化学品 大型溞繁殖试验 征求意见稿

1GB/TXXXXX—XXXX化学品大型溞繁殖试验本文件描述了大型溞繁殖试验的试验原理、受试物信息、试验准备、试验程序、质量保证与质量控制、数据与报告。本文件适用于测试与评价可能暴露于水生生态环境的化学品对大型溞繁殖的影响。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T21801化学品快速生物降解性呼吸计量法试验GB/T21802化学品快速生物降解性改进的MITI试验（I）GB/T21803化学品快速生物降解性DOC消减试验GB/T21830化学品溞类急性活动抑制试验GB/T21831化学品快速生物降解性密闭瓶法试验GB/T21845化学品水溶解度试验GB/T21851化学品批平衡法检测吸附/解吸附试验GB/T21852化学品分配系数（正辛醇-水）高效液相色谱法试验GB/T21853化学品分配系数（正辛醇-水）摇瓶法试验GB/T21855化学品与pH有关的水解作用试验GB/T21856化学品快速生物降解性二氧化碳产生试验GB/T21857化学品快速生物降解性改进的OECD筛选试验GB/T22052用液体蒸气压力计测定液体的蒸气压力温度关系和初始分解温度的方法GB/T22228工业用化学品固体及液体的蒸气压在10-1Pa至105Pa范围内的测定静态法GB/T22229工业用化学品固体及液体的蒸气压在10-3Pa至1Pa范围内的测定蒸气压平衡法GB/T27850化学品快速生物降解性通则GB/T42426化学品蒸气压试验OECD化学品测试导则No.310快速生物降解—密闭瓶二氧化碳法（ReadyBiodegradability-CO2inSealedVessels）OECD化学品测试导则No.316化学品在水中的光转化（PhototransformationofChemicalsinWater）3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.12GB/TXXXXX—XXXX亲溞parentanimals试验开始时用于繁殖的雌溞。3.2幼溞offspring试验期间亲溞所产的溞。3.3繁殖量reproductiveoutput试验期间亲溞所产成活幼溞数。3.4死亡mortality溞体不动，即不能游动，或轻晃试验容器，15s内溞的附肢或后腹部也未见活动。3.5意外死亡Accidentalmortality由已知原因的意外导致、与受试物无关的死亡。3.6偶尔死亡Inadvertentmortality由未知原因导致、与受试物无关的死亡。3.7最低可观察效应浓度lowestobservedeffectconcentration;LOEC试验期间，与对照组相比，观察到的对受试生物产生显著（p<0.05）效应的最低受试物浓度。3.8无可观察效应浓度noobservedeffectconcentration;NOEC试验中只略低于LOEC的受试物设置浓度，即试验期间，与对照组相比，对受试生物未产生显著（p<0.05）效应的最高受试物设置浓度。3.9效应浓度ECx引起受试生物繁殖量降低x％时的受试物浓度。3.10内禀增长率intrinsicrateofincrease3GB/TXXXXX—XXXX综合繁殖量与特定种龄死亡率来衡量种群增长能力的参数。稳定状态的种群，内禀增长率为零；增长的种群，内禀增长率为正；衰退的种群，内禀增长率为负。3.11检出限limitofdetection可检出但不能定量的最低浓度。3.12检测限limitofdetermination可定量测定的最低浓度。4试验原理将溞龄小于24h的幼雌溞（亲溞）暴露于一定浓度范围的受试物溶液中开始试验。试验周期为21d。试验结束时，应对繁殖的成活幼溞的总数量和每只存活亲溞繁殖的存活幼溞的总数量进行评价（即不包括试验期间死亡的幼溞）。