血液学检验技术 课件汇 韩际梅 项目1-10 造血基础理论简介 - 溶血性贫血

单元一：造血细胞检验项目一：造血基础理论简介目录任务一：胚胎期造血任务二：出生后造血任务三：造血调控任务四：造血细胞及生长发育项目一：造血基础理论简介

学习目标1.掌握胚胎期造血器官及造血特点，血细胞生长发育阶段及过程。2.熟悉造血干细胞的概念、基本特征。3.了解造血微环境的概念及组成。4.初步具备识别造血细胞的能力项目一：造血基础理论简介

胚胎期造血出生后造血造血调控造血细胞及生长发育项目一：造血基础理论简介第一章造血检验的基础理论造血系统由造血器官和造血细胞两部分组成，是机体内制造血液的整个系统。主要包括卵黄囊、肝脏、脾、肾、胸腺、淋巴结和骨髓。造血细胞均发生于胚胎的中胚层，随胚胎发育过程，造血中心转移。

造血器官分为

胚胎期造血器官出生后造血器官项目一：造血基础理论简介任务一、胚胎期造血第一章造血检验的基础理论胚胎期造血器官项目一：造血基础理论简介任务一、胚胎期造血第一章造血检验的基础理论造血器官造血时间造血特点中胚层造血人胚2周末～9周人体唯一的血管内造血，可形成第一代巨幼红细胞，产生Hb-Gower1、Hb-Gower2和Hb-portland肝脏造血人胚6周～7个月形成第二代幼红细胞，4个月时可形成粒细胞。产生HbF脾脏造血人胚5周～出生后首先产生红细胞，以后产生粒细胞，5个月可以形成淋巴细胞和单核细胞，出生后只产生淋巴细胞胸腺造血人胚6周～胚胎后期形成淋巴细胞，也可以产生红细胞和粒细胞淋巴结造血人胚7、8周～出生后终生形成淋巴细胞和浆细胞骨髓造血人胚14周～出生后出生后唯一产生粒、红、巨核细胞的场所，也可产生淋巴细胞、浆细胞和单核细胞。除产生HbF外，还可产生HbA和HbA2人胚胎期造血器官及造血特点项目一：造血基础理论简介

骨髓造血根据造血器官不同出生后造血分为淋巴造血项目一：造血基础理论简介任务二出生后造血第一章造血检验的基础理论（一）骨髓造血骨髓被封闭于坚硬的骨髓腔中，肉眼观是一种海绵样、胶状的组织。健康成人骨髓约占体重的4.5％(3.4％～5.9％)，平均重量为2800g(1600g～3700g）。骨髓按其组成和功能分为红骨髓和黄骨髓。

骨髓分为红骨髓黄骨髓项目一：造血基础理论简介任务二出生后造血第一章造血检验的基础理论骨髓有着活跃的造血功能。不同年龄的人群红骨髓的分布不同，5岁以下的儿童全身的骨髓腔内均为红骨髓，5～7岁后，长骨的骨髓中开始出现脂肪细胞。18岁时，红骨髓仅存在于扁骨、短骨及长管状骨的近心端，如颅骨、胸骨、脊椎骨、肋骨、髂骨以及肱骨和股骨的近心端。红骨髓占全部骨髓的50％左右。项目一：造血基础理论简介任务二出生后造血第一章造血检验的基础理论

红骨髓主要由结缔组织、血管、神经及造血实质细胞组成，由网状纤维和网状细胞构成立体网架，各发育阶段的血细胞位于网孔中。

黄骨髓是指骨髓中的造血细胞被脂肪细胞替代。黄骨髓在正常情况下不再参与造血，但仍保留造血的潜能。当机体需要时（如急性失血或溶血时）可重新恢复其造血功能。项目一：造血基础理论简介任务二出生后造血第一章造血检验的基础理论（二）淋巴器官造血

淋巴器官中枢淋巴器官周围淋巴器官骨髓胸腺脾淋巴结黏膜淋巴组织（扁桃体）

淋巴细胞聚集和免疫应答发生的场所淋巴细胞产生、增殖分化和成熟的场所项目一：造血基础理论简介任务二出生后造血1.胸腺

产生淋巴细胞和分泌可促进T细胞分化、发育和成熟的胸腺素。

2.脾

T、B淋巴细胞分化、成熟的主要场所之一，同时具有造血、储血、滤血和免疫反应等多种功能。3.淋巴结

出生后，淋巴结只产生淋巴细胞和浆细胞。

项目一：造血基础理论简介任务二出生后造血第一章造血检验的基础理论（三）髓外造血刚出生时全身骨髓普遍造血，5岁以后由四肢远侧呈向心性退缩，正常成人红骨髓主要见于全身扁平骨，肱骨及股骨近端骨髓中尚残留有红骨髓组织，其余为黄骨髓。黄骨髓平时无造血功能，但在生理需要或某些病理情况下，黄骨髓、肝、脾、甚至淋巴结等可恢复造血功能，称为髓外造血。

项目一：造血基础理论简介任务二出生后造血（一）造血微环境造血微环境是由各种调控细胞以及许多来自原位和远处的细胞因子等构成的空间。各细胞间保持一个正适合于细胞间相互作用、信号传递的距离。这个调控造血干祖细胞增殖分化的环境称之为造血微环境。造血干祖细胞周围有调控活性的细胞统称为调控细胞，由间充质干细胞分化而成的各种造血调控细胞与各种造血细胞混杂在一起，组成造血组织。项目一：造血基础理论简介任务三造血调控

三造血调控（二）细胞因子

“细胞因子”可以包括一切源自细胞而又以不同方式作用于细胞的活性多肽，它可以调控细胞的各种功能，如增殖、分化、凋亡、识别、防御、恶变、逆转、生物合成等。由于细胞因子的多能性，它们往往对造血、免疫、神经、肿瘤等细胞都有调控作用。目前在造血调控方面研究较多的细胞因子有以下一些：项目一：造血基础理论简介任务三造血调控

三造血调控（二）细胞因子

①粒单核细胞集落刺激因子（GM-CSF）；②粒细胞集落刺激因子（G-CSF）；③单核巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）；多向性集落刺激因子（Multi-CSF），即白介素3（IL-3）；⑤白介素6（IL-6）；⑥白介素11（IL-11）；⑦促红细胞生成素（EPO）；⑧血小板生成素（TPO）；⑨干细胞因子（SCF）；⑩刺激T、B淋巴系细胞生长的其他细胞因子，如白细胞介素2、4、5等。项目一：造血基础理论简介任务三造血调控（三）造血的基因调控

