固相膜免疫分析技术技术VIP

临床免疫学检验固相膜免疫分析技术北京大学第一医院检验科刘平固相膜免疫分析技术掌握胶体金免疫技术原理、技术要点掌握不同膜载体免疫技术的原理熟悉金免疫检测的临床应用了解胶体金和免疫金的制备了解固相膜及其技术要求概述：

随着免疫学技术和相关生物化学技术的发展，检测方法上派生出了多种类型的固相膜免疫快速检测试验。该类试验的最大特点是不需要大型设备，对检测人员稍加培训即能掌握操作要求和判定标准。固相膜免疫分析技术：

是以微孔膜作为固相载体，利用液体可以流过微孔膜也可通过毛细管作用在膜上向前移行的特性，以酶标记或者各种有色颗粒（如彩色胶乳、胶体金、或胶体硒等）标记抗原或抗体作为标记物，通过抗原抗体反应进行抗原或抗体检测的快速检验方法。常用的固相膜玻璃纤维素(fiberglass)膜尼龙(nylon)膜聚偏氟乙稀(polyvinylidenefluoride，PVDF)膜硝酸纤维素（nitrocellulose，NC）膜固相膜的特点多孔性滤纸毛细管作用非共价键高度吸附抗体或抗原高度敏感性易于漂洗操作简便固相膜的技术要求孔径：穿流法的膜一般选择0.4μm左右；横流法的膜可选择5μm〜10μm流速：孔径和分布结构影响膜的流动速率，孔径大，流速快。以ml/cm2/min表示蛋白质结合力：吸附力很强，以μg/cm2表示均一性优质的膜具有良好的均一性。固相NC膜固相膜免疫测定的特点

优点不足之处简便，快速敏感度略低，价格略高（与ELISA比）单份测定精密度较差，质控困难保存期长（优质试剂）稳定性较差（普通试剂）可测定物范围广（主要为定性试验）不易制备定量、半定量试剂感染性疾病的诊断妊娠、排卵的诊断肿瘤标志心肌标志滥用药物固相微孔膜测定种类斑点金免疫渗滤试验(dotimmunogoldfiltrationassay,DIGFA)斑点金免疫层析试验（dotimmunogoldchromatographicassay,DICA）斑点ELISA(dotenzymelinkedimmunosorbentassay,Dot-ELISA)酶联免疫斑点试验(enzymelinkedimmunospot,ELISPOT)

免疫印迹法(immunoblottingtest,IBT)

放射免疫沉淀试验(radioimmunoprecipitationassay,RIPA)

常用的标志物酶和有色微粒子彩色胶乳荧光素胶体金和胶体硒等其中以胶体金和荧光素最为常用胶体金免疫技术（免疫金标记技术或金免疫技术）胶体金免疫技术（colloidalgoldimmunoassay）是以胶体金作为标记物（示踪剂或显色剂），应用于抗原抗体反应的一种标记免疫测定技术。1971年由Faulk和Taylor始创，最初用于免疫电镜技术。目前得以广泛应用。胶体金免疫技术

金免疫测定技术：斑点免疫金渗滤试验斑点免疫金层析试验金免疫组织化学染色技术：

金免疫电镜染色技术金（银）免疫光镜染色技术胶体金与免疫金的制备1.胶体金的特性及制备2.免疫金的制备胶体金与免疫金的制备1.胶体金的特性及制备胶体金的结构胶体金特性胶体金的制备胶体金鉴定和保存注意事项胶体金的结构胶体金（colloidalgold）也称金溶胶（goldsolution），是由金盐被还原成金原子后形成的金颗粒悬液。胶体金颗粒由一个基础金核（原子金Au）及包围在外的双离子层构成，紧连在金核表面的是内层负离子（AuC12－），外层离子层H+则分散在胶体间溶液中金颗粒间静电相互排斥而悬浮形成一种稳定的胶体状态。胶体金颗粒的基础金核并非是理想的圆球核，较小的胶体金颗粒基本是圆球形的，较大的胶体金颗粒（一般指大于30nm以上的）多呈椭圆形。在电子显微镜下可观察胶体金的颗粒形态。胶体金特性（1）胶体金一般性质：胶体金颗粒大小多在1～100nm，微小金颗粒稳定地、均匀地、呈单一分散状态悬浮在液体中，成为胶体金溶液。胶体金因而具有胶体的多种特性，特别是对电解质的敏感性。（2）呈色性和光吸收性：对同一种物质的水溶胶金颗粒来说，粒子大小不同，颜色亦不同：胶体金颗粒在5～20nm之间，吸收波长520nm，呈葡萄酒红色。胶体金颗粒20～40nm之间吸收波长530nm，液体为深红色，60nm的金溶液主要吸收波长600nm，金溶液呈兰紫色，若离心去掉较大的金颗粒，溶胶呈红色。根据这一特点，用肉眼观察胶体金的颜色或吸收峰波长大小可粗略估计金颗粒的大小。