亲溞的繁殖量也可用其他方式表示，如从产生头胎幼溞开始平均每只亲溞每天产生的存活幼溞数量，不过这些结果应另外计算。如果试验期间亲溞意外死亡和/或偶尔死亡，或者转化为雄溞，这些平行应在数据评估中被排除。通过对暴露于受试物中的亲溞繁殖量与对照组的比较，确定最低可观察效应浓度（LOEC）和无可观察效应浓度（NOEC）。如可能，利用回归模型估算ECx（如EC50、EC20或EC10）。还应记录存活的亲溞数量和产头胎溞的时间。生长情况（体长）和内禀增长率等其他参数也应研究。5受试物信息5.1在试验前，应已知受试物的下列信息：a)按照GB/T21845的方法测定的水中溶解度；b)按照GB/T22052、GB/T22228、GB/T22229、GB/T42426的方法测定的蒸气压和亨利常数；c)在水溶液中的定量分析方法、回收率以及检测限；d)按照GB/T21830的方法测定的溞类急性活动抑制试验数据。5.2可能需要受试物的下列信息：a)标识信息（通用名、化学名），结构式；b)纯度；c)按照GB/T21855的方法测定的水解作用；d)按照OECD化学品测试导则No.316的方法测定的光稳定性；e)按照GB/T21852或GB/T21853的方法测定的正辛醇-水分配系数（Pow）；f)按照GB/T21801、GB/T21802、GB/T21803、GB/T21831、GB/T21856、GB/T21857、GB/T27850或OECD化学品测试导则No.310的方法测定的快速生物降解性试验结果。6参比物无推荐参比物。4GB/TXXXXX—XXXX7试验准备7.1仪器和设备7.1.1接触到试验溶液的试验容器和其他设备宜是全玻璃制品或由其他化学惰性材料制成。试验容器通常为烧杯。7.1.2需用下列部分或全部仪器设备：a)溶解氧测定仪（带有微电极或其他能测定少量样品的溶解氧浓度的适当装置）；b)适当的温度控制设备；c)pH计；d)测定水硬度的设备；e)总有机碳（TOC）测定仪或化学需氧量（COD）测定仪；f)控制光照的设备以及测定光照强度的设备等。7.2受试生物准备7.2.1受试生物的选择受试生物为大型溞（DaphniamagnaStraus）。无性繁殖系宜用基因型鉴定。研究表明，在本文件给定条件下培育，品系A（来源于法国的IRCHA）始终满足质量控制要求，即存活亲溞所产存活幼溞的平均值不少于60只。若能满足质量控制要求，也可使用其他的溞类品系。7.2.2受试生物的驯养试验开始时，试验用溞应是溞龄小于24h的非头胎溞。试验用溞应来源于同一个健康的保种培养容器，即未表现任何受胁迫现象（如死亡率高，出现雄溞和冬卵，初产延迟，体色异常等）。日常培养的条件（光照、温度、培养基、喂食单位体积的动物数量）应和试验条件一致，如果试验时所用培养基与日常使用的培养基不同，试验前宜将试验用溞在试验条件下驯养3周（即一代），以避免新培养基对亲溞产生胁迫作用。7.3试验培养基7.3.1宜使用规定的培养基，如ElendtM4和M7培养基（见附录A）。若能满足大型溞培养的要求，也可考虑其他培养基。7.3.2如果使用的培养基中含有未规定的添加成分，应在报告中详细说明，特别是含有含碳组分。宜测定培养基的总有机碳（TOC）和（或）化学需氧量（COD）。培养基（在添加藻类食物之前）中的TOC应小于2mg/L。7.3.3当受试物含有金属元素时，应特别注意培养基的性质（如硬度、螯合能力）有可能发生改变并改变受试物的毒性效应。不宜使用ElendtM4和M7培养基，同样尽量避免用含有已知螯合剂的其他培养基测含有金属元素的物质。可选择替代培养基，如参考美国材料与试验协会（ASTM）指南配制不含有乙二胺四乙酸（EDTA）的硬质淡水，并加入海藻提取物。尽管海藻中的有机物与金属也有微弱的螯合作用，这种参考ASTM指南配制的硬质淡水和海藻提取物的混合物也适合大型溞的长期培养和试验。7.3.4试验开始和试验期间溶解氧浓度应大于3mg/L。pH值在6~9范围内，在同一个试验中变化不应超过1.5个单位。