造血干祖细胞增殖分化的每个环节都受基因的调节控制或决定的。各种细胞因子以及它们相对应的受体都是基因表达的产物。基因表达的效率决定了细胞因子及其受体的表达量。这直接关系到造血细胞与调控细胞之间的相互作用关系。项目一：造血基础理论简介任务三造血调控

四造血细胞及生长发育

造血干细胞分化为早期祖细胞,经大量不断增殖又逐步分化，成为晚期祖细胞。然后分化为具有特异形态的骨髓中不同系别的前体细胞。最后，分化成各类具有生理功能的血细胞。这个过程称之为“造血”（hematopoiesis）。项目一：造血基础理论简介任务四造血细胞及生长发育全能干细胞

多能干细胞

专能干细胞

分类能形成完整个体受精卵、胚胎干细胞能分化多种组织细胞造血干细胞、神经干细胞、间质干细胞

能分化一种类型细胞肝干细胞、肠上皮干细胞项目一：造血基础理论简介任务四造血细胞及生长发育

造血干/祖细胞的临床应用

公认的理想靶细胞

胎肝干细胞移植

外周血干细胞移植

脐血干细胞移植

造血干细胞移植

骨髓移植

基因治疗

项目一：造血基础理论简介任务四造血细胞及生长发育

四造血细胞及生长发育（一）造血干细胞

造血干细胞是具有高度自我更新和多向分化能力，在造血组织中含量极少，形态难以辩认的类似小淋巴细胞样的一群异质性的细胞群体。

特征①高度的自我更新能力，也称自我维持。②多向分化能力，也称全能性。③不均一性，即多态性。项目一：造血基础理论简介任务四造血细胞及生长发育表面标志有CD34+、CD38-等，其中最重要的是CD34抗原。CD34+

造血细胞是公认理想的造血干/祖细胞移植物。

CD34+CD38-是造血干/祖细胞的表面标志。四造血细胞及生长发育（二）造血干/祖细胞的表面标志项目一：造血基础理论简介任务四造血细胞及生长发育

四造血细胞及生长发育（三）造血祖细胞和干细胞的主要区别①造血干细胞有高度自我更新能力和自我维持力，但不能增殖（扩增）；祖细胞则有高度增殖（扩增）力，（早期）部分地以至（晚期）全部丧失自我更新和自我维持力。②造血干细胞应兼有向髓或淋巴两大系分化的潜能，而造血祖细胞只能单一地向髓系或淋巴系分化。淋巴系祖细胞只分化为各淋巴亚系；髓系祖细胞则只分化为髓系的红、粒、单、巨核等亚系。

项目一：造血基础理论简介任务四造血细胞及生长发育第一章造血检验的基础理论

所有血细胞均来源于造血干细胞，在经历了增殖、分化、成熟和释放的过程后发育为具有特定功能的成熟阶段细胞，释放进入外周血发挥作用。是一个连续的过程。HSC

variousseriesblastcellsImmaturecell

MaturecellHPC

四造血细胞及生长发育（四）血细胞生长发育

项目一：造血基础理论简介任务四造血细胞及生长发育第一章造血检验的基础理论造血干细胞阶段：维持造血干细胞数量衡定；是分化为各系祖细胞的源泉。造血祖细胞阶段：细胞数量放大的主要阶段，对维持血细胞的数量起重要作用。原始及幼稚细胞阶段：失去了自我更新能力和分化能力，在骨髓涂片中形态可以辨认。

四造血细胞及生长发育项目一：造血基础理论简介任务四造血细胞及生长发育第一章造血检验的基础理论1.增殖血细胞通过分裂使其数量增加的现象。主要通过有丝分裂方式增殖，称为“对称性增殖”。2.分化血细胞在发育过程中失去某些潜能，转变为具有新功能细胞的过程，这一过程是不可逆的。四造血细胞及生长发育项目一：造血基础理论简介任务四造血细胞及生长发育第一章造血检验的基础理论3.成熟指细胞定向分化后通过增殖和演变，由原始细胞经幼稚细胞到成熟细胞的全过程。四造血细胞及生长发育项目一：造血基础理论简介任务四造血细胞及生长发育

四造血细胞及生长发育4.释放

成熟的终末细胞通过骨髓-血屏障进入血循环的过程。

项目一：造血基础理论简介任务四造血细胞及生长发育第一章造血检验的基础理论各系血细胞分化发育阶段及名称谢谢聆听单元一：造血细胞检验项目二：骨髓细胞形态检验任务一、骨髓细胞形态演变规律任务二、粒细胞系统各阶段形态特征检验任务三、红细胞系统各阶段形态特征检验任务四、淋巴细胞系统各阶段形态特征检验任务五、单核细胞系统各阶段形态特征检验任务六、巨核细胞系统各阶段形态特征检验任务七、浆细胞系统各阶段形态特征检验任务八、其他细胞系统形态特征检验任务九、骨髓中类似细胞的鉴别目录项目二：骨髓细胞形态检验1.掌握：血细胞的命名；血细胞发育成熟的形态演变规律；正常细胞形态学；骨髓检查的主要临床应用；骨髓检查的适应症与禁忌证；骨髓取材满意的指标；骨髓涂片检查方法；骨髓增生程度的判断标准；骨髓象检查的注意事项；骨髓象的分析与报告；正常骨髓象；异常骨髓细胞形态变化特点及其意义。2.熟悉：骨髓涂片和染色；骨髓检查的临床应用；骨髓象检查质量保证。3.了解：血涂片检查及意义；血细胞检验的临床应用评价。4.学会：正确制作骨髓涂片，及检查和分析骨髓象的方法学习目标项目二：骨髓细胞形态检验任务一骨髓细胞形态演变规律项目二：骨髓细胞形态检验任务一骨髓细胞形态演变规律一、骨髓细胞六大系统粒细胞系统红细胞系统淋巴细胞系统浆细胞系统巨核细胞系统单核细胞系统364521任务一骨髓细胞形态演变规律一、骨髓细胞六大系统任务一骨髓细胞形态演变规律二、血细胞发育演变规律图任务一骨髓细胞形态演变规律三、骨髓细胞形态演变规律血细胞从原始细胞逐渐发育为成熟细胞，具有一定的规律性。细胞体积