呈色和光吸收性粒子大小不同，光吸收性不同，颜色亦不同：10～20nm，吸收峰530nm，呈橙色。20～80nm，吸收峰600nm，呈紫红色。根据这一特点，可用肉眼观察胶体金的颜色或吸收峰波长大小可粗略估计金颗粒的大小。稳定性稳定:颗粒做布朗运动不易受重力影响而下沉.又不稳定:自身因素与外部因素.自身因素:相互碰撞而合并为较大颗粒而下沉。外部因素:电解质、浓度、温度、稳定剂。胶体金的制备

制备原理向一定浓度的氯金酸溶液内加入一定量的还原剂，使金离子变成金原子，形成金颗粒悬液。常用的还原剂：白磷、硼氢化钠、抗坏血酸、柠檬酸钠、鞣酸等。技术要点最常用的制备方法为柠檬酸三钠还原法柠檬酸盐还原法：①先配制HAuCl4水溶液，加热至沸②搅动下准确加入一定量的柠檬酸三钠水溶液③继续加热煮沸一定时间。此时可观察到淡黄色的氯金酸水溶液在柠檬酸钠加入后很快便灰色，继而转成黑色，随后逐渐稳成红色④冷却至室温后用蒸馏水恢复至原体积

四种粒径胶体金的制备及特性胶体金粒径（nm）1％柠檬酸三钠加入量（ml）*胶体金特性呈色λmax16.002.00橙色518nm24.501.50橙红522nm41.001.00红色525nm71.500.70紫色535nm鉴定和保存指标：粒径大小，均一度，有无凝集粗略：日光；分光光度计电镜：统计胶体金的平均粒径。良好的胶体金应该是清亮透明的。若混浊或表面有漂浮物，提示有较多的凝集颗粒。胶体金（15~60nm）优质劣质室温、避光、无尘、洁净器皿：3个月。

加入少许防腐剂（如0.02％NaN3）可有利于保存。4℃,半年。-20℃×尽快标记

鉴定和保存注意事项（1）氯金酸易潮解，应干燥、避光保存。（2）氯金酸对金属有强烈的腐蚀性，因此在配制氯金酸水溶液时，不应使用金属药匙称量氯金酸。（3）用于制备胶体金的蒸馏水应是双蒸馏水或三蒸馏水，或者是高质量的去离子水。（4）用以制备胶体金的玻璃容器必须是绝对清洁的，用前应先经酸洗并用蒸馏水冲净。最好是经硅化处理的，硅化方法可用5％二氯甲硅烷的氯仿溶液浸泡数分钟，用蒸馏水冲净后干燥备用。免疫金的制备概念：免疫金（immunogold）是指胶体金与Ag或Ab的结合物,有时称之为金探针。原理：不明，物理吸附，靠静电力相互吸引而牢固结合。不影响蛋白质的生物活性。目前多认为：当溶液的pH值等于或略高于蛋白质的PI时，蛋白质分子的表面张力最大，易于吸附在金颗粒的表面。由于蛋白质分子牢固地结合在金的表面，形成一个蛋白层，阻止了胶体金颗粒的相互接触，从而使金溶胶处于稳定状态。技术要点(1)胶体金溶液的pH值调整：调节至PI或偏碱。(2)蛋白质最适标记量的确定：系列稀释蛋白，加一定量胶体金，NaCl,以红色保持不变而蛋白含量最低的一管为最适标记量。(3)标记过程；搅拌、加一定量稳定剂（BSA/PEG）。(4)标记物纯化:超速离心法、