硬度大于140mg/L(以CaCO3计)。7.4试验溶液5GB/TXXXXX—XXXX7.4.1所选浓度的试验溶液一般通过稀释贮备液准备。贮备液宜是将受试物加入到试验用水中，用机械的方法（如振荡、搅拌或者超声波处理，或者其他适当的方法）混合配制而成。7.4.2应尽量避免使用溶剂、乳化剂或分散剂，如不得已要使用这些物质来配制适当浓度的贮备液，除了试验浓度组之外，应设置足够数量平行的稀释水对照组和溶剂对照组。常用的溶剂有丙酮、乙醇、甲醇、二甲基甲酰胺和三甘醇。常用的分散剂有聚氧乙烯化脂肪酸甘油酯、0.01%的甲基纤维素甲醚和聚氧乙烯化氢化蓖麻油。有机溶剂或分散剂在溶液中的最大允许浓度不应超过0.1mL/L。在此浓度下，上述溶剂和分散剂无毒且不会提高物质的水中溶解度。任何情况下，受试物的浓度不能超过其在试验用水中的溶解度。8试验程序8.1暴露条件8.1.1试验周期试验周期为21d。8.1.2负荷亲溞分开培养，每个容器一只，容器中培养基体积50mL~200mL。尽管允许合并各平行的溶液进行化学分析，有时为了分析测定受试物浓度，需要增加溶液的体积。如果溶液体积超过100mL，需要加大对大型溞的喂食量，并满足喂食标准。对于流水式试验，由于技术原因，试验可分成4个平行，每组10只溞，放在一个较大的容器中，如果试验设计有变化应在报告中注明。8.1.3受试生物分组8.1.3.1对于半静态试验，每个试验浓度至少10只溞，并单独分开培养，对照组同样处理。8.1.3.2对于流水式试验，宜将40只溞分成4组，每组10只。也可减少溞的数量，至少20只，平均分成2个或4个平行。注：如果亲溞有偶尔死亡/意外死亡，就无法计算试验结束时每只存活亲溞的繁殖量。因此，繁殖量用试验开始时8.1.3.3亲溞应随机分配到各试验容器中，而且此后的操作也都应按照随机的方式进行。否则会导致对浓度影响的错误分析。尤其是按处理组或浓度顺序放置时，一些与时间有关的影响因素，如操作者疲劳或其他过失，都会对高浓度组导致更大的影响。此外，如果试验结果可能受初始因素或环境的影响，如各组试验容器在实验室中的位置，应考虑结束试验。8.1.4喂食8.1.4.1对于半静态试验，宜每天喂食，至少每周3次（即换液时喂食）。应考虑添加藻悬浮液稀释受试物溶液暴露浓度的可能性，并使用浓缩的藻悬浮液尽量避免此类情况发生。由其他试验方式（如采用流水式试验）造成的差异应在报告中说明。[现为Pseudokirchneriellasubcapitata(11)]和栅藻（Scenedesumssubspicatus）。喂食量应以提供给每只亲溞的有机碳数量为基础。研究表明，大型溞的喂食量在0.1mg~0.2mg(以碳计)•(溞-1•d-1)6GB/TXXXXX—XXXX之间，可满足繁殖试验的要求。试验期间的喂食量可保持稳定不变，也可在初期稍低，随着亲溞的生长逐渐增加喂食量，但始终应在推荐的0.1mg~0.2mg(以碳计)•(溞-1•d-1)范围内。8.1.4.3如果用替代测定的方法，如藻细胞数量法或光吸收法，来计算喂食率（由于碳含量测定受时间限制，为方便起见，可用这些方法替代每个实验室都应单独建立碳含量和藻细胞浓度之间的直线图（见附录B）。直线图应至少每年校准一次，如果藻类的培养条件发生变化，还应增加校准频率。此外发现光吸收法比藻细胞数量法更适合作为替代测定的方法。8.1.4.4应给大型溞喂食经浓缩的藻液，以减少进入试验容器中的藻培养基。浓缩藻液可通过离心获得，然后用蒸馏水、去离子水或溞培养基使其重新悬浮。8.1.5光照每天16h光照，在试验容器水面的光照强度不超过15μE.m-2.s-1~20μE.m-2.s-1。8.1.6试验温度试验溶液的温度应控制在18℃~22℃。同一试验中，19℃~21℃或20℃~22℃)。可另增加一个试验容器监测温度变化。8.1.7曝气试验期间不曝气。8.1.8确定浓度范围的预试验宜先进行一个寻找浓度范围的预试验，例如设置5个试验浓度组和1个对照组；每个试验浓度组设置2个平行，对照组不设平行。