DB21T 2410-2015 养殖水体中氯霉素残留量的测定高效液相色谱串联质谱法　　

ICS71.040.40DB21DB21/T2410—2015养殖水体中氯霉素残留量的测定高效液相色谱串联质谱法DeterminationofchloramphenicolresiduesinaquaculturewaterbyHPLC-MS/MSmethod辽宁省质量技术监督局发布IDB21/T2410—2015本标准按照GB/T1.1-2009标准化工作导则起草。本标准由大连市水产技术推广总站提出。本标准由辽宁省海洋与渔业厅归口。本标准起草单位：大连市水产技术推广总站。本标准主要起草人：张秀妍、王骏、丁勇、刘彤、马琳、郝佳。1DB21/T2410—2015本标准规定了养殖水体中氯霉素残留量的测定原理、试剂制备、测定步骤和结果计算。本标准适用于渔业生产养殖水体中氯霉素残留量的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法样品中的氯霉素用乙酸乙酯液液萃取，反相色谱柱分离，质谱检测器检测，内标法定量。4试剂4.1乙酸乙酯：色谱纯4.2甲醇：色谱纯4.3甲醇水溶液[1+1]:100mL甲醇加入100mL水中，超声混匀。4.4标准品：氯霉素，纯度≥99.5%。4.5氘代氯霉素内标标准溶液：100μg/mL。4.6标准溶液4.6.1氯霉素标准储备溶液[1.0mg/mL]：准确称取25.00mg的氯霉素标准品，用甲醇定容到25.00mL，配制成1.0mg/mL的标准储备溶液，该溶液于-18℃避光保存，有效期为6个月。4.6.2氯霉素标准中间溶液[1μg/mL]:准确量取100μL氯霉素标准储备溶液（4.6.1）于100mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。该溶液于-18℃避光保存，有效期为2周～3周。4.6.3氯霉素标准使用溶液[50ng/mL]:准确量取0.5mL氯霉素标准中间溶液（4.6.2）于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。该溶液于4℃保存，有效期为1周。2DB21/T2410—20154.6.4氯霉素标准使用溶液[10ng/mL]:准确量取100μL氯霉素标准中间溶液（4.6.2）于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。该溶液于4℃保存，有效期为1周。4.6.5氘代氯霉素标准中间溶液[1μg/mL]：准确量取1mL氘代氯霉素标准溶液（100μg/mL）于100mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。该溶液于-18℃避光保存，有效期为2～3周。4.6.6氘代氯霉素标准使用溶液[100ng/mL]：准确量取10mL氘代氯霉素标准中间溶液（4.6.5）于100mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。该溶液于4℃避光保存，有效期为1周。5仪器和设备5.1高效液相色谱-串联质谱联用仪。5.2电子天平：感量0.01mg。5.3溶剂过滤器。5.4混合纤维素酯水性滤膜：孔径0.45μm。5.5旋转蒸发仪。5.6旋涡振荡器。5.7超声振荡器。6测定步骤6.1样品处理6.1.1将水样经混合纤维素酯滤膜过滤。6.1.2量取过滤的水样250.0mL，置于500mL分液漏斗中。向分液漏斗中加入50.0μL氘代氯霉素标准使用溶液（4.6.6），振摇混匀。6.1.3加入50mL乙酸乙酯，剧烈振摇3min，静置分层。将下层水样放入烧杯中。用滤纸卷吸干锥形分液漏斗管颈内水分，乙酸乙酯萃取液放入125mL鸡心瓶中。6.1.4将萃取过的烧杯中的水样倒回原分液漏斗，重复萃取步骤（6.1.2）一次。合并乙酸乙酯萃取液于上述125mL鸡心瓶中，45℃±2℃水浴中减压浓缩至近干。6.1.5向鸡心瓶中加入1.0mL甲醇水溶液（4.3），涡旋振荡1min、超声振荡1min，样液经0.22μm针孔式有机相滤膜过滤后供高效液相色谱-串联质谱联用仪测定。6.2空白试验量取250.0mL纯水，按样品处理步骤（6.1）进行。6.3测定6.3.1色谱条件6.3.1.1色谱柱：C18柱，100mm×3.0mm（内径），粒度1.8μm。3DB21/T2410—20156.3.1.2流动相：甲醇:水为60:40（V/V）。6.3.1.3流速：0.3mL/min。6.3.1.4柱温：35℃。6.3.1.5进样量：20μL。6.3.2质谱条件6.3.2.1离子源：电喷雾ESI源。6.3.2.2扫描方式：负离子扫描。6.3.2.3检测方式：多重反应监测（MRM）。6.3.2.4雾化气压力：0.28MPa。6.3.2.5雾化气温度：350℃。6.3.2.6雾化气、干燥气为高纯氮气，气体流量：10L/min。6.3.2.7碰撞气为高纯氮气，气体压力：0.15MPa。6.3.2.8监测离子对：氯霉素m/z321/257、321/152；氘代氯霉素m/z326/157。6.4标准曲线的配制分别准确移取10ng/mL氯霉素标准使用溶液（4.6.4）0.00mL、0.50mL、1.00mL和50ng/mL氯霉素标准使用溶液（4.6.3）0.25mL、0.50mL、1.00mL于6个10.00mL容量瓶中，每个容量瓶中加入0.5mL氘代氯霉素标准使用溶液(4.6.6)，用流动相（6.3.1.2）定容至10mL。配制成的标准系列溶液浓度分别为0.00ng/mL、0.50ng/mL、1.00ng/mL、1.25ng/mL、2.50ng/mL和5.00ng/mL，每毫升该溶液含有氘代氯霉素5.0ng。将此标准系列溶液按6.3的仪器条件测定，氯霉素以氘代氯霉素为内标物，通过仪器工作站制定内标法标准曲线。6.5定性依据在相同测定条件下，待测组分与标准物质保留时间相对标准偏差在±5%以内，离子的相对丰度与浓度相当的校正标准的相对丰度一致，可判断为阳性样品。6.6定量测定将样品制备液按6.3测定，通过仪器工作站计算制备液中氯霉素的浓度。在上述条件下，标准溶液中氯霉素、氘代氯霉素的参考保留时间分别为2.450min、2.476min，标准溶液的色谱图及质谱图参见附录A。7结果计算7.1制备液中氯霉素的浓度Ci由仪器工作站依据内标法标准曲线自动计算。7.2样品中氯霉素的含量按式（1）计算。计算结果需扣除空白值。4DB21/T2410—2015......................................Xi—样品中氯霉素的含量，单位为微克每升(µg/L）；Ci—制备液中氯霉素的浓度，单位为微克每升(µg/LV1—最终定容体积，单位为毫升（mL）；V2—样品体积，单位为毫升（mL）。8检出限氯霉素的检出限为2ng/L，定量限为4ng/L。9线性范围氯霉素的线性范围为0.5μg/L～5.0μg/L。氯霉素添加浓度为2ng/L～20ng/L时