan微生物快速检测技术的发展现状Celsis和LUM-96保温2天，检测30分钟（96个样）微生物快速检测技术的发展现状ATP法检测成品的优缺点优点：LUM-96通常用于进行商业无菌检测。可大大缩短库存时间，减少物流压力和成本。缺点：ATP方法需要消耗大量的较昂贵的试剂，对仪器的清洗保养要求特别高。另外，客户通常怀疑假阴性的可能，特别是用ATP单个检测代替常规微生物和致病微生物检测，其风险是一定存在的。(如保温增菌时间不够，菌数未达到一定数量，取样量太小，由于培养基原因，目标致病菌未大量增菌等原因)微生物快速检测技术的发展现状Millipore公司最新推出的MicroStar微生物快速检测技术的发展现状MicroStar的原理及局限性MicroStar快速微生物检测系统是结合了生物荧光、膜过滤及CCD荧光照相检测等技术的新型检测系统.可过滤样品经膜过滤后，将菌截留在特殊的滤膜上，滤膜放置在培养基表面增菌后取出，加ATP释放剂，然后加荧光素和荧光素酶，显示的荧光信号在荧光显微镜或荧光检测器下观察并计数。微生物快速检测技术的发展现状MicroStar的优缺点优点：缩短培养时间，提高灵敏度。适合于菌数较低的可过滤产品使用。缺点：仪器较昂贵，运行成本也非常贵。不能用于检测未知的可能菌数较高的样品(不知稀释多少倍，因菌数必须稀释至80个左右)。整个检测时间还不够快，通常需16小时以上。微生物快速检测技术的发展现状电化学方法(电导率法或电阻抗法)奥地利Sylab公司的Bactrac4300和Biotrac4200梅里埃公司的Bactometer和Tempo英国Multhus公司(已倒闭)英国DWS公司的Rabit……微生物快速检测技术的发展现状外观比较Bactrac4300梅里埃的BactoMeterDWS公司的Rabit马色斯120微生物快速检测技术的发展现状世界上最好的电化学微生物快速检测产品

Bactrac4300系统Sy-lab—Bactrac4300常规微生物项目快速检测技术微生物快速检测技术的发展现状MicroFoss(Biosys)微生物自动监测仪微生物生长导致培养基pH值发生变化，由光学检测器检测底部琼脂层的颜色变化，记录达到突变点的时间。微生物快速检测技术的发展现状Microfoss的特点与阻抗法类似，可以实现快速检测。缺点：需要购买原厂的预装培养基，应用范围受限制，成本高昂。因此在我国目前还没有用户。微生物快速检测技术的发展现状梅里埃的BacT/Alert微生物检测仪基于微生物生成产生CO2的原理。CO2积累越多，底部的CO2传感器变黄，由LED发射一束光至底部，探头检测反射光的强度。光强度与微生物数量有一定关系。方法较新，用户还需要一个过程了解。微生物快速检测技术的发展现状FOSS公司

BactoScanFC牛奶中总菌数快速检测仪采用流式细胞原理。对微生物进行核酸染色，用流式细胞技术进行计数微生物快速检测技术的发展现状BactoScanFC的优缺点优点：速度快(50-150样品/小时)缺点：死活细胞一起检测，消耗成本较高，仪器比较难保养。灵敏度不够高。适合牛奶企业检测原奶中细菌总数。微生物快速检测技术的发展现状美国Chemunex公司

微生物快速检测系统美国Chemunex公司将流式细胞技术与活细胞荧光探针标记及激光扫描技术相结合，推出的最新一代的速度更快的Bactiflow以及更高端的ScanRDI和D-count微生物快速检测仪。其最大的特点是只检测活细胞数，速度极快，处理量大。与FOSS的BactoScanFC检测死活细胞都检测不同。是目前国际上正在认可的生物荧光定量检测微生物数量的两种方法之一。另一种是Millipore的一款叫MicroStar的基于ATP检测的产品。华粤行仪器有限公司微生物快速检测技术的发展现状荧光酶标记原理华粤行仪器有限公司

直接单细胞标记(包括孢子)

细胞无增菌要求标记在90分钟内完成直接对活细胞和酵母进行标记微生物快速检测技术的发展现状标记的细菌微生物快速检测技术的发展现状标记后的酵母微生物快速检测技术的发展现状标记后的霉菌微生物快速检测技术的发展现状ChemScanRDI华粤行仪器有限公司微生物快速检测技术的发展现状三个简单的步骤2.标记3.激光扫描1.过滤微生物快速检测技术的发展现状检测步骤-TVC

