颗粒 生物气溶胶过滤效率测试方法 征求意见稿

1颗粒生物气溶胶过滤效率测试方法本文件所述测试方法适用于常温常湿条件下生物设施、生物安全防护设备和个人防护装备中各种GB/T38517—2020颗粒生物气溶胶采过滤器或过滤材料过滤前空气中含有的生物气溶胶粒子数量与过滤后空气中含有的生物气溶胶粒对空气中颗粒物、生物颗粒具有有效滤除能力的材料、装置和2生物气溶胶发生器bioaerosolgene5.1试验环境5.1.3电源220±22）V50±1）Hz。5.2测试指示微生物3注：常用的有粘质沙雷氏菌、噬菌体PhiX174，培养方法见5.3仪器设备5.3.4风速仪5.3.5流量计5.4采样介质宜根据选用的空气微生物采样器类型确定采样介所需指示微生物喷雾悬液的体积根据试验预先计算而定。当喷雾悬液体积消耗了初始体积的4检查空气微生物采样器主机的采样参数和工况条件，确认满足采样需5生物气溶胶发生后宜通入带有混匀功能的生物气溶胶混匀室内，生物气溶胶喷口高度宜是混匀舱上游空气微生物采样器采样管上游空气微生物采样器采样管口安置在试验舱内，高下游空气微生物采样器采样管夹具管道口与生物气溶胶喷口保持水平，相距0.6m～0.8m，6.2.2过滤器生物气溶胶过滤效率实验室内6在待测过滤器上游和下游分别设置一个空气微生物采样器，上游空气微生物采样器采样口与过滤器中心点等高，距离过滤器0.2m±0.05m，采集上游的生物气溶胶设置风速仪或流量计，测量管道内气流流量，流量应符合过滤器正常工6.2.3设施设备中的过滤器生物气溶胶过滤效生物安全设施或设备中过滤器生物气溶胶过滤效率宜在设施设备安装地点现场测试，测试装置按7生物安全施排风系统的过滤器下游宜有1m~1.5m的空间，管道高度不小于40cm；安全防备的过滤器上游端应具备生物气溶胶发生器和空气微生物采样器气路管道的连接口，现场能提供电源b)生物气溶胶输入和采样头是否已安装；a)生物气溶胶发生器喷口与生物气溶胶c)在过滤器的上游，用支架将空气微生物采处的横轴中线左、中、右三点各安装一个采样头，采样头出气口与采样器d)在过滤器的下游中间位置，用支架将空气微生物采样器m～0.80m处的横轴中线左、中、右三点各安装一个采样头，采样头出气8现场测试试验时，应确认现场设施的送风、排风处于额定功率下稳定运行将上游和下游的空气微生物采样器内装入采样介质，采集待测过滤器或过滤材料上游和下游6.5.2实验室试验指示微生物气溶胶的启动试验装置的送风和排风系统，按照测试对象对气流流速的要求，调冲击式采样器，上游空气微生物采样器采样时间宜不大于5min，下游空气微生物采样器采样时间宜不每次空气微生物采样器更换新采样介质时，应h～24h，统计每级平皿上的菌落数，并使用液体冲击式采样器采样后的菌液进行平皿涂布，置于恒温培养箱中，在30℃~37℃下培养18上游采样生物气溶胶粒子浓度cd和上游采样生物气溶胶粒子浓度ch按GB/T38517的方法进行计被测的过滤器或过滤材料的过滤效率按公式（1）9E值越小，过滤效率越低，过滤器或过滤材料对生物气溶胶（微生物颗粒）净化效率越低，防护性能低；E值越大，过滤效率越高，过滤器或过滤材料对生物气溶胶（微生物颗粒）净化效率越高，1A.1要求——细菌气溶胶喷雾速度为0.5m/s±0.05m/s。