与受试物性质类似的化合物的溞类和/或其他水生生物的急性毒性试验结果，或者参考文献，对于确定预试验浓度范围可能有参考作用。预试验进行21天，或到足以可靠地预估出效应水平为止。试验结束时，评估溞类的繁殖情况，记录亲溞和幼溞的数量。8.1.9正式试验8.1.9.1应预先知道受试物的毒性（通过急性毒性试验或8.1.8中的预试验得知以助于选择适当的试验浓度。8.1.9.2正式试验一般包括5个浓度，按几何级数排列，浓度的间隔系数不大于3.2，每个浓度应有适当的平行数量和溞数（见8.1.3）。如果试验浓度少于5个，应在试验报告中给予合理解释。受试物浓度不应超过其在试验溶液中的溶解度。8.1.9.3设置浓度范围时，应注意：a)若旨在评估繁殖效应的ECx，应有足够多的试验浓度来计算ECx和置信区间。使用的测试浓度宜涵盖预估的ECx，即ECx是通过内插而不是外推得到的。随后统计分析的优点是试验浓度更多(例如10个)、每个浓度的平行较少(例如5个，从而保持容器总数恒定)，以及有10个对照b)若旨在获得LOEC和（或）NOEC，最低试验浓度组的繁殖量不应显著低于对照组。否则，应降低试验浓度重新试验。最高试验浓度组的繁殖量应显著低于对照组。否则，应提高试验浓度重新试验，除非在初始试验中使用的最高试验浓度是慢性效应试验所需的最高试验浓度(如10mg/L)。7GB/TXXXXX—XXXX8.1.10限度试验8.1.10.1若在8.1.8中预试验受试物的最高浓度(例如10mg/L)下没有观察到效应，或者根据受试物对其他生物的低毒性和/或低吸收资料推测受试物有可能是低毒或无毒时，该繁殖试验可按限度试验进行，使用一个试验浓度组（例如10mg/L）和对照组。试验组和对照组各设10个平行。8.1.10.2如在流水式系统中进行限度试验，可适当减少平行。8.1.10.3限度试验将提供机会，以证明在该限定浓度下没有统计学意义上显著效应；但如果发现有显著效应，则应进行完整的正式试验。8.1.11对照组8.1.11.1应设置试验培养基对照组（空白对照组）。若使用溶剂或分散剂，还应增设溶剂对照组或分散剂对照组，溶剂或分散剂的浓度应与含有受试物的容器中的一致。各对照组应设适当数量的平行（见8.1.3）。8.1.11.2对照组每只亲溞间的繁殖量的变异系数应不大于25%；对于亲溞使用单独培养方式设计的试验，应在报告中注明。8.1.12试验培养基更换8.1.12.1根据受试物的稳定性确定试验培养基的更换频率，但至少每周3次。若在为期最长3d的稳定性预试验中表明受试物不稳定（如在配制浓度值的80%~120%范围外或低于初始浓度测定值的80%应考虑增加更换频率，或使用流水式系统。8.1.12.2半静态试验的溶液更换时，应准备另一套试验容器用于放置亲溞，可用内径合适的玻璃吸管转移亲溞。转移亲溞时应尽量少吸原容器培养基的体积。8.2观察试验期间的观察结果应形成记录表格（见附录C和附录D的示例）。如果要求测定其他参数，其他观察指标也应记录（见4原理和8.5其他参数）。8.3幼溞从头胎溞开始，每天从试验器皿中移出幼溞并计数，以避免消耗食物影响亲溞。计数存活的幼溞，对死胎和死亡的幼溞也要进行记录。8.4死亡率试验期间应每天记录亲溞的死亡情况，或者至少与幼溞记数次数相同。8.5其他参数尽管本方法设计的主要目的是评价受试物对溞繁殖能力的影响，其他的影响因素也可能被充分定量以满足统计分析的要求。可记录每只存活亲溞的繁殖量，即试验期间每只存活亲溞所产成活幼溞数。这可与主要反应变量（在试验开始每只亲溞繁殖的幼溞，这里的亲溞是指试验期间没有意外死亡或偶尔死亡的亲溞）进行比较。如果暴露的平行中发生亲溞死亡，则应考虑死亡率是否符合一个浓度-反应模型，例如，是否存在一个对受试物浓度的反应有正斜率的显著回归（这里可使用一个类似Cochran-Armitage趋势检验的统计检验）。