细胞核

细胞质

核质比

任务一骨髓细胞形态演变规律三、骨髓细胞形态演变规律（一）细胞体积

原始细胞随着细胞的逐步成熟，其体积逐渐变小。但巨核细胞系例外，细胞由小变大；粒细胞中，早幼粒细胞比原始粒细胞略大。任务一骨髓细胞形态演变规律三、骨髓细胞形态演变规律

（二）细胞核

1.大小细胞核一般由大变小，但巨核细胞由小变大。

2.核形由圆形或卵圆形逐渐变为凹陷,甚至分叶（粒细胞、巨核细胞），但淋巴细胞和浆细胞变化不明显，成熟红细胞核消失。3.核染色质由疏松、细致到粗糙、紧密，并浓缩成块，甚至脱核（红系）4.核膜一般由不清楚到清楚。5.核仁由清晰到模糊，最后消失。核染色质及核仁是衡量血细胞是否处于原始和幼稚阶段的重要指标之一。任务一骨髓细胞形态演变规律三、骨髓细胞形态演变规律

（三）细胞质1.胞质量由少逐渐增多，但淋巴细胞系例外。2.胞质颜色从深蓝色逐渐变成淡蓝或淡红色（粉红色），淋巴细胞仍保持淡蓝色（嗜碱性）。3.胞质颗粒从无到有，由少到多。粒细胞系的颗粒由非特异性到特异性，可分为嗜酸性、嗜碱性、中性三种颗粒。红细胞无颗粒。