凝胶过滤法。

免疫金的保存免疫金复合物最终用稀释液配制成工作浓度保存。稀释液通、常是加入含稳定剂的缓冲液。缓冲溶液常用中性的PBS或Tris缓冲液。PEG和BSA是最常用的稳定剂。稳定剂有两大作用：①为保护胶体金的稳定性，使之便于长期保存；②为防止或减少免疫金复合物的非特异性吸附反应。胶体金免疫测定技术一、斑点金免疫渗滤试验(dotimmunogoldfiltrationassayDIGFA)二、斑点金免疫层析试验(dotimmunogoldchromatographicassayDICA)一、斑点金免疫渗滤测定法

（dotimmuno-goldfiltrationassay）双抗体夹心法为例：将Ab点加在固相载体NC膜上(渗滤装置）。当滴加在膜上的标本液体渗滤过膜时，标本中含Ag被膜上Ab捕获。其后加入的免疫金与已结合在膜上的Ag相结合。因胶体金本身呈红色，阳性反应即在膜中央显示红色斑点斑点金免疫渗滤试剂盒组成斑点金免疫渗滤试剂盒组成主要由渗滤装置、胶体金标记物、洗涤液、抗原参照品或抗体阳性对照品四部分组成。其中渗滤装置是由塑料小盒、吸水垫料和已点加抗原或抗体的硝酸纤维素膜片三部分组成。试剂盒一般都设有质控点，质控点的大小或形状都不同于检测点，有的用大小点区分、有的用点横线区分，有的用横竖线区分

（二）方法类型1．双抗体夹心法2．间接法DIGFA—双抗体夹心法测抗原AB操作：加样A；加金标记物；洗涤B，观察阳性阴性间接法测抗体阳性阴性固相膜固相抗原待测抗体金标二抗人人IgG快速检测（渗滤法）原理图二、斑点金免疫层析试验

（dotimmunogoldchromatographicassay)

原理：滴加在膜一端的标本受膜的毛细管作用向另一端移动，犹如层析一般，被分析物与固定于载体膜上某一区域的Ab或Ag结合，无关物则越过该区域而被分离，然后通过胶体金的呈色条带来判定实验结果。试纸条组成结构测试线（T线）控制线（C线）胶体金垫吸水滤纸样品垫NC膜（硝酸纤维素膜）层析方向PVC底板有4个组分：⑴、吸水纸（样品垫）。⑵、玻璃纤维膜（胶体金垫）。膜上吸附着干燥的金标抗体（流动带）。⑶、硝酸纤维素膜，膜上包被着抗原或抗体条带和能与标记物直接起反应的质控物条带（检测带）。⑷、吸水纸。以上各组份首尾互相衔接。

斑点金免疫层析：以NC膜为载体，结合抗原抗体反应、金标技术与蛋白质层析技术的快速固相膜免疫分析技术。DIGFA穿流（flowthrough）DICA横流（lateralflow）(二)方法类型1.双抗体夹心法2.竞争法/抑制法3.间接法1.双抗体夹心法测抗原标本Goldtestcontrol

结果观察

阳性阴性无效Goldtestcontrol2.竞争法测抗原标本阳性结果标准抗原Goldtestcontrol标本阴性结果2.竞争法测抗原Goldtestcontrol结果观察

阳性阴性无效3.间接法测抗体待测血清标本中含有大量的非特异性IgG，降低了试验敏感性.为消除其影响，间接法常设计成：反流免疫层析法。与特异性IgG竞争结合金标抗人IgG，缺点：间接法(反流免疫层析)？？AGoldB观察窗EFMarkerCTCT非特异性抗体待测抗体金标抗体羊抗兔IgG胶体金免疫组化技术一、免疫金电镜染色技术二、免疫金（银）光镜染色技术免疫金电镜染色技术

金标记物与待检标本的相应蛋白质发生结合反应,由于胶体金颗粒具有高电子密度的特性。原理

电镜下观察，在金标蛋白结合处可见黑褐色颗粒，从而对细胞膜上或胞内蛋白质进行定性与定位。原理：金标记物与镍网上待检Ag/Ab发生结合反应

结合的金标蛋白黑褐色颗粒(电镜下)胶体金颗粒的高电子密度的特性对细胞膜上或细胞内的Ag/Ab进行定性与定位

原理

通过免疫反应，沉积在抗原位置的胶体金颗粒起着一种催化剂作用，用还原剂将银离子(Ag+)还原成银原子(Ag)，被还原的Ag围绕金颗粒形成一个“银壳”，“银壳”一旦形成本身亦具有催化作用，从而使更多银离子还原并促使“银壳”越长越大“，最终使抗原位置得到清楚放大。免疫金（银）光镜染色技术

