DB32T 3451-2018 栽培稻种中杂草稻混杂检测规程_第1页
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备案号：DB32TestingregulationsofWeedyRiceinCultivatedRice’sSeed江苏省质量技术监督局发布I 1 1 1 2 2 3 61栽培稻种中杂草稻检测规程凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）GB/T22505粮油检验感官检验杂草稻(weedyrice)是指在水纯合体的杂草稻homozygotic杂草稻的花粉飘逸到栽培稻柱头上发生杂交，产生的栽培稻种子（2n=24稻的一半染色体（n=12条染色体），但果皮色依然表现为白色。称为杂草稻杂合体。其种植到田里开花结果，就会产生性状分离，产生具有红色果皮的杂草Rc基因是水稻果皮原花色素积累途径中最重要的调节基因之一,位于第7染色体上,全长约6.4kb,包含有8个外显子,产物为一个具有碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)元件的调节蛋白。Rc基因具有比rc基因多14bp插入/缺失，从而设计特异性14bp插入/缺失引物进行PCR扩增24检测前准备工作4.1试剂配制）：），4.2仪器和用具4.3照明要求4.4样品制备纯合体杂草稻检测取样按GB5491-1985执行。上述纯合体杂草稻检测5.1纯合体杂草稻检测5.2杂合体杂草稻检测3纯合体杂草稻含量（M）以质量分数（%）表示，m1-------糙米中红色糙米的粒数，单位杂合体杂草稻含量（N）以质量分数（%）表示，n1-------杂合条带的胶孔数，单位为个。杂草稻总混杂率（T）以质量分数（%）表示，按T=M+N………4RED4-Rev:TCTTCTCCTCTRED4-Rev:TCTTCTCCTCTCA.2PCR检测A.2.1.1试样PCR反应个循环;72℃延伸8min。反应结束后取出PCR反应管，对PCR反应产物进Primerforward(10μmoPrimerreverse(10μmo15A.2.1.2对照PCR反应A.2.2.16%聚丙烯酰胺凝胶的制作a)制作底座：在桌面上铺上报纸，用于摆放制胶用长短板，在长短板左右分别夹上两片1mm厚薄凝胶溶液，在微波炉中加热，沸腾2-3次至溶液澄清后倒入底使琼脂糖进入长短板之间，室温冷却后，即可把板子下端封b)6%聚丙烯酰胺凝胶配制：5×TBE5ml,40%丙烯酰胺3.75ml，去离子水16.25ml，混匀后加入250ul10%过硫酸铵和12ulTEMED。搅拌后迅速进行灌胶。加入少许混合液将缝隙完全灌满。注意灌胶过程中不可气泡，可以通过震荡板子将气泡赶出。d)聚丙烯酰胺凝胶的凝固：室温下，聚丙烯酰胺凝胶经过15-20分钟将完全凝固，在此期间可以根Marker，用于判断产物的长度。电泳时电压设置洗之后，轻轻撬开制胶板，将凝胶从板上剥离下来。再用去离子水清洗两遍，沥干；配AgNO3溶液，倒入盛有凝胶的盆中，将盆放在摇床上，盖上盖子避光漂染，转速之后沥干AgNO3溶液，并在去离子水中洗涤两次；将400mLNaOH溶液倒入盛有凝胶的盆中，在摇床），用玻璃板捞出，平展整齐，在室温下风干至无水流出，然

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