（四）核质比一般由大变小。任务二粒细胞系统各阶段形态特征检验项目二：骨髓细胞形态检验任务二粒细胞系统各阶段形态特征检验一、粒细胞形态演变规律任务二粒细胞系统各阶段形态特征检验二、原始粒细胞1.胞体圆形或椭圆、直径10—18μm，核圆居中或稍偏2.核染色质细致、细颗粒状、均匀、平坦，淡紫红色3.核仁明显、淡兰色、2-5个，小、清晰4.胞浆中淡蓝色、量少、无颗粒任务二粒细胞系统各阶段形态特征检验三、早幼粒细胞1.胞体较原始细胞大，圆形或椭圆，直径12—20μm2.胞浆稍多，淡兰色、有大小、数量形态不一的紫红色3.核圆形或椭圆，常偏位，核附近有淡染区4.染色质聚集，颗粒状5.核仁模糊任务二粒细胞系统各阶段形态特征检验三、中幼粒细胞1.胞体圆形或椭圆性，直径10-20μm2.核偏位，肾型或半圆型3.染色质粗糙，凝聚，核仁消失。4.颗粒的特性划分嗜酸性，嗜碱性，中性粒细胞，自中幼至晚幼、杆状核、分叶核粒细胞的划分，完全以细胞核的变化为依据。任务二粒细胞系统各阶段形态特征检验四、晚幼粒细胞1.胞体圆形或椭圆性2.直径10-16μm3.胞核肾型，有凹陷，凹陷度在假设圆径1/2，（小于1/2为中幼粒，大于1/2为杆状核）任务二粒细胞系统各阶段形态特征检验五、中性杆状核细胞1.胞体圆形或椭圆性2.直径10-13μm3.胞核如杆状、带状，胞核之凹陷度大于1/2，染色质凝固块状任务二粒细胞系统各阶段形态特征检验六、中性分叶核细胞1.细胞直径为10～14μm，圆形2.胞核分叶状，2～5叶，叶与叶之间有细丝相连或完全断开，核染色质浓集呈较多小块，染深紫红色，副染色质明显3.胞质丰富，呈淡红色，浆内充满特异性颗粒任务二粒细胞系统各阶段形态特征检验七、嗜酸性中幼粒、晚幼粒、杆状核、分叶核细胞任务二粒细胞系统各阶段形态特征检验八、嗜碱性中幼粒、晚幼粒、杆状核细胞任务三红细胞系统各阶段形态特征检验项目二：骨髓细胞形态检验任务三红细胞系统各阶段形态特征检验一、红细胞形态演变规律任务三红细胞系统各阶段形态特征检验二、原始红细胞1.细胞圆形或椭圆形，直径15—20μm2.胞浆深蓝色，着色不均，边缘着色深，核周浅染，无颗粒，有钝伪足3.胞核圆形或椭圆形4.染色质粗颗粒状，深紫红色，核仁不清楚，1-2个任务三红细胞系统各阶段形态特征检验三、早幼红细胞1.圆形，直径1518μm2.核圆形，略偏位3.染色质开始凝聚，核仁消失或不明显4.胞浆量增多，蓝色，核周明亮淡染区，无颗粒任务三红细胞系统各阶段形态特征检验四、中幼红细胞1.胞体圆形，直径8—15μm2.核圆形，染色质凝聚小块直至碎墨块状，核周边出现透亮的缝隙3.胞浆灰兰色，淡兰色，嗜多色性4.核、浆各占半任务三红细胞系统各阶段形态特征检验五、晚幼红细胞1.胞体呈圆形，直径7-10μm2.胞核圆形，小于细胞的1/23.染色质致密4.胞质量多，染浅灰或淡红任务三红细胞系统各阶段形态特征检验六、认一认任务四淋巴细胞系统各阶段形态特征检验项目二：骨髓细胞形态检验一、淋巴细胞形态演变规律任务四淋巴细胞系统各阶段形态特征检验任务四淋巴细胞系统各阶段形态特征检验二、原始淋巴细胞1.圆形或椭圆形，直径10-18μm2.胞核居中，略偏位，3.染色质呈颗粒状，深紫红色4.核仁1-2个，小，清晰5.胞浆极少，边缘整齐，天兰色，透亮，无颗粒任务四淋巴细胞系统各阶段形态特征检验三、幼稚淋巴细胞1.圆形或椭圆形，直径10-16μm；2.胞浆稍多，淡兰色，透明，偶有少许嗜天青颗粒3.胞核圆形或椭圆形，4.染色质粗糙、紧密，深紫红色，5.核仁模糊或消失任务四淋巴细胞系统各阶段形态特征检验四、淋巴细胞1.小淋巴细胞直径6-9μm；胞浆量少，兰色，透亮，可有少许嗜天青颗粒；胞核椭圆形、肾形、偏位；染色质:致密、块状2.大淋巴细胞直径12-15μm；胞浆量多，透亮，可有少许嗜天青颗粒任务五单核细胞系统各阶段形态特征检验项目二：骨髓细胞形态检验一、单核细胞形态演变规律任务五单核细胞系统各阶段形态特征检验二、原始单核细胞任务五单核细胞系统各阶段形态特征检验1.外形圆形或椭圆形，直径15-20μm2.胞核不规则，有折叠扭曲3.染色质纤细网状，浅紫红色，淡薄4.核仁大，清晰，1-3个5.胞浆灰兰色，浅兰色，似毛玻璃，不透亮，有伪足，无颗粒三、幼稚单核细胞任务五单核细胞系统各阶段形态特征检验1.外形圆形或不规则形，直径15-25μm2.胞核不规则，偏位3.染色质纤细有凝聚，或丝网状4.核仁可有可无5.胞浆量多，灰兰色，许多细小灰尘状嗜天青颗粒四、单核细胞任务五单核细胞系统各阶段形态特征检验1.外形圆形或不规则形，直径12-20μm2.胞浆量多，灰兰色，边缘不规则，许多细小灰尘状嗜天青颗粒3.胞核不规则，4.染色质疏松，网状5.无核仁任务六巨核细胞系统各阶段形态特征检验项目二：骨髓细胞形态检验一、巨核细胞形态演变规律任务六巨核细胞系统各阶段形态特征检验二、原始巨核细胞任务六巨核细胞系统各阶段形态特征检验1.胞体圆形或不规则形，大，直径15-30μm2.胞浆量少，边缘常不规则，有皱褶状突起，深蓝色，不透明，无颗粒3.胞核形状不定，圆形或椭圆形多见4.染色质粗糙颗粒状，排列紧密，暗深紫红色。5.核仁2-3个，不清晰三、幼稚巨核细胞任务六巨核细胞系统各阶段形态特征检验1.胞体圆形或不规则形增大，30-50μm2.胞浆增多，常有伪足。蓝色或浅蓝色，近核处染色变淡，有嗜天青颗粒3.胞核多形性，不规则4.染色质粗糙，开始凝聚5.核仁不清或无四、颗粒型巨核细胞任务六巨核细胞系统各阶段形态特征检验1.外形不规则，40-70um2.胞浆多，粉红色，云雾状，有紫红色小颗粒3.胞核形状不规则4.染色质粗糙，凝聚，呈块状或条索状五、产小板型巨核细胞任务六巨核细胞系统各阶段形态特征检验1.胞浆内或周边有血小板雏形六、裸核型巨核细胞任务六巨核细胞系统各阶段形态特征检验1.无胞浆任务七浆细胞系统各阶段形态特征检验项目二：骨髓细胞形态检验一、浆细胞形态演变规律任务七浆细胞系统各阶段形态特征检验二、原始浆细胞任务七浆细胞系统各阶段形态特征检验1.胞体圆形或椭圆形14-18μm2.胞浆较多，深蓝或灰兰色，近核处有一半圆形透明区，无颗粒3.染色质粗颗粒网状，紫红色4.胞核偏位，圆形或椭圆形5.核仁2-5个三、幼稚浆细胞任务七浆细胞系统各阶段形态特征检验1.胞体12-16μm，多为椭圆形2.胞浆量多，灰兰色，近核处有一半圆形透明区，有时有少许紫红色小颗粒或空泡3.染色质开始凝聚，较粗密，深紫红4.核仁模糊或消失5.胞核圆形或椭圆形，偏位四、浆细胞任务七浆细胞系统各阶段形态特征检验1.胞体椭圆形或不规则形，直径8-15μm2.胞浆丰富，灰兰色，泡沫感，常有空泡，边缘可有刺状突起，近核处有半圆形淡染区3.染色质粗凝块4.胞核圆形，明显偏位任务八其他细胞系统形态特征检验项目二：骨髓细胞形态检验一、组织嗜碱细胞任务八其它细胞系统各阶段形态特征检验1.外形细胞黑紫色块，不规则形、直径15-30μm2.胞浆充满圆形、大小相同、紫色或淡紫色嗜碱颗粒，多覆盖核上3.胞核不易辨认二、内皮细胞任务八其它细胞系统各阶段形态特征检验1.细胞直径为25～30μm，不规则，多见长尾形、梭形。胞核圆形、椭圆形或不规则2.核染色质呈网状，多无核仁3.胞质较少，分布于细胞一端或两端，呈淡蓝色或淡红色，可有细小的紫红色颗粒三、纤维细胞任务八其它细胞系统各阶段形态特征检验1.骨髓中最大的多核细胞之一，此种细胞非常黏稠，涂片时常被拉成一长条状2.其胞体大，常不规则，多为长尾形，长轴直径可达200μm以上3.常有多个至数十个、大小形态相同的圆形或椭圆形胞核4.核染色质细或粗颗粒网状；核仁1～2个5.胞质极丰富，呈淡蓝色，多分布于细胞两端，胞质内含纤维网状物、浅红色颗粒及少许嗜天青颗粒四、成骨细胞任务八其它细胞系统各阶段形态特征检验1.数个或成堆出现，或单个出现2.胞体椭圆形，直径20-40μm3.胞浆量多，蓝灰色，不均匀，泡沫状，距核远处有淡染区，可有少许紫红色嗜天青颗粒4.胞核圆形，偏一侧5.染色质深紫红色，粗糙网状6.核仁小，1-3个五、组织细胞任务八其它细胞系统各阶段形态特征检验1.形态多样性，周边不整，撕纸状，25-50μm2.胞核圆形、椭圆形3.染色质紫红色粗网状4.核仁可有可无5.胞浆丰富，灰蓝或淡兰色嗜天青颗粒，或有空泡六、吞噬细胞任务八其它细胞系统各阶段形态特征检验1.形态极不一致2.胞核圆形、椭圆形，不规则形3.染色质疏松4.核仁可有可无5.胞浆多少不一，灰蓝或淡兰色，常有空泡，吞噬物七、破骨细胞任务八其它细胞系统各阶段形态特征检验1.骨髓中最大多核细胞，60－100um2.胞体多不规则，周边不整齐，如撕纸状3.胞浆丰富，淡蓝、灰兰色，胞浆中粗大不均、分布不均的嗜天青颗粒4.胞核核3-100个，圆形或椭圆形，每个核1-2个核仁5.染色质粗网状八、组织细胞任务八其它细胞系统各阶段形态特征检验1.组织细胞摄取脂肪滴形成2.胞体直径30-50um，圆形或椭圆形，边缘不整齐3.胞浆充满大量大小不一的脂肪空泡4.胞核较小，形状不规则，常被挤在一边5.染色质致密网状，无核仁九、退化细胞任务八其它细胞系统各阶段形态特征检验1.结构不清,细胞膜不完整十、Ferrata细胞任务八其它细胞系统各阶段形态特征检验任务九骨髓中类似细胞鉴别项目二：骨髓细胞形态检验任务九骨髓中类似细胞鉴别一、原始粒细胞与原始红细胞鉴别原始粒细胞原始红细胞胞体10～18微米15～20微米，可见瘤状突起胞浆透明，天蓝色不透名，深蓝色，有油画感，核周有淡染区染色质细砂粒状，均匀平坦如薄纱粗颗粒状，不均匀核膜不清楚清楚核仁2～5个，较小，清晰1～2个，较大，界限不清任务九骨髓中类似细胞鉴别二、单核细胞与中性中幼粒细胞鉴别单核细胞中性中幼粒细胞胞体圆形或不规则型，可见伪足圆形，规则胞浆灰蓝，半透明，含无数散在粉尘样嗜天青颗粒，有时可见空泡淡红或淡蓝，透明，含中等量、大小较一致的特异性中性颗粒胞核不规则，可呈肾形、马蹄形、S形或分叶形，有名显得扭曲、折叠椭圆或一侧开始扁平，可出现凹陷染色质粗网状，疏松聚集成索块任务九骨髓中类似细胞鉴别三、中幼红细胞、浆细胞、淋巴细胞的鉴别中幼红细胞浆细胞淋巴细胞胞体圆形椭圆形圆形胞浆嗜多色性，不透明，无颗粒蓝色，不透明有泡沫感，有时可见红色镶边，边缘不规则，近核处有淡染区，常有空泡，可见颗粒天蓝色，透明，有核周淡染区，可见颗粒胞核圆形，居中圆形或椭圆形，常偏位圆形，常偏一侧，有切迹染色质粗密成块，如打碎的墨砚，中间有明显空隙，无色泽极粗密，凝成大块，似车轮状，中间有明显空隙，有色泽呈大块状，块与块之间无明显界限，有均匀光滑感谢谢聆听单元一：造血细胞检验项目三：骨髓象检查任务一骨髓标本采集目录项目三：骨髓象检查任务二骨髓涂片、固定、染色任务三骨髓细胞学检查步骤任务四正常骨髓象任务五骨髓象分析项目三：骨髓象检查任务一骨髓标本采集