原理：

免疫反应胶体金颗粒(CG)沉积在Ag位置

CG催化，对苯二酚还原剂银离子(Ag+)还原成

银原子(Ag)

银原子围绕金颗粒形成一个“银壳”

“银壳”催化，还原更多银离子“银壳”越长越大,抗原位置得到清楚放大小结1

金免疫测定技术斑点金免疫渗滤试验：原理、技术类型、技术要点斑点金免疫层析试验：原理、技术类型、技术要点2金免疫组织化学技术免疫金(银)光镜染色技术免疫金电镜染色技术3临床应用及评价：优点与缺点影响固相膜免疫试验的主要因素

影响因素：试剂试剂的选择：注意试剂的注册号、批号、有效期和检验合格证等；不同批号的试剂不能混用；不能使用过期的试剂。试剂的准备：试剂在开封前应检查是否漏液、漏气；使用前要在室温（18℃～25℃）下平衡20min～30min。影响固相膜免疫试验的主要因素

影响因素：标本标本处理：临床检测的标本有痰液、尿液、粪便、棉拭子、血清和血浆等。检测前，需进行相应的前处理，如痰液或粪便，需用缓冲液或生理盐水稀释后，低速离心，取上清进行检测。标本保存：对于采集的标本如不能立即检测，需要保存在2℃～8℃，不超过24小时，超过24小时以上，需保存在-20℃以下，忌反复冻融。影响固相膜免疫试验的主要因素

影响因素：实验过程温度及时间结果判定检测前要平衡至室温（18～25℃）后再开袋使用。无特殊说明，检测的温度为18～25℃，时间在3Omin以内。一些胶体金诊断试剂条只用于初步诊断，确诊需采用免疫印迹实验进行。试剂条平衡

层析法技术优势:简单\现场\快速1.打开包装取出试纸条2.直接插入待测样品中3.目测读出结果（3-10分钟内）

与常规诊断方法相比

优点缺点快速：全部检测过程仅需3-10分钟。简便：不需其它任何仪器设备，操作也极其简单，无需专业人员，携带方便，可随时随地进行。廉价：单个测试条成本极低

可单份检测：对标本既能成批检测，又可单份检测，可立刻拿到结果，不必等待。

稳定性好：金标试剂稳定，可长期保存。

检测标本种类多：既可用于查血，又可用于检尿或唾液，因而适合各种检查定量问题灵敏度问题临床应用及评价1.免疫金技术具有操作简便、快捷以及操作人员不需技术培训，无需特殊仪器设备，试剂稳定，便于保存等特点，因此特别符合“床边检验”

(pointofcaretest,POCT)项目要求。2.本法灵敏度不及酶标法和酶发光免疫测定法，在临床应用中应引起高度重视。3.该技术不能准确定量，只能作为定性或半定量试验，目前主要应用于正常体液中不存在的物质（如传染病抗原和抗体以及毒品类药物等）和正常含量极低而在特殊情况下异常升高的物质（如HCG等）的检测。

技术应用类别应用领域检测的物质人类医学各级医院,血站,CDC,防疫站,诊断中心；家庭自检；商检系统；边检口岸；公安系统.传染病（乙肝五项,HIV,SARS等）标志物（AFP、肌钙蛋白、粪便血红蛋白等）女性妊娠（hCG(早孕),LH,FSH)毒品（吗啡,K粉,摇头丸,冰毒）农牧业畜牧兽医站,商检系统,边检口岸,农牧类院系和研究所传染病（禽流感,兽瘟疫等）环境环保监测部门,研究机构有害物质超标食品安全食品安全检测中心,各监管部门农兽药残留（磺胺类、瘦肉精等）,大肠杆菌,黄曲霉素快速检测流程结果判定OraQuickPositiveNegativeReactiveControlPositiveHIV-1/2Readresultsin20–40minutes不同厂家的试剂操作要求厂家样品要求血量(ul)样品稀释是否加缓冲液最小反应时间(分钟)最大反应时间(分钟)试剂储存要求明胶颗粒法(PA)血清/血浆251:32N120/2-10℃DETERMINE血清/血浆/全血50N用全血时加1滴15602-30℃SD血清10NN5201-30℃,不能置冰箱保存杭州艾康血清/血浆/全血25NY10202-30℃,勿冻存上海科华血清/血浆40NY/304-30℃厦门新创血清/血浆/全血60NY1304-30℃广州万孚血清/血浆/全血80-100N用全血时加2滴10304-30℃,勿冻存北京万泰血清/血浆80N用全血时加1滴/30室温储存，可置2-8℃检测质控

