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备案号：42285-2014DB22DB22/T2079—2014皮革中动物源性成分检测实时荧光PCR法Detectionofanimal-derivedingredientsinleatherbyrealtimePCRmethod2014-05-04发布2014-06-01实施吉林省质量技术监督局发布I1GB/T6682分析实验室用水规4.2三羟甲基氨基甲烷[tris(hydroxy2哺乳动物特上游引物：5’-AGTGCTTAGTTGAATTAGGCCATG-3’下游引物：5’-TCCAGTATGCTTACCTTGTTACGA-3’探针：5’-（FAM）-CGCACACACCGCCCGTCACCC-（TAMRA）-3’上游引物：5’-CCGATGGATGTGTTCAGAGCT-3’下游引物：5’-GCCAAATGTCTGGGTGTAGATACC-3’探针：5’-（FAM)-TGGGCTTTAGGGCTTCCGAATGTGAA-(TAMRA)-3’上游引物：5'-ACACAACTTCTACCA下游引物：5'-AAACAATGAGGGT探针5'-(FAM)–ACACCGAAA上游引物：5'-CATGCGTATCACCACCATTATATC-3’探针：5'-（FAM）-CGAGCTTAACTACCATGCCGCGTGA-(TAMRA)-3’3相)于一新离心管中，加入等体积的三氯甲烷/），min，4℃,12000r/min离心10min，小心弃去上清液，向沉淀加入500µL70%冷乙醇，洗涤沉淀，4℃,12000r/min离心5min，小心倒出上清液，室温干燥后，将DNc——DNA浓度，单位为微克每微升(µg/µL4/30s，72℃/30s，45个循环，在每次循环的72℃/30s时收集荧光。检测结果后，根据扩增曲线和Ct待测样品牛/羊/猪源性基因检测Ct值在36～40之间，应重做

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