项目三：骨髓象检查适应症

1.原因不明的外周血细胞数量和形态异常；2.不明原因的发热、肝、脾、淋巴结肿大等；3.不明原因的胸骨压痛、骨质破坏、肾功能异常、黄疸、紫癜、血沉明显增；加及疑似骨髓转移瘤和异常蛋白血症等；4.血液病定期复查及化疗后的疗效观察；5.其他：骨髓活检、骨髓细胞表面抗原（CD）测定、造血干/祖细胞培养、血细胞染色体核型分析、微生物培养、寄生虫检查等。禁忌症 1.由于凝血因子严重缺陷引起的出血性疾病；2.晚期妊娠妇女；3.小儿及不合作者。任务一：骨髓标本采集一、骨髓象检查的适应症和禁忌症选择标准：骨髓腔中红骨髓丰富穿刺部位应浅表、易定位应避开重要脏器临床上成人首选的穿刺部位是髂骨后上棘必要时应多部位取材，以便全面料及骨髓的造血情况。任务一：骨髓标本采集二、骨髓的采集部位骨髓标本采集常见穿刺部位的特点穿刺部位特点髂后上棘此部位骨质薄，进针容易，骨髓液丰富，被血液稀释的可能性小，故髂后上棘为临床首选的穿刺部位。髂前上棘此部位骨质硬、骨髓腔小，易导致穿刺失败，所以髂前上棘常用于翻身困难、需要多部位穿刺等患者。胸骨胸骨是人体骨髓造血功能最旺盛的部位，但胸骨后有重要脏器，故临床上不常用。当其他常规部位穿刺取材不佳时，可考虑胸骨穿刺，但必须由操作经验丰富的人员来做。其他部位2岁以下的患者还可以选择胫骨粗隆内侧。其他还包括腰椎棘突穿刺、定位穿刺。定位穿刺临床上常用于骨髓转移癌、浆细胞瘤等。任务一：骨髓标本采集穿刺操作步骤及注意事项：（详见技术操作视频）骨髓取材情况的判断：取材情况特点取材满意①抽吸骨髓液的瞬间患者有特殊的酸痛感；②骨髓液中有较多的骨髓小粒和脂肪滴；③显微镜检查可见骨髓特有细胞，如幼稚细胞、巨核细胞、浆细胞、破骨细胞、脂肪细胞、肥大细胞；④骨髓中中性杆状核粒细胞与分叶核粒细胞比值大于外周血二者比值；⑤骨髓液抽取应小于0.2ml，否则易于稀释。骨髓部分稀释抽吸骨髓液时混入部分血液，称为骨髓部分稀释。特征为：①骨髓小粒、脂肪滴少或不见；②有核细胞和骨髓特有细胞少；③成熟细胞/幼稚细胞＞3/5。骨髓完全稀释抽出的骨髓液与外周血的细胞成分完全一样，称为骨髓完全稀释。肉眼观，骨髓液较稀薄、无黄色小粒，骨髓推片尾部无骨髓小粒。任务一：骨髓标本采集干抽：是指非技术原因多次、多部位穿刺均抽不出骨髓液或仅抽出少量血液的情况。常见于：①原发性或继发性骨髓纤维化；②骨髓极度增生，细胞排列过于紧密结实，如白血病、真性红细胞增多症等；③骨髓增生减低；④肿瘤浸润骨髓，包括恶性淋巴瘤、多发性骨髓瘤、骨髓转移癌。如在针头中发现有少量骨髓组织时，可用针芯将其推出，制作1张涂片供检查。如骨髓纤维化患者必须作骨髓活检。任务一：骨髓标本采集任务二骨髓涂片、固定、染色