检测前要求实验室人员要熟读试剂说明书，严格按照说明书要求操作执行。一般彝族老乡只接受采集指尖血，不愿意采集静脉血，所以在使用试剂时要注意，有些试剂只能查血清和血浆，检测时就不能用全血（如中新科技、SD）。加入样品一定要严格按照说明书加样，如：科华加40ul,新创加50ul,雅培加50ul,万泰80ul,SD10UI,中新科技70-100UI,艾康50UI.万浮80UI.加入的样本量不符合要求，会严重影响实验结果的判定。实验条件质控

实验条板反应时间，一定要在15-30分钟内观察结果，在督导过程中曾经发现，个别检测点人员没有手表，时间靠估计，在不到15分钟就判读结果，影响结果的正确判断。为此，我们已经向凉山州艾滋病防治局提出申请，每个检测点配置一个定时钟。实验温度控制

凉山州属于高寒山区，冬天部份地区气温都在-0℃以下，严重影响实验结果，目前，在没有条件的情况下，检测点依靠电炉将室温升高。但是，这不能从根本上解决问题，我们已经向州艾滋病防治局提出申请，每个检测点配置一台小型桓温孵箱。斑点酶免疫吸附试验——Dot-ELISA

实验原理与常规的ELISA相同，不同之处在于Dot-ELISA所用载体为NC膜。其原理为样品中的抗体或抗原与预先包被在NC膜上的抗原或抗体发生抗原抗体反应，然后再加入相应的酶标二抗进行反应，反应结束后，通过酶催化底物，形成有色的沉淀物，产生显色反应，根据染色条带或斑点的有无或深浅，对抗体或抗原进行检测。阳性者即可在膜上出现肉眼可见的染色条带或斑点。免疫印迹实验免疫印迹试验（immunoblottest，IBT）又称酶联免疫电转移印迹法（enzyme

lingkedimmunoelectrotransferblot，EIBT），通常又称Westernblot，是一种将高分辨率凝胶电泳和免疫化学分析技术相结合的技术，具有分析容量大、敏感性高、特异性强等优点，是检测蛋白质特性、表达与分布的一种最常用的方法。免疫印迹实验蛋白免疫印迹试验

重组免疫印迹试验（recombinantimmunoblotassay，RIBA）利用基因重组的方法，将各种抗原表达、纯化后（也可直接合成抗原多肽）以横线条的形式吸附或包被在NC膜条上，用于疾病的诊断和检测。特异性较ELISA高，敏感性稍差。临床常用于病原体的确认试验和含复杂抗原成分的病原体抗体的分析。发展历程印迹法（blotting）是指将样品转移到固相载体上，而后利用相应的探测反应来检测样品的一种方法。1975年，Southern建立了将DNA转移到硝酸纤维素膜（NC膜）上，并利用DNA－RNA杂交检测特定的DNA片段的方法，称为Southern印迹法。而后人们用类似的方法，对RNA和蛋白质进行印迹分析，对RNA的印迹分析称为Northern印迹法，对单向电泳后的蛋白质分子的印迹分析称为Western印迹法，对双向电泳后蛋白质分子的印迹分析称为Eastern印迹法Towbin,H.,etal.(1979).Electrophoretictransferofproteinsfrompolyacrylamidegelstonitrocellulosesheets:procedureandsomeapplications.Proc.Natl.Acad.Sci.USA76,4350-4354.