如果死亡率不符合一个浓度-反应模型，则应将那些具有亲溞死亡的平行排除在试验结果分析之外。如果死亡率符合一个浓度-反应模型，则亲溞死亡应归因于受试物的影响，并且8GB/TXXXXX—XXXX不应从试验结果的分析中排除这些平行。既然有足够的信息表明可能的亚致死效应会比单一的繁殖力更能说明问题，因此生长情况测量是非常值得一提的参数；另外宜在试验结束时测定亲溞的体长（不包括尾刺）。其他用来测量或计算的参数包括：亲溞头胎（及随后的几胎）产溞时间、每只亲溞产溞总胎数和每胎产溞数、死胎数量、雄溞数或冬卵、种群内禀增长率。幼溞性别鉴定见附件F。8.6分析测定频率8.6.1至少每周测定一次对照组和最高试验浓度组的新、旧溶液的溶解氧浓度、温度、硬度和pH值。8.6.2试验期间，应定期测定受试物浓度。8.6.3半静态试验的受试物浓度应保持在配制浓度的±20%的范围内（见5和8.1.12）。宜在试验开始后第一周内的新制备时和更换试液时至少测定一次最高和最低浓度组的新配制的溶液（新、旧溶液应为同一试液中的样品）。此后，至少每周分析一次。8.6.4当受试物浓度不在配制浓度的±20%范围内，应分析所有新、旧试验溶液。当初始浓度是可重复且稳定的，即在配制浓度的80%~120%范围内，第2周~3周内可只测最高与最低浓度组。在所有情况下，仅在每一浓度的一个平行容器被更新之前测定受试物浓度。8.6.5若采用流水式试验，除无需测定待更新试验溶液之外，半静态试验中所述采样方法同样适用。在试验第一周，宜增加随机采样次数（例如三次）以确保试验浓度保持稳定。应每天检查稀释率及受试物浓度（即稀释水和受试物贮备液流速）。8.6.6在整个试验期间，若证明受试物浓度保持在配制浓度或初始测定浓度的±20%范围内，那么结果应以配制浓度或初始测定浓度为基础。若偏差大于配制浓度或初始测定浓度的±20%，结果应以时间-加权平均值（参见附录E）表示。9质量保证与质量控制9.1试验开始时所用亲溞溞龄小于24h，且为非头胎溞。9.2试验结束时，亲溞（雌溞）的死亡率不超过20%，且平均每只存活亲溞所产成活幼溞不少于60只。10数据与报告10.1结果处理10.1.1一般要求按每个试验容器（即平行）计算每只亲溞所产成活幼溞总数。任一平行中，若亲溞在试验期间意外死亡或偶尔死亡，或转化成雄溞，则应在结果处理时排除此平行。然后，按扣除后的平行数进行统计分析。如果在暴露的平行中发生亲溞死亡，则应考虑这些死亡是否遵循一个浓度-反应模型。例如，如果对受试物浓度的反应有一个正斜率的显著的回归(可用一个类似于Cochran-Armitage趋势检验的统计检验)。如果死亡率不符合浓度-反应模型，则应将那些具有亲溞死亡的平行从试验结果的分析中排除。如果这些死亡率符合浓度-反应模型，则这些亲溞死亡应归因于受试物的影响，并且不应从试验结果的分析中排除这些平行9GB/TXXXXX—XXXX总之，当用LOEC、NOEC或者ECx来表示效应时，宜用以上提到的2个反应变量计算繁殖效应，即：试验期间非偶尔/意外死亡的每只亲溞所产成活幼溞总数和每只存活亲溞所产成活幼溞数。然后用这2个反应变量中的任何一个计算最后的结果，即最小的LOEC、NOEC或者ECx。在使用统计分析之前，如方差分析（ANOVA）、通过Studentt检验、Dunnett’s检验、Williams检验或者stepdownJonckheere-Terpstra检验比较试验浓度组和对照组，如果要满足特殊的统计检验方法的需要，宜先考虑数据的转换。如果要用非参数的检验方法可考虑用Dunn’s或者Mann-Whitney’s检验。95%的置信区间以单个处理的方法进行计算。未处理的对照组中存活的亲溞数量是试验的一个有效性指标，并且应予以记录和报告。另外，所有有害效应，如异常行为和毒理学上的显著效应，同样应在最后的报告中说明。10.1.2ECx的结果处理用适当的统计学方法（如逻辑回归或者威布尔分布函数、trimmedSpearman-Karber方法、或简单的插值法）计算ECx值及相关的置信区间。