项目三：骨髓象检查骨髓涂片的方法：骨髓涂片的制备方法与血涂片基本相同，但由于骨髓液中含有骨髓小粒和脂肪滴、有核细胞数量多、较血液粘稠，推片时角度要略小，速度要慢，防止涂片过厚，影响细胞形态观察。骨髓涂片固定：涂片后要迅速挥干固定，防止细胞变形。骨髓涂片染色：目前我国各临床实验室多采用瑞氏（Wright）染色或瑞-姬混合染色。任务二：骨髓涂片、固定、染色一、骨髓涂片任务三骨髓细胞学检查方法及内容

项目三：骨髓象检查骨髓涂片检查骨髓细胞学检查内容标本保存及资料存档血涂片检查填写骨髓报告单1234任务三：骨髓细胞学检查方法及内容选择骨髓小粒较多、涂片制备及染色良好的骨髓涂片在显微镜下观察。先用低倍镜观察全片，选择合适的观察区域后，再用油镜观察，以获得全面、正确的实验数据。低倍镜下观察：观察骨髓涂片的整体情况：包括取材、涂片及染色。合格的骨髓涂片中可见骨髓小粒，红细胞呈粉红色，白细胞核染紫红色，胞质染色鲜艳，细胞形态清晰、无变形。若取材不好、涂片过厚、染色不佳，可另选涂片或重新取材。任务三：骨髓细胞学检查方法及内容一、骨髓涂片的检查判断骨髓增生程度：骨髓中有核细胞的多少可以反映出骨髓增生程度。根据有核细胞与成熟红细胞的比例确定骨髓的增生程度。分级 有核细胞有核细胞数 临床意义 红细胞一个高倍镜视野 增生极度活跃1：1＞100各种白血病增生明显活跃1：1050～100各种白血病、增生性贫血增生活跃1：2020～50正常人、贫血增生减低1：505～10造血功能低下、部分稀释*增生极度减低1：200＜5再生障碍性贫血、完全稀释任务三：骨髓细胞学检查方法及内容一、骨髓涂片的检查增生极度活跃增生明显活跃增生活跃增生减低增生极度减低任务三：骨髓细胞学检查方法及内容一、骨髓涂片的检查

巨核细胞计数并分类由于巨核细胞胞体大、全片数量少（在尾部和边缘较多），故巨核细胞计数一般在低倍镜下进行如巨核细胞需要进行分类则在在高倍镜或油镜下进行骨髓涂片标准化为1.5cm×3.0cm时，参考区间为7～35个异常细胞的筛查：观察全片有无体积较大或成堆分布的异常细胞（尤其要注意观察涂片的尾部、边缘或骨髓小粒周围）。如骨髓转移癌细胞、恶性淋巴瘤细胞、戈谢细胞、尼曼-匹克细胞等。发现可疑细胞时需在油镜下确认，这对相关疾病的明确诊断具有重要意义。任务三：骨髓细胞学检查方法及内容一、骨髓涂片的检查油镜下观察：在低倍镜观察的基础上，选择较满意的骨髓涂片及相应的部位，转为油镜开始有序观察，分类计数200~500和有核细胞。（1）观察细胞形态：先在油镜检查区域内仔细观察骨髓各系细胞的增生程度、形态、大致比例等，得出骨髓细胞学检查的初步印象，然后再进行有核细胞的分类计数。任务三：骨髓细胞学检查方法及内容一、骨髓涂片的检查（2）有核细胞分类计数项目要求计数部位选择厚薄均匀、细胞结构清楚、红细胞呈淡红色、背景干净的区域进行分类计数，一般在体尾交界处计数秩序按一定顺序计数，防止出现视野重复或遗漏现象计数细胞所有有核细胞，但不包括破碎细胞、有丝分裂细胞和巨核细胞计数数目一般计数200个有核细胞。WHO推荐计数500个有核细胞；增生极度减低者可计数100个有核细胞。任务三：骨髓细胞学检查方法及内容一、骨髓涂片的检查（3）结果计算计算各系细胞和各阶段细胞占有核细胞总数的百分比。一般情况下，百分比是指有核细胞的百分比（ANC）。某些白血病，还要计算非红系细胞百分比（NEC），NEC是指去除有核红细胞、淋巴细胞、浆细胞、肥大细胞、巨噬细胞外的有核细胞百分比。计算粒红比值（G/E）：所谓粒红比值是指各阶段粒细胞（包括中性、嗜酸性、嗜碱性粒细胞）百分率总和与各阶段有核红细胞百分率总和之比，反应了粒系和红系的相对数量关系，正常人粒红比值约为2～4：1。计算各阶段巨核细胞百分比或各阶段巨核细胞的个数。任务三：骨髓细胞学检查方法及内容一、骨髓涂片的检查1.检查内容（1）白细胞形态及各阶段的比值。（2）成熟红细胞的形态有无异常。（3）估计血小板的数量并观察其形态有无异常。（4）有无寄生虫等异常情况。任务三：骨髓细胞学检查方法及内容二、血涂片的检查2.检查意义（血象和骨髓象结合对疾病的诊断和鉴别诊断的意义）（1）骨髓象相似而血象有区别：如缺铁性贫血、溶血性贫血和急性失血的骨髓象相似，均以红细胞系统增生为主，但血象有区别。（2）骨髓象变化不显著而血象显著异常：如传单，其骨髓中的异型淋巴细胞少见，而血象中异型淋巴细胞常大于20%。（3）骨髓象有区别而血象相似：如传单和慢淋的血象均以小淋巴细胞增多为主，但前者骨髓象中淋巴细胞稍增多，后者明显增多。（4）骨髓象有显著异常而血象变化不显著：如多发性骨髓瘤、戈谢病、尼曼-匹克病，骨髓中分别见到特异性骨髓瘤细胞、戈谢细胞、尼曼-匹克细胞，但血象很少见到。（5）血象中细胞比骨髓中的细胞更成熟：血象中的血细胞来源于骨髓，因此白血病时，血象中所看到的白血病细胞较骨髓中的白血病细胞稍成熟、形态更容易辨认，结合血象检验结果可辅助白血病类型的判断。任务三：骨髓细胞学检查方法及内容二、血涂片的检查填写的主要内容患者的基本信息填写取材、涂片、染色情况计数及计算结果骨髓特征描述血涂片形态描述细胞化学染色结果填写诊断意见及建议包括患者姓名、性别、年龄、科室、骨髓涂片编号、穿刺部位、穿刺时间及临床诊断等。可采用良好、尚可、欠佳三级标准进行评价。填写血涂片分类计数结果和骨髓涂片中各阶段细胞百分比、骨髓增生程度及粒红比值等。①粒、红两系主要说明其增生情况、成熟情况（如各阶段细胞比例是否正常、是否有成熟障碍等）、细胞形态有无异常（必要时要对细胞形态进行描述）、成熟红细胞形态。②其他系统的细胞如有明显异常或改变，也要像粒、红两系一样进行详细描述。③报告巨核细胞的计数和分类结果，血小板的分布情况及形态。④如见到特殊细胞和寄生虫也必须报告。①有核细胞形态有无异常及有无幼稚细胞。②红细胞形态有无异常。③血小板数量及分布有无异常。④有无寄生虫及其他异常细胞。对每项细胞化学染色结果进行逐一描述，主要描述阳性率、阳性指数或阳性细胞的分布情况等根据骨髓象、血象、细胞化学染色所见，结合临床资料填写诊断意见或建议。对已明确诊断的疾病，要与以前骨髓涂片的结果比较，提出完全缓解、部分缓解、改善、退步、复发等意见。任务三：骨髓细胞学检查方法及内容三、骨髓检查报告单的填写任务三：骨髓细胞学检查方法及内容三、骨髓报告单的填写1.登记检查完毕后，骨髓涂片要立即登记、编号（按年度连续编号）。应用计算机报告、保存骨髓细胞学检测结果，便于信息的长期保存及随时调用。2.保存用乙醚乙醇混合液（4：1）将骨髓涂片、血涂片及细胞化学染色的涂片擦净，贴上标签，装入特制的标本袋中，按年度顺序放置、保存。骨髓检查申请单、报告单，存档至少5年，以备复查、总结、研究及教学使用。任务三：骨髓细胞学检查方法及内容四、标本保存及资料存档任务三：骨髓细胞学检查方法及内容骨髓细胞形态学检查流程图任务四正常骨髓象特征

