DB52T1661-2022地方鸡资源场禽白血病净化技术规程

DB52/T1661—2022

地方鸡资源场禽白血病净化技术规程

1范围

本文件规定了贵州地方鸡资源场禽白血病净化养殖条件与要求、检测条件、、净化流程与方法、种蛋

选留与孵化、净化效果与评估、无害化处理和养殖档案记录等。

本文件适用于贵州地方鸡资源场。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB3095环境空气质量标准

GB/T6682分析实验室用水规则和试验方法

GB13078饲料卫生标准

GB18596畜禽养殖业污染物排放标准

GB/T26436禽白血病诊断技术

NY/T388畜禽场环境质量标准

NY/T680禽白血病病毒p27抗原酶联免疫吸附试验方法

NY5027畜禽饮用水水质

中华人民共和国农业部农医发〔2017〕25号病死及病害动物无害化处理技术规范

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

贵州地方鸡

被列入《国家地方畜禽品种资源目录》原产于贵州的地方鸡品种。

3.2

资源场

从事地方鸡品种资源保护或提纯复壮的养殖场。

3.3

禽白血病净化

在贵州地方鸡养殖场或指定区域内，对通过持续监测禽白血病阳性感染的地方鸡种群，经多代次阳

性检测筛查，淘汰感染阳性个体以实现根除禽白血病的过程。

3.4

禽白血病病毒p27抗原

p27抗原为禽白血病病毒衣壳蛋白，该蛋白在各亚群之间具有高度的同源性和保守性，为群特异性

抗原，禽白血病外源性病毒和“E”亚群内源性病毒，在感染细胞后都可产生。

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3.5

禽白血病Ab和J亚群病毒

Ab和J亚群病毒为外源性禽白血病病毒的两个不同亚群,对禽具有较强的致病性。

4养殖条件与要求

4.1资源场养殖环境空气质量应符合GB3095的规定；饲料卫生应符合GB13078的规定；饮用水水质

应符合NY5027的要求；场环境质量应符合NY/T388的要求。

4.2对实施净化的核心种鸡群要单独分区隔离饲养并远离其他鸡群，安排专职人员员管理。

4.3对净化鸡群使用弱毒疫苗的质量规范做到疫苗无外源性禽白血病毒污染。

4.4场区消毒每周不少于2次。

4.5每天及时清除粪污，并对粪便做无害化处理。

5检测条件

5.1检测实验室用水规则和检测方法应符合GB/T6682规定。

5.2主要试剂与主要仪器见附录A。

6净化流程与方法

6.1净化流程

6.1.1根据资源场种群规模，选定一定数量的拟净化核心基础种群，对净化种鸡群群完成生产和繁育性

能测定后，采集每只鸡的血清和泄殖腔棉拭子并标记，用禽白血病Ab和J亚群抗体ELISA检测试剂盒

进行血清感染抗体阳性检测，同时用禽白血病抗原ELISA检测试剂盒和胶体金快速检检测试纸条进行血清

和泄殖腔棉拭子进行ALVp27抗原交叉检测。淘汰阳性鸡，阴性种鸡人工授精后收集种蛋孵化。

6.1.2对阴性种鸡繁育的第一世代1日龄雏鸡（出壳24小时以内）全部采集胎粪并标记，用禽白血病

抗原ELISA检测试剂盒和胶体金快速检测试纸条进行ALVp27抗原交叉检测，按全同胞淘汰阳性雏鸡及

其对应的种母鸡，阴性雏鸡按全同胞上笼育雏和育成。

6.1.3第一世代净化种鸡开产初期，全群采集鸡血清和泄殖腔棉拭子，用禽白血病病抗原ELISA检测试

剂盒和胶体金快速检测试纸条进行ALVp27抗原交叉检测；公鸡采集精液用PCR方法进行ALVp27抗原

检测。淘汰阳性鸡。

6.1.4在留种前的第28周龄～30周龄，全群采集鸡泄殖腔棉拭子，同时每只母鸡取取2枚种蛋的蛋清，

用禽白血病抗原ELISA检测试剂盒和胶体金快速检测试纸条进行ALVp27抗原交叉检测；采集公鸡精液

用PCR方法进行ALVp27抗原检测。淘汰阳性鸡，阴性种鸡进行人工授精，收集种蛋进行孵化。

6.1.5在完成第一世代的禽白血病检测与净化后，对2～3个世代次的鸡群禽白血血病检测与净化从1

日龄雏鸡开始，重复6.1.2～6.1.4操作步骤。

6.2样品采集与处理

6.2.1无菌采集鸡泄殖腔棉拭子加入1mL样品稀释液后，反复冻融3次待检。

6.2.2鸡翅静脉无菌采血，用高速离心机分离血清样品用于检测。

6.2.3每只种母鸡收集2枚种蛋，每枚种蛋吸取1mL蛋清，-20℃反复冻融3次后后用于检测。

6.2.4将种公鸡泄殖腔周围用酒精棉球擦拭干净，轻轻按摩其腹部至尾部，待泄殖殖腔外翻时，轻轻挤

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压泄殖腔外缘，将精液接入装有1mL稀释液（含青链霉素的灭菌PBS液）的灭菌离心管中，混匀后，