为了计算EC10、EC50或任何其他ECx，应对完整的数据集进行回归分析。10.1.3NOEC/LOEC的结果处理如果用统计分析确定NOEC/LOEC，应根据OECD的54号文件“关于目前处理生态毒性数据的统计分析方法：应用指南”使用合适的统计学方法。通常，用p=0.05的单侧假设检验将试验浓度组的有害效应与对照组相比。正态分布和方差齐性可用适当的统计检验方法进行检验，如Shapiro-Wilk（p=0.05）和Levene检验（p=0.05）。可进行单边方差分析和后续的多重比较检验。多重比较（如Dunnett's检验）或者step-down趋势检验（如Williams或者stepdownJonckheere-Terpstra检验）可用来计算各个试验浓度组与对照组之间是否存在显著差异（p=0.05根据OECD的54号指南文件选择推荐的检验方法）。另外，非参数检验方法（如根据Holm或者Jonckheere-Terpstra趋势检验得到的Bonferroni-U检验）可用来确定NOEC和LOEC。10.1.4限度试验的结果处理如果进行限度试验（仅比较对照组和一个试验浓度组并且满足参数检验方法的先决条件（正态分布和方差齐性可用Student检验(t检验)方法评估度量响应。如果这些要求都没有满足，可使用一个不等方差的t检验方法（如Welch检验）或者如Mann-Whitney-U检验的一个非参数检验方法。为了确定对照组间（对照组和溶剂对照组、分散剂对照组）的显著性差异，每个对照组的各个平行可进行限度试验。如果这些试验检查不出显著性差异，那所有对照组和溶剂对照组的平行可合并。否则，所有试验浓度组应与溶剂对照组进行比较。10.2试验报告试验报告应包括下列内容：a)受试物：.通用名、化学名、CAS号；.物理属性和相关理化性质；.化学鉴定数据，包括纯度。b)受试生物：.品系（无论是否进行过遗传鉴定），提供者（如果已知）和培养条件；.如果不使用大型溞，而用其他种类，应做鉴定并在报告中说明。c)试验条件：GB/TXXXXX—XXXX.试验程序（如半静态或流水式试验，体积，每升负荷溞数）；.光照周期和光照强度；.试验设计（平行数，每一平行的溞数）；.所用培养基的详细说明；.若另外添加有机物，包括成分、来源、制备方法、贮备液中的TOC/COD、试验培养基TOC/COD测定值；.喂食的详细资料，包括喂食量（以mgC/(溞•d)为单位）和喂食时间表（例如食物类型，包括藻的名称、品系、培养条件）；.试验贮备液的配制方法和更新频率（若使用助溶剂，应给出其浓度）。d)试验结果：.关于受试物稳定性的任何预试验结果；.配制试验浓度和确定试验容器中受试物浓度的所有分析结果（参见附录5的示例数据表测定方法的回收率与检测限；.每个容器中受试物的实测浓度。添加回收试验的方法和仪器的最低检测限；.试验容器中的水质（pH值、温度和溶解氧浓度、TOC和/或COD、硬度）；.试验期间每只亲溞所产存活幼溞的完整记录（参见附录4的示例数据表）；.亲溞死亡数及其死亡时间（参见附录4的示例数据表）；.对照组繁殖量的变异系数（以试验结束时每只存活亲溞所产成活幼溞总数为基础）；.以试验结束时每一平行中每只存活亲溞（不包括试验期间偶尔死亡和/或意外死亡的亲溞）所产成活幼溞总数对受试物浓度作图；.每个平行中每只存活的亲溞所产成活幼溞总数对受试物浓度作适当的图；.若适用，应报告繁殖的最低可观察效应浓度（LOEC），包括对所使用的统计方法的描述和被检测到的效应的大小（实验开始前先进行有力的分析，为LOEC的测定起辅助作用报告繁殖的无可观察效应浓度（NOEC）；用来计算LOEC和NOEC值的反应变量的信息(或者作为试验期间每个非偶尔死亡/意外死亡的亲溞所产的总的成活幼溞数，又或者作为每只存活亲溞所产成活幼溞总数)，若适用，应报告亲溞死亡的LOEC/NOEC；.