项目三：骨髓象检查正常骨髓象应具备以下4个特征：1.有核细胞增生活跃2.各系、各阶段细胞占有核细胞的比例在正常参考范围内3.各系、各阶段细胞形态无明显异常4.无特殊病理细胞及血液寄生虫任务四：正常骨髓象特征骨髓象特征骨髓增生程度增生活跃粒红比值2～4：1粒细胞系统占40%～60%，其中原始粒细胞＜2%，早幼粒细胞＜5%，中性中幼粒细胞约8%，中性晚幼粒细胞约10%，中性杆状核粒细胞约20%，中性分叶核粒细胞约12%，嗜酸性粒细胞＜5%，嗜碱性粒细胞＜1%红细胞系统占15%～25%，以中、晚幼红细胞为主（各占1O%），原始红细胞＜1%，早幼红细胞＜5%淋巴细胞系统占20%～25%，大多为成熟淋巴细胞，原始淋巴细胞罕见，幼稚淋巴细胞偶见单核细胞系统＜4%，均为单核细胞，原始单核细胞罕见，幼稚单核细胞偶见浆细胞系统＜2%，均为浆细胞，原始浆细胞罕见，幼稚浆细胞偶见巨核细胞系统在1.5cm×3cm的骨髓涂膜上，可见巨核细胞7～35个，其中原始巨核细胞不见或偶见，幼稚巨核细胞占0%～10%，颗粒型巨核细胞占10%～50%，产血小板型巨核细胞占20%～70%，裸核型巨核细胞占0%～30%。血小板较易见，成堆存在其他细胞如组织细胞、成骨细胞、吞噬细胞等偶见，分裂象细胞少见，寄生虫和异常细胞不见细胞形态红细胞、血小板及各种有核细胞形态正常任务四：正常骨髓象特征任务五骨髓象分析