Westernblot原理蛋白质(病毒、细菌蛋白)经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS），根据相对分子量的大小分成区带，然后通过转移电泳将SDS上的蛋白质转印到硝酸纤维滤膜上加上相应的标记抗体（如酶标抗体、胶体金标记抗体、荧光抗体、放射性同位素标记抗体），也可先加抗体反应，再加标记的抗抗体，通过对抗体的标记物的检测，以分析特异性抗原蛋白区带。为什么要作蛋白质印迹实验？

研究一些体外的蛋白质分子，寻找目的蛋白是否存在样品当中蛋白质的表达情况，上调或下调表达，在不同的样品中，如疾病和正常的样品之间的表达差异性。免疫印迹法—Westernblot法原理Westernblot——抗原表位可能被破坏而漏检

Westernblot基本步骤（一）SDS（目的蛋白的分离）1、收集蛋白样品裂解液裂解细胞、或组织样品，通过有机溶剂或水溶法制备总蛋白水溶液提取法针对水、稀盐、稀酸或碱溶液中的蛋白质。稀盐和缓冲系统的水溶液对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质最常用的溶剂。有机溶剂提取法对于分子中非极性侧链较多的蛋白质可用有机溶剂提取，包括乙醇、丙酮和丁醇等。2、蛋白质浓度测定目前常用比色法测定样品蛋白的含量3、电泳4、电泳结果检查

StakinggelSeparatinggelWesternblot

（二）电转移（或转印、转膜）转印就是将蛋白质由SDS凝胶上转移到固相支持物上。首选的固相支撑物是硝酸纤维滤膜（NC膜）通常有两种方法：毛细管印迹法和电泳印迹法。常用的电泳转移方法有湿转和半干转。两者的原理完全相同，只是用于固定胶/膜叠层和施加电场的机械装置不同。原料是基础--膜选择种类NCPVDF尼龙膜选择标准a.膜与目的蛋白分子的结合能力（也就是单位面积的膜能结合蛋白的载量），以及膜的孔径（也就是拦截蛋白的大小）；b.不影响后续的显色检测（也就是适和用于所选的显色方法，信噪比好）；c.后继实验有其他要求，比如要做蛋白测序或者质谱分析，还要根据不同目的来挑选不同的转移膜膜的特点Westernblotting（三）（酶）免疫定位1.膜的封闭为防止NC膜的非特异性背景着色，用封闭液对NC膜进行封闭。常用的封闭液为加有脱脂奶粉、小牛血清或牛血清白蛋白的缓冲液。2.靶蛋白与特异性抗体（一抗）反应

将可识别靶蛋白的McAb或PcAb与NC膜一同温育。3.靶蛋白与标记的二抗反应

待上步反应结束后，洗涤NC膜，使之与标记的二抗反应，二抗可用放射性同位素、酶、生物素、胶体金等标记。4.指示反应

根据标记物的不同，可采用放射自显影、底物显色等，在NC膜上显示相应的检测蛋白带Westernblot

Westernblot中应该注意的问题（一）首先应该确定检测蛋白经SDS和还原剂处理后，其抗原决定簇仍然可与相应的抗体结合。特别是在用单克隆抗体作为第1抗体时应考虑这一点。（二）要保证检测所用抗体的特异性，尤其是一抗的特异性更为重要。另外，对一抗和标记体的使用浓度，通常要根据实际情况作适当的调整。（三）实验操作过程中，拿取凝胶、滤纸和NC膜的时候，必须戴手套，因为皮肤上的油脂和分泌物会阻止蛋白质从凝胶转移到滤膜上。Westernblot

（四）转印时要注意电流的大小，过高的电流产生的热量会在凝胶和NC膜之间形成气泡，从而导致转印的失败。有报道，在转印缓冲液中加入20%的甲醇，虽然降低蛋白质的洗脱效率，但可以提高其与硝酸纤维素结合的能力。或者可以在缓冲液中加入终质量分数为0.1%的SDS,也可以提高转印效率。WesternBlot优点

高分辨率的电泳技术特异敏感的抗原-抗体反应

1-5ng中等大小的靶蛋白Westernblot

方法学评价：1.抗体的性质2.IBT的灵敏度3.IBT法在临床应用中的局限性

Westernblot

应用免疫印迹技术是蛋白质组分分析和蛋白多肽相对分子质量分析的主要方法，已广泛用于病毒蛋白和基因表达重组蛋白多肽的分析，是基因工中不可缺少的方法之一梅毒螺旋体抗体免疫印迹试验（IgG）不同分子量的梅毒螺旋体抗原经电泳分开，电转移至醋酸纤维素