最低可观察效应浓度（LOEC），无可观察效应浓度（NOEC），若可能，也可记录亲溞死亡的LOEC和（或）NOEC；.若适用，ECx和置信区间，用于计算的模型曲线，浓度-反应曲线的斜率及其标准误差；.其他观察到或测定的生物学效应（如亲溞生长等），并加以合理的解释；.对于试验中任何偏离本导则的解释说明。GB/TXXXXX—XXXXElendtM4和M7培养基的制备A.1对ElendtM4和M7培养基的适应根据一些实验室的经验，很难将溞直接转移到M4和M7培养基中。应通过逐步适应的过程：即将溞从原培养基中取出，放入比例较低的Elendt培养基中，如30%的Elendt培养基中，然后增大Elendt培养基的比例到60%，再逐渐增至100%。大约需要一个月左右。A.2配制A.2.1微量元素首先使用合格的纯净水，如去离子水、蒸馏水或反渗透水分别配制各微量元素的贮备液Ⅰ。再用贮备液Ⅰ制备贮备液Ⅱ,它含有所有微量元素（混合液），见表A.1。表A.1ElendtM4和M7培养基贮备液Ⅱ的制备HBOMnClOONaMoOOOONaSeONHVONaEDTAO--FeSOO--A.2.2M4和M7培养基用贮备液Ⅱ、常量营养元素和维生素配制M4和M7培养基，具体见表A.2。GB/TXXXXX—XXXX表A.2M4和M7培养基的配制OMgSOONaHCONaSiOONaNOKHPOKHPO-混合维生素贮备液以较小分装冷藏保存。在使用前把维生素加入到培养基中。GB/TXXXXX—XXXX（资料性）总有机碳(TOC)分析与喂食的藻中TOC含量的线性图绘制喂食的藻中的碳含量通常不能直接测定，可用替代测量参数（例如藻细胞数或光吸收）的相关性（即线性图）来确定碳含量。测定TOC，高温氧化法优于紫外（UV）或过硫酸盐法。绘制线性图，采用离心法将藻从生长的培养基中分离，随后用蒸馏水重新悬浮。在每一浓度用三个平行测定替代参数和TOC浓度。分析蒸馏水空白并从藻样TOC浓度推出TOC浓度。线性图的线性部分涵盖碳浓度范围要求。如图B.1、图B.2、图B.3的例子所示。注：这几个图仅为示例，不能用于交流，各实图B.1总有机碳（TOC）分析与喂食的藻中TOC含量示意图一GB/TXXXXX—XXXX图B.2总有机碳（TOC）分析与喂食的藻中TOC含量示意图二图B.3总有机碳（TOC）分析与喂食的藻中TOC含量示意图三GB/TXXXXX—XXXX（资料性）培养基更换，物理-化学监测数据，喂食、大型溞繁殖和亲溞死亡率数据记录表示例C.1大型溞繁殖试验观察记录表示例见表C.1表C.1大型溞繁殖试验观察记录表试验号：开始日期：品系：培养基：食物类型：受试物：配制浓度：0123456789新旧新旧新旧GB/TXXXXX—XXXXGB/TXXXXX—XXXX化学分析结果记录数据表示例D.1化学分析结果记录数据表见表D.1和表D.2表D.1化学分析测定浓度记录数据表表D.2测定浓度记录数据表（以配制浓度的百分率表示）GB/TXXXXX—XXXX时间-加权平均值的计算E.1时间—加权平均值的计算若受试物浓度在更换培养基期间是下降的，应基于生物学和统计学的考虑，选择某个浓度作为亲溞暴露浓度范围的代表。若繁殖主要受峰值浓度影响，则应使用最高浓度，若认为受试物的蓄积和长期效应更为重要，则时间-加权平均浓度更合适。时间-加权平均浓度的示例如图E.1所示：图E.1时间-加权平均值示例图E.1是个简化了的试验的示例，试验持续7d，在第0d、2d、4d更新培养基。图E.1中“之”字形线代表任意时间点的浓度，假定浓度是沿着某一指数衰减过程下降的；6个方形点代表在每一个更换周期开始与结束时测定的浓度；粗实线表示时间-加权平均值的位置。因时间-加权平均值下的面积与浓度曲线下的面积相等，可经计算得出时间-加权平均值。上例的计算见表E.1。GB/TXXXXX—XXXX表E.1时间-加权平均值计算dCCS122233每一个更新周期指数曲线下的面积用式（E.1）进行计算。S=C0-C