《菌落总数、总大肠菌群、粪大肠菌群、大肠埃希氏菌酶底物法水质自动分析仪技术规范》

2JB/T15095—202x菌落总数、总大肠菌群、粪大肠菌群、大肠埃希氏菌酶底物法水质自动分析仪技术规范本文件规定了菌落总数、总大肠菌群、粪大肠菌群、大肠埃希氏菌酶底物法水质自动分析仪的技术参数和组成、要求，描述了相应的试验方法，规定了检验规则、标志、包装、运输和贮存。本文件适用于基于酶底物法测定饮用水、地表水、地下水、生活污水、工业废水、医疗污水等水中菌落总数、总大肠菌群、粪大肠菌群、大肠埃希氏菌的水质自动分析仪的制造。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T191包装储运图示标志GB/T2829—2002周期检验计数抽样程序及表GB4208—2017外壳防护等级（IP代码）GB4793.1—2007测量、控制和实验室用电气设备的安全要求第1部分：通用要求GB/T5750.12生活饮用水标准检验方法微生物指标GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T11606—2007分析仪器试验方法GB/T13384机电产品包装通用技术条件GB/T34065—2017分析仪器安全要求HJ212污染物在线监控（监测）系统数据传输标准HJ347.2水质粪大肠菌群的测定多管发酵法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1菌落总数totalcolonies在被测样品的单位体积(mL)内，在一定条件下培养后所生成的细菌菌落的总数。3.2总大肠菌群酶底物法enzymesubstratetechniquefortotalcoliforms在选择性培养基上能产生β-半乳糖苷酶(β-D-galactosidase），能够分解色原或荧光底物而呈现颜色或者荧光变化，以此来检测水中总大肠菌群的方法。3.3大肠埃希氏菌酶底物法enzymesubstratetechniqueforEscherichiacoli在选择性培养基上能产生β-半乳糖苷酶(β-D-galactosidase）和β-葡萄糖醛酸酶(β-glucuronidase能分解相应的色原或荧光底物，呈现颜色或者荧光变化，以此来检测大肠埃希氏菌的方法。3.43JB/T15095—202x菌落形成单位（CFU）colonyformingunits将稀释后的一定量的菌液通过倾注或涂布等方法，使其内的微生物单细胞均一分散在琼脂平板上，待培养后，每一活细胞就形成一个菌落。3.5最可能数（MPN）mostprobablenumber又称稀释培养计数，是一种基于泊松分布的间接计数法。利用统计学原理，根据一定体积不同稀释度样品经培养后产生的目标微生物阳性数，查表估算一定体积样品中目标微生物存在的数量（即：单位体积存在目标微生物的最大可能数）。3.6标准菌悬液standardbacteriasuspension对标准菌株进行12h～24h增菌培养后并能测量的菌液。4技术参数和组成4.1技术参数菌落总数、总大肠菌群、粪大肠菌群、大肠埃希氏菌的水质自动分析仪（以下简称“仪器”）技术参数如表1所示：表1技术参数4.2组成仪器一般包含以下单元：进样/计量单元、恒温培养单元、控制检测单元、废液回收单元，组成如图1所示。图1仪器组成单元示意图5要求4JB/T15095—202x5.1工作条件仪器在下列条件下应能正常工作。a)环境温度：5℃~35℃;b)相对湿度：5%~85%；c)大气压：70kPa~106kPa；d)电源电压：220V±22V；e)电源频率：50Hz±1Hz。5.2外观和结构外观和结构应满足下列要求。a)外观整齐、清洁，表面涂层、镀层无明显剥落、擦伤、露底及污垢；b)所有铭牌及标志应耐久和清晰，内容符合相关法规、标准的要求；c)所有紧固件无松动，各种调节件灵活，功能正常；d)零件表面无锈蚀；e)可拆部分能无障碍地拆装；f)醒目位置标识分析流路图。5.3功能要求5.3.1进样/计量单元进样/计量单元应满足下列要求。a)有完整密闭的采样系统，直接自动采集水样；b)所用材料具备耐腐蚀、耐高温、低吸附性等功能；c)管路方便清洗；d)具有进样计量功能。5.3.2恒温培养单元恒温培养单元应满足下列要求。a)所用材料具备耐腐蚀、耐高温等功能的材料，且易于清洗；b)具有自动加热装置和温度传感器，温度可稳定在36℃±1℃、44.5℃±0.5℃;c)培养时间不超过24h。5.3.3控制检测单元控制检测单元应满足下列要求。