A.2校准A.2.2场所A.2.3频率A.2.4材料和仪器——待校准的生物气溶胶发生器；——开关定时器；——直径为37mm气溶胶型薄滤膜在采样A.2.5方法a)测定生物气溶胶发生器喷出口尺寸并计算出口面积（㎡b)以生物气溶胶发生器要求的流速（m/s）计算所需的流量（m3/sc)将粘质沙雷氏菌悬液按生产厂家推荐的体积量d)将生物气溶胶发生器喷出口放在过滤器漏斗宽端的橡胶隔膜上，将AGI-30冲击采样器采样口注：薄膜过滤器漏斗（过滤器内径尺寸为47mm）两端用室温硫化密封硅橡胶隔膜，隔膜可插入生物气溶胶发生器的喷出口，另一端为空气微生物采样器。采样器采样口末端e)将一软管连接到流量计附带的压力计上，再与生物气溶胶发生器相连；f)同时打开生物气溶胶发生器和采样器（按照厂商的用法说明操作）。运行生物气溶胶发生器5min（采用定时器开关采样5.25min；h)连续稀释并采用5个完全相同的平皿接种定量细菌悬液；j)以平皿中长出的粘质沙雷氏菌菌落数不超过100个的稀释浓度，作为计数和结果计算的样本。A.2.6计算a)5min释放的粘质沙雷氏菌数Q按公式（A.1）计算。Q＝N×k....................Q——5min释放的粘质沙雷氏菌数，Vp＝G/Sp............................（SA.2.7判定重复5次校正试验，生物气溶胶发生器运行5min1b)取1.25mLPBS，加入1L蒸馏水，高压灭菌器中120℃灭菌15min，制备出实验用无菌PBa)从-20℃温度下取出粘质沙雷氏菌在室温下放置5min，恢复至室温20℃~25℃后，应尽快d)将制备好悬液分装到无菌细胞管中，做好接种了粘质沙雷氏菌的营养琼脂平皿置于恒温培养箱中，在30℃±2℃下培养18h～24a)从-20℃温度下取出噬菌体PhiX174在室温下放置5min，恢复至室温20℃~25℃后，应尽a)可称取蛋白胨10g、牛肉膏3g、NaCl5g、琼脂粉15g、1000ml蒸馏水或去离子水配置，或选购c)半固体营养琼脂培养基配制（固体营养琼脂培养基剂量减半）后，121℃,灭菌15min，冷却至45℃~50℃左右放入设置温度46℃的水浴锅中备用。宜选购营养肉汤培养基（宜注明生产单位信息），按照使用说明书配置1000ml营菌20min，冷却后存放于4℃冰箱，使用前放入温度37℃取大肠杆菌，在营养琼脂平皿上划线复活，1r/min摇床培养18h～24h，制体培养基于离心管中，直接倒于接种了噬菌体PhiX174的营养琼脂平皿表面，轻轻摇晃，使离心管中的样品均匀铺于固体培养基上，凝固后37℃培养12h～16h，进行噬菌枯草芽孢杆菌黑色变种芽孢悬液制备和典型菌落计数a)标准物质从4℃冰箱取出后，在（20b)用无菌的磷酸盐缓冲液对样品悬液进行10倍系列稀释制备成不同稀释度悬液（1mL上一稀释度芽孢悬液加入9mL无菌磷酸盐缓冲液进D.5枯草芽孢杆菌黑色变种芽孢培养和典种于营养琼脂平皿，然后用无菌L棒涂布整个平皿。将平皿倒置于培养箱36±1）℃培养48h。D.5.3.1计算每块平皿上枯草芽孢杆菌黑色1（D.1）D.5.3.2样品中枯草芽孢杆菌黑色变种（D.2）a——计数每块平皿上的枯草芽孢杆菌黑色变种菌d——稀释因子（未经稀释的样品其d值为1m——重复次数；d——第一个稀释度的稀释因子（未经稀释的样品其d值为1Challenge[J]，AppliedBiosafety，2023，28（1