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备案号：58311-2018DB22DB22/T394.3—2017保健用品微生物检验方法第3部分：铜绿假单胞菌测定MicrobiologicalexaminemethodforhealthcarematerialPart3:DeterminationofPseudomonasaeruginosa吉林省质量技术监督局发布I本部分代替DB22/T394-2004《1警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。本标准并未指出所有可能的安全问铜绿假单胞菌Pseudomonasaer4.1灭菌生理盐水:详见附录A.1。4.3灭菌吐温-80:详见附录A.3。25.6无菌锥形瓶：100mL、25.14冰箱：2℃~5℃。验时，应从不少于2个包装单位的取样中共取10g(5.1)或10mL(5.2)。包装量小于20g的样品，采样6.2.1供检验样品，应严格保持原有的包装状态。容器不应有破裂，在检验前不得6.2.2接到样品后，应立即登记，编写检验序号，并按检验要求尽快检验。如不能6.2.3若只有一个样品而同时需做多种分析，如微生物、毒理、化学等，则宜先取6.2.4在检验过程中，从打开包装到全部检验操作结束，均须防止微生物的再污染水溶性液体样品，用灭菌吸管吸取10mL加到90mL（5.440℃~44℃水浴中（5.5）振荡混合在40℃~44℃水浴中乳化，制成1:10的悬液。3亲水性的样品，称取10g，加到装有玻璃疏水性样品，称取10g，放到灭菌的研钵（5.7）中，加10mL灭菌液体石蜡，研磨成粘稠状再加入10mL灭菌吐温-80，研磨待溶解后，加70mL灭菌生理盐水，在40℃~44℃水浴中充分混合，制成称取10g，加到90mL灭菌生理盐水中，充分振荡（5.8）混匀，使其分散混悬，静置后，取上清上，置36℃±1℃培养（5.9）18h～24h。凡4加入氯仿3mL～5mL（5.2充分振荡使培养物中的绿脓菌素溶解于氯仿液内，待氯仿提取液呈蓝色时，用吸管将氯仿移到另一试管中并加入1mol±2h，观察结果。凡在硝酸盐胨水培养基内的小倒管（5.12）中有气体者，即为阳取出放置于4℃±2℃冰箱（5.14）10min报告被检样品中检出铜绿假单胞菌；如绿脓菌素试验阴性而液化明胶、硝酸盐还原产气和42℃生长试5试剂或材料A.1.1成分A.1.2制法A.4.1成分A.4.2制法6A.5.1成分A.5.2制法A.6.1成分无水磷酸二氢钾硫酸镁（MgSO4﹒7H2O）0.5gA.6.2制法除琼脂和酚红外，将其它成分加到蒸馏水中，加热溶解，调pH为7.2，加A.7.1.2革兰氏碘液碘7将碘与碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分A.7.1.3脱色液A.7.1.4复染液A.7.1.4.1沙黄复染液A.7.2.1将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染1min，A.7.2.2滴加革兰氏碘液，作用1min，A.8.1成分A.8.2制法将蛋白胨、氯化镁和硫酸钾加到蒸馏水中，加温使其溶解，调pH至7.4，加入琼脂和甘油，加热溶A.9.1成分

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