a)具备进样、计量、检测、清洗、消毒等自动控制动作功能；b)具备异常信息记录、反馈功能，如：超量程报警、缺试剂报警、部件故障报警、漏液报警、取样故障报警和超标报警等；c)具备对进样/计量、检测等单元的手动和自动清洗功能；d)具备定时启动、定时测试、连续测量功能；e)当仪器意外断电且再度通电时，断电处在分析周期内，能自动回到断电前状态；断电超过分析周期，再次通电时自动清洗各通道、自动复位到重新开始测定的状态；f)数据处理系统具备数据和运行日志采集、存储、处理、查询、显示和输出等功能；g)控制单元实现功能时均应提供通讯协议，且满足HJ212的要求；h)具有数字量通讯接口，通过数字量通讯接口输出指令、相关数据及运行日志，并接收外部及远程控制指令；i)具备校验功能；j)检测模块采用具有耐腐蚀、耐高温等功能的材料，且易于清洗；k)检测模块的输出信号应稳定。5.3.4废液回收单元废液回收单元应满足下列要求。a)有完整密闭的贮存系统；5JB/T15095—202xb)由耐腐蚀材料构成；c)方便清洗。5.4性能要求5.4.1定性（适用于＜101CFU/mL（或MPN/100mL）5.4.1.1阴性测试测量无菌水，测量结果应为阴性。5.4.1.2阳性测试测量浓度低于101CFU/mL（或MPN/100mL）的标准菌悬液，测量结果应为阳性。5.4.2定量（适用于≥101CFU/mL（或MPN/100mL）5.4.2.1准确度应不超过±30%。5.4.2.2重复性应不大于25%。5.4.2.3定量下限菌落总数为1CFU/mL，总大肠菌群、粪大肠菌群、大肠埃希氏菌为1MPN/100mL。5.4.2.4实际水样比对实验相对误差绝对值的平均值应不大于30%。5.5安全要求5.5.1绝缘电阻电源输入端与仪器箱体的绝缘电阻应不小于20MΩ。5.5.2介电强度电源输入端与可触及导电零部件之间施加规定的试验电压（1500V），历时1min，不应出现飞弧或击穿的现象，电晕效应或类似现象可以忽略不计。5.5.3保护接地应有可靠的接地，其接地保护端子和有保护连接的每个可触及零部件间的阻抗都不得超过0.1Ω,不包括电源线的阻抗。5.6外壳防护应符合GB4208—2017中第4章规定的IP52防护等级。5.7环境适应性按GB/T11606—2007中2.2环境条件分组规定的Ⅱ组，低温5℃,高温35℃进行高低温试验，应满足5.4要求。5.8运输、运输贮存仪器在运输包装状态下，包括低温贮存、高温贮存、跌落、碰撞、交变湿热，按GB/T11606-2007表1中运输、运输贮存的要求进行试验，其中高温55℃、低温-20℃、交变湿热：相对湿度95％、温度40℃;倾斜跌落高度250mm，碰撞1000次。试验后，包装箱不应有较大变形和损伤，受试仪器不应有变形松脱、涂覆层剥落等机械损伤。试验后，仪器的性能指标和安全要求应符合5.4～5.5。6JB/T15095—202x5.9校验仪器应定期校验，包括日常校验、监督校验和质量控制。6试验方法6.1试验条件试验条件同5.1。6.2试剂及设备试剂及设备包括：a)除非另有说明，试验用到的化学试剂均为分析纯。b)标准菌株：ATCC25922或等效菌株。c)标准菌悬液：按GB/T5750.12，配制标准菌株增殖至试验所需浓度。d)试验用水：为高压灭菌后的水，符合GB/T6682Ⅲ级水要求。e)零点校正液：无菌水。f)消毒液：按仪器操作说明书配置。g)培养基：按GB/T5750.12推荐方法或等效方法配制，贮存于0℃~4℃环境。h)温度计/热电偶：精度不小于0.1。6.3试验准备操作步骤：a)将仪器通电后，按照使用说明书进行仪器预热，等待各部分稳定运行；b)按照检测频率提前放置一定数量的装有培养液的培养瓶于自动供给单元，并按照检测频率及要求设置程序；c)准备好仪器清洗用的无菌水；d)准备好仪器消毒用的消毒液；e)按说明书中的校准方法，用标准菌悬液进行曲线校正。6.4外观和结构目视和手感检验。6.5功能按照使用说明书检查仪器各项功能。6.6性能测试6.6.1定性仪器预热后，测量无菌水，连续测量6次，6次均未检出视为合格；然后用不大于101CFU/mL（或MPN/100mL）的标准菌悬液，连续测量6次，6次均检出视为合格。6.6.2定量6.6.2.1准确度仪器预热后，导入浓度为103CFU/mL和106CFU/mL（或103MPN/100mL和106MPN/100mL）两种浓度的标准菌悬液分别进行测量，每种溶液连续（或同时）测量6次，按公式（1）计算各浓度相对误差。取相对误差中绝对值最大者为仪器的准确度。 Re=···························································(1)式中：Re——相对误差；x——6次测定值的以10为底的对数的平均值；C——标准菌悬液浓度值，以10为底的对数值。