离心取上清液用于检测。

6.2.5当天收集出壳雏鸡胎粪，用灭菌指形管按鸡只个体分别收集样品，加入1mL的样品稀释液，轻

轻挤压雏鸡的腹部，排出胎粪，装进样品管中，用洁净小棒搅动指形管里胎粪，待混匀经反复冻融3

次后吸取上清用于检测。

6.3检测净化技术

6.3.1禽白血病病毒p27抗原酶联免疫吸附试验方法应符合NY/T680的要求。

6.3.2禽白血病病毒p27抗原PCR特异性检测方法符合GB/T26436的规定。

6.3.3禽白血病病毒抗原快速检测试纸条的操作方法参照试剂盒说明书进行。

6.4净化检测要求

6.4.1对用禽白血病病毒p27抗原酶联免疫吸附试验和胶体金试纸条检测方法进行交叉检测时，如同

一检测样本鸡的血清、泄殖腔棉拭子或蛋清检测结果不一致的，均判定为阳性，并做淘汰处理。

6.4.2要加强对鸡群的观察，密切监视鸡群状态，对有疑似临床症状的病鸡及已死亡鸡要及时淘汰，

并进行无害化处理。

7种蛋选留与孵化

所有留种母鸡经产的全部种蛋应编号并与母鸡编号一一对应，将同一只母鸡产的种蛋置于带有母鸡

编号的孵化纸袋或纸盒中，放入孵化器集中孵化。

8净化效果与评估

8.1对实施净化后的第三或第四世代核心种群种母鸡按10%随机进行抽检，若母鸡禽白血病A/B亚群、

J亚群血清抗体及p27抗原检测阳性率在1%以下，公鸡精液禽白血病p27抗原检测全部为阴性，则判定

为资源场核心种群达到禽白血病净化合格标准。若母鸡群禽白血病抗原抗体监测阳性率高于1%，则需

要再延续下一个世代次的净化。

8.2对资源场商品扩繁种群按10%随机进行抽检，若禽白血病p27抗原检测阳阳性率在7%以内，则符合

国家畜禽标准化示范场建设对鸡禽白血病的净化标准要求。

9无害化处理

9.1病死鸡的无害化处理应符合农医发〔2017〕25号的规定。

9.2鸡粪、垫料、污水等废弃物的无害化处理应符合GB18596的规定。

10养殖档案记录

每批鸡应有养殖档案（附录B），包括生产、饲料和兽药使用、消毒、免疫、诊疗和病死禽无害化

处理等，养殖档案记录保存两年以上。

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A

A

附录A

（规范性）

主要试剂与主要仪器

A.1主要试剂：禽白血病Ab和J亚群抗体ELISA检测试剂盒、禽白血病抗原ELISA检测试剂盒、禽白

血病病毒抗原胶体金快速检测试纸条、病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒、2×TaqPCRMasterMix、Tris、

EDTA、核酸染色剂、Marker等。

A.2主要仪器：全自动酶标仪、台式高速冷冻离心机、超低温冰箱、紫外可见分光光度计、梯度PCR

仪，核酸电泳系统与凝胶成像分析系统、电泳仪、微量移液器等。

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B

B

附录B

（资料性）

养殖档案记录

表B.1生产记录

禽（产品）

时数量及来源死淘数存栏数

圈舍号原因调出（出售）记录人备注

间

数量来源数量去向（地点）

表B.2饲料和兽药使用记录

停用或

使用时间名称生产企业批号/生产日期规格及用量记录人备注

休药时间

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表B.3消毒记录

日期消毒场所消毒药名称用药剂量消毒方法记录人

表B.4免疫记录

存栏免疫疫苗名称生产企批号（有备

时间圈舍号免疫方法免疫剂量记录人

数量数量及规格业名称效期）注

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表B.5诊疗记录

禽标

圈舍发病诊疗用药用药用药停药休药出栏执业兽医师

时间识编日龄病因数量

号数结果名称方法数量时间期时间（签名）

码

表B.6病死禽无害化处理记录

畜禽标识处理单位或

日期数量死因处理方法备注

编码处理人

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ICS65.020.30

CCSB01

52

贵州省地方标准

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地方鸡资源场禽白血病净化技术规程

2022-03-03发布2022-06-01实施

贵州省市场监督管理局发布

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地方鸡资源场禽白血病净化技术规程

1范围

本文件规定了贵州地方鸡资源场禽白血病净化养殖条件与要求、检测条件、、净化流程与方法、种蛋

选留与孵化、净化效果与评估、无害化处理和养殖档案记录等。

本文件适用于贵州地方鸡资源场。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB3095环境空气质量标准

GB/T6682分析实验室用水规则和试验方法

GB13078饲料卫生标准

GB18596畜禽养殖业污染物排放标准

GB/T26436禽白血病诊断技术

NY/T388畜禽场环境质量标准

NY/T680禽白血病病毒p27抗原酶联免疫吸附试验方法

NY5027畜禽饮用水水质

中华人民共和国农业部农医发〔2017〕25号病死及病害动物无害化处理技术规范

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

贵州地方鸡

被列入《国家地方畜禽品种资源目录》原产于贵州的地方鸡品种。

3.2

资源场

从事地方鸡品种资源保护或提纯复壮的养殖场。

3.3

禽白血病净化

在贵州地方鸡养殖场或指定区域内，对通过持续监测禽白血病阳性感染的地方鸡种群，经多代次阳

性检测筛查，淘汰感染阳性个体以实现根除禽白血病的过程。

3.4

禽白血病病毒p27抗原

p27抗原为禽白血病病毒衣壳蛋白，该蛋白在各亚群之间具有高度的同源性和保守性，为群特异性

抗原，禽白血病外源性病毒和“E”亚群内源性病毒，在感染细胞后都可产生。