1.过滤2.标记3.激光扫描样品过滤预标记60min滤膜转移ChemScanRDI

™仪器分析标记30min微生物快速检测技术的发展现状ChemScanÒRDI

主机激光扫描分析仪3分钟分析时间结果直接显示细胞个数微生物快速检测技术的发展现状Laserscanning微生物快速检测技术的发展现状MicroscopeConfirmation微生物快速检测技术的发展现状ClientPortfolio-Pharmaceutical-USA-USA-USA-USA-USA-EUROPE-EUROPE-EUROPE-EUROPE-EUROPE-EUROPE-EUROPE-EUROPE-EUROPE-EUROPE-EUROPE-EUROPE-JAPAN-JAPAN-JAPAN-JAPANJOHNSON&JOHNSON(M)MERCK(M)BAUSCH&LombALCONLONZAWYETHNOVARTIS(M)ASTRAZENECAPARKEDAVISPFIZERINSTITUTPASTEURAVENTISROCHE(M)SANOFI(M)SMITH&NEPHEWGLAXOSMITHKLINE(M)SERONODAIICHITORIIFUJISAWACHUGAI……(M)=multi-siteinstallation140ChemScansystemsinstalled

DRINKINGWATERAGBARAnglianWater,Ondeo,ThamesWater,Vivendi,Dordmund,Tokyo,…SEMICONDUCTORSIBM,Siemens,TI,…微生物快速检测技术的发展现状流式细胞计数技术

用于非过滤产品流式细胞:

线性流体

单细胞分析

灵敏的检测头微生物快速检测技术的发展现状Bactiflow适合实验室或研究用日处理量不大于40个样品华粤行仪器有限公司微生物快速检测技术的发展现状D－Count适合实验室或生产现场使用日处理量大于40个样品的场合华粤行仪器有限公司微生物快速检测技术的发展现状标记和检测原理EnzymeViabilitysubstrateFreefluorochromeMicro-organismDetectorDetectorLaserFlowCell细胞标记12minutes细胞计数1minute微生物快速检测技术的发展现状自动吸样

无需预处理

每批可做64个样，含阴性和阳性质控最小的人力要求全自动标记和过滤

加所有要求的标记试剂

控制温育时间和温度

去除大的颗粒(25µm尼龙网过滤)快速敏感的分析

每小时50个样品

直接按个/mL显示结果微生物快速检测技术的发展现状

数据处理

区分微生物和颗粒的功能强大产品应用范围广增强灵敏度直接显示细胞数无需数据解释直观易读完整的数据追溯性易于确证微生物快速检测技术的发展现状三种型号的差异华粤行仪器有限公司√√微生物快速检测技术的发展现状哪些类型客户可以使用？大型食品、化妆品、药品企业，对快速检测速度及样品处理量要求高。目前仪器非常贵，运作成本与免疫法相似。华粤行仪器有限公司微生物快速检测技术的发展现状致病菌快速检测方法显色培养基法：技术成熟，产品很多。免疫学方法：产品最多，特异性和敏感性都很高，但有假阳性存在，阳性结果需要确认。通常的原理有EIA，ELISA，GLISA，荧光酶免、免疫磁分离等方法。市场上的产品多，如BioMeriux,Tecra,Neogen,Biocontrol,Matrix等。分子生物学方法：以基因探针检测法和PCR法为主。基因芯片：研究热点。华粤行仪器有限公司微生物快速检测技术的发展现状致病微生物快速检测产品免疫磁分离法—Matrix公司的Pathatrix致病菌快速检测系统ELISA方法—澳洲TECRA公司的免疫捕获快速检测华粤行仪器有限公司分子生物学方法(基因探针及PCR方法)GLISA---胶体金免疫层析致病菌快速检测条荧光酶免—Vidas系列产品(略)显色培养基–法国AES公司微生物快速检测技术的发展现状GLISA－胶体金免疫层析检测条氯金酸(HAuCl4)在还原剂作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，形成带负电的疏水胶溶液。由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。胶体金标记，实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。胶体金检测条在临床诊断中广泛使用。方法成熟，使用简便。关键是制备单克隆抗体，然后与胶体金交联，在亲水纸层析条上固定。胶体金微生物检测条在国内已经有不少产品，但用户并不多，主要是质量不稳定。外来的胶体金微生物检测产品比较多。微生物快速检测技术的发展现状常见的胶体金检测条举例大肠杆菌