6.6.2.2重复性7JB/T15095—202x仪器预热后，导入浓度为105CFU/mL（105MPN/100mL）的标准菌悬液分别进行测量，可通过仪器检测池连续（或同时）测量6次，按公式（2）将测量值依次以10为底取对数后计算6次测定值的相对标准偏差，作为仪器的重复性。式中：RsD——相对标准偏差；n——测定次数；yi——第i次测量值的以10为底的对数值；y-——6次测量值的以10为底的对数的算术平均值。6.6.2.3定量下限仪器预热后，导入零点校正液溶液（0CFU/mL或0MPN/100mL）进行测量，至少测量6次，按公式（3）计算n（n=6）次测定值的标准偏差，按公式（4）计算仪器的定量下限。DL=10sb……·····················································(4)式中：sb——n次测定零点校正液溶液的标准偏差；n——测定次数；zi——第i次测量值的以10为底的对数值；z-——6次测量值的以10为底的对数的算术平均值；DL——定量下限，单位为CFU/mL或MPN/100mL。6.6.2.4实际水样比对试验仪器预热后，选择量程范围内某一浓度的实际水样，连续（或同时）测量至少6次，与标准方法（HJ347.2或GB/T5750.12）测量实际水样6次的平均值进行比对，按公式（5）计算实际水样仪器测量值与标准方法测量平均值的相对误差绝对值的平均值。试验过程应保证仪器与标准方法测试水样一致。×100%.........................................................式中：A——相对误差绝对值的平均值；xi——仪器第i次的测量实际水样的测量值，用以10为底的对数值表示；B——用标准方法（按HJ347.2或GB/T5750.12）测量实际水样的测量值的平均值，用以10为底的对数值表示；n——测试所得数据的总个数；i——比对试验次数。6.7安全要求试验6.7.1绝缘电阻仪器不连接供电电源，且电源开关处于开启状态时，将绝缘电阻测试仪的两根接线分别接在仪器电源插头的相（或中）线及接地端上，测试仪器的绝缘电阻。6.7.2介电强度按GB/T34065—2017中6.3.2规定方法进行。6.7.3保护接地按GB/T34065—2017中6.4.2.2规定方法进行。8JB/T15095—202x6.8防护等级按GB4208—2017中第12章~第14章方法进行。6.9环境适应性按GB/T11606—2007中第4章进行低温试验，第5章进行高温试验。6.10运输、运输贮存按GB/T11606—2007第8章、第15章~18章相关方法进行。6.11校验校验方法按附录A。7检验规则7.1检验分类仪器检验分为出厂检验和型式检验。7.2出厂检验7.2.1每台仪器应经检验合格，并附有产品合格证方可出厂，所检验的项目见表2。7.2.2出厂检验不合格或有不合格项目，则应返工然后复验。复验全部项目合格后，方可出厂。7.3型式检验7.3.1检验时机在下列情况之一时，应进行型式检验：a)仪器进行转厂生产或试制定型鉴定；b)仪器正式生产后，如结构、材料、工艺有较大改变，可能影响仪器性能时；c)仪器长期停产，恢复生产时；d)仪器正常生产时，定期或积累一定产量后，应周期进行一次检验；e)出厂检验结果与上次型式检验有较大差异时。7.3.2抽样方案型式检验的样本应从出厂检验合格的批中随机抽取，样本量不少于2台。7.3.3判定规则7.3.3.1型式检验项目及不合格类别见表2。7.3.3.2型式检验的样本抽取应按GB/T2829—2002中5.9的规定。采用的抽样方案、检验的不合格分类、检验项目及对应的条目、不合格质量水平、判别水平、样本量和判定数组等要求应在产品标准中规定。7.3.3.3合格与不合格的判定应按GB/T2829—2002中5.11的规定进行。7.3.3.3.1若型式检验合格，对进行抽样的该批产品可以提交鉴定、定型或出厂、入库。7.3.3.3.2若型式检验不合格，应分析原因，采取纠正措施，验证有效后，重新提交检验。若型式检验再次不合格，则对进行抽样的该批产品停止出厂，再重复上述分析、纠正、验证、重新提交的步骤，直至合格为止。9JB/T15095—202x表2仪器检验项目表1●●2●●3●●4●●5●●6●●8—●9●●—●—● ●—○8标志、包装、运输和贮存8.1标志8.1.1仪器的标志仪器外观应包含如下标志：a)制造商名称、地址；b)仪器名称、型号、规格；c)制造日期；d)出厂编号；e)电源电压、电源频率；f)必要标志的技术参数；g)有关法规规定的其他信息。8.1.2包装标志仪器包装箱应包含如下标志：a)仪器型号、名称；b)制造厂名称、地址；c)箱体体积：长×宽×高，单位为毫米（mmd)质量：单位为千克（kg）；e)出厂编号、包装箱序号及数量；f)包装储运图示标志：“易碎物品”“向