项目三：骨髓象检查骨髓象综合分析骨髓细胞增生程度骨髓细胞计数粒红细胞比值得出的最后的骨髓象报告单及诊断结论任务五：骨髓象分析任务五：骨髓象分析一、骨髓细胞增生程度分析1.粒红比值增加见于粒系增多或红系减少的疾病，如粒细胞白血病、类白血病反应、纯红细胞再生障碍性贫血等。2.粒红比值正常见于粒、红细胞比例正常，或两系细胞同时增加或减少的疾病，如正常人骨髓、多发性骨髓瘤、再生障碍性贫血、传染性单核细胞增多症、特发性血小板减少性紫癜、骨髓纤维化等。3.粒红比值降低见于粒系减少或红系增多的疾病，如粒细胞减少症、粒细胞缺乏症、缺铁性贫血、巨幼细胞性贫血、铁粒幼细胞性贫血、溶血性贫血、红白血病、真红细胞增多症、急性失血性贫血等。任务五：骨髓象分析二、粒红比值分析1.粒系细胞数量的改变（1）粒细胞增多：①以原始粒细胞增多为主：多见于急粒、慢粒急变期、急性粒单核细胞白血病。②以早幼粒细胞增多为主：多见于急性早幼粒细胞白血病、粒细胞缺乏症恢复期、早幼粒细胞型白血病反应等。③以中性中幼粒细胞增多为主：多见于急粒M2b型、慢粒、粒细胞型白血病反应等。④以中性晚幼粒细胞、杆状核粒细胞增多为主：多见于慢粒、粒细胞型类白血病反应、药物中毒、严重烧伤、急性失血、大手术后等。⑤嗜酸性粒细胞增多：多见于变态反应性疾病、寄生虫感染、嗜酸性粒细胞白血病、慢粒、恶性淋巴瘤、高嗜酸性粒细胞综合征等。⑥嗜碱性粒细胞增多：多见于慢粒、嗜碱性粒细胞白血病、放射线照射反应等。（2）粒细胞减少：见于粒细胞缺乏症、再生障碍性贫血、急性造血停滞等。任务五：骨髓象分析三、细胞数量的分析2.红系细胞数量的改变（1）有核红细胞增多：①以原红和早幼红细胞增多为主：见于急性红血病、急性红白血病。②以中幼红细胞和晚幼红细胞增多为主：见于溶血性贫血、缺铁性贫血、巨幼细胞性贫血、急性失血性贫血、特发性血小板减少性紫癜（急性期）、真性红细胞增多症、铅中毒、红白血病等。③巨幼红细胞或巨幼样变红细胞增多：见于巨幼细胞性贫血、急性红血病、急性红白血病、骨髓增生异常综合征、白血病化疗后、铁粒幼细胞性贫血等。④铁粒幼红细胞增多：见于铁粒幼细胞性贫血、骨髓增生异常综合征等。（2）有核红细胞减少：纯红细胞再生障碍性贫血、急性粒细胞白血病未分化型、急性单核细胞白血病未分化型、慢性粒细胞白血病、化疗后等。任务五：骨髓象分析三、细胞数量的分析3.巨核细胞系细胞数量的改变（1）巨核细胞增多：骨髓增殖性疾病、急性巨核细胞白血病、全髓白血病、特发性血小板减少性紫癜、脾功能亢进、急性大出血、急性血管内溶血等。（2）巨核细胞减少：再生障碍性贫血、急性白血病、慢性中性粒细胞白血病、化疗后等。4.单核细胞系细胞数量的改变急性单核细胞白血病、慢性粒细胞白血病急单变、急性粒单核细胞白血病等。任务五：骨髓象分析三、细胞数量的分析5.淋巴系细胞数量的改变（1）以原始及幼稚淋巴细胞增多：见于急性淋巴细胞白血病、淋巴瘤白血病、慢性粒细胞白血病急淋变、淋巴瘤白血病、慢性淋巴细胞白血病急性变等。（2）以成熟淋巴细胞增多为主：慢性淋巴细胞白血病、淋巴瘤白血病、再生障碍性贫血、淋巴细胞型类白血病反应、传染性淋巴细胞增多症、传染性单核细胞增多症、某些病毒感染、巨球蛋白血症淀粉样变等。6.其他血细胞数量改变（1）浆细胞增多：见于多发性骨髓瘤、浆细胞白血病、再生障碍性贫血、过敏性疾病、结缔组织病、恶性淋巴瘤、急性单核细胞白血病、肝硬化、巨球蛋白血症、寄生虫感染、粒细胞缺乏症、慢性细菌性感染等。（2）组织细胞增多：见于恶性组织细胞病、感染性疾病、恶性贫血、真性红细胞增多症、多发性骨髓瘤、特发性血小板减少性紫癜等。任务五：骨髓象分析三、细胞数量的分析骨髓象检查质量评价：血细胞形态检验结果的可靠性取决于三个方面：血液学检验人员的操作技能标本与试剂的质量血液学检验人员的临床诊断水平任务五：骨髓象分析谢谢聆听单元一：造血细胞检验项目四：细胞化学染色任务一细胞化学染色基本理论目录项目四：细胞化学染色任务二常用细胞化学染色检验项目四：细胞化学染色1.掌握：细胞化学染色的基本步骤；过氧化物酶染色、过碘酸-雪夫染色、酯酶染色、酸性磷酸酶染色、中性粒细胞碱性磷酸酶染色、铁染色的检测方法、结果分析和临床意义。2.熟悉：细胞化学染色的概念；各种常用细胞化学染色的原理及注意事项。3.了解：细胞的生理状态、功能和细胞化学染色的影响因素。4.具备细胞化学染色标本采集和处理能力，具有过氧化物酶染色、过碘酸-雪夫染色、酯酶染色、酸性磷酸酶染色、中性粒细胞碱性磷酸酶染色、铁染色的检测能力。5.学会依据细胞学异常和临床要求有选择性进行细胞化学染色，并能根据染色结果辅助分析判断白血病类型。学习目标项目四：细胞化学染色任务一细胞化学染色基本理论细胞化学染色是细胞学和化学相结合而形成的一门科学，是以细胞形态学为基础，结合运用化学反应的原理对血细胞内的各种化学成分(如酶类、酯类、铁、蛋白质、核酸等)作定性、定位、半定量分析的方法。细胞化学染色主要用于：1.辅助判断急性白血病的细胞类型。2.辅助血液系统疾病的诊断和鉴别诊断，如铁染色。3.观察疾病的疗效和预后。4.发病机制的探讨。一、细胞化学染色定义与临床应用任务一细胞化学染色基本理论固定显示复染固定物理法干燥固定火焰固定化学法蒸汽固定液体固定显示联苯胺法偶氮偶联法雪夫反应普鲁士蓝反应金属沉淀法复染目的是使各种细胞能显示出来以便于观察。选择复染液的颜色应与有色沉淀的颜色有明显的对比度，即能使细胞结构显示又能清楚地看出细胞化学染色结果。细胞化学染色步骤：二、细胞化学染色步骤任务一细胞化学染色基本理论粗略估量以染色反应的强弱，受色的深浅，人为地区别为阴性和各种程度的阳性。百分法只能反映细胞阳性率，不能反映受色强弱。积分法是常用的半定量法，将前述的等级估量与百分率相结合（计算方法见碱性磷酸酶染色），它既反映了细胞阳性率的高低，又反映了细胞受色的强弱。流式细胞仪最精确的定量方法，测定单个细胞内的化学成分含量。以细胞受色反应的强弱比色，常用于RNA、DNA定量测定和各阶段幼红细胞胞浆中血红蛋自定位、定量等。三、细胞化学染色定量分析方法任务一细胞化学染色基本理论任务二常用细胞化学染色检验项目四：细胞化学染色原理（二氨基联苯胺法）：

操作：胞质中POX底物H2O2分解释放新生态氧（O）二氨基联苯胺氧化金黄色不溶性沉淀，定位于细胞质内酶所在的活性部位产生固定30秒4℃底物液孵育流水冲洗苏木素或Giemsa液10～15min复染30分钟镜检：观察100个白血病细胞的染色结果，得出阳性率和阳性指数，或报告各种阳性细胞的百分比。新鲜涂片

甲醛-丙酮缓冲液

流水冲洗任务二常用细胞化学染色检验一、过氧化物酶染色（POX或MPO染色）结果判断：细胞质中出现棕黄色颗粒为阳性反应实验结果细胞染色─胞质中无阳性颗粒±胞质中细小阳性颗粒+胞质中阳性颗粒较粗大++阳性颗粒粗大密集，约占胞质1/2～2/3+++阳性颗粒粗大几乎布满胞质++++阳性颗粒呈团块状，充满胞质，可覆盖核上（++）（++）（+）（-）（+++）（+++）（++++）（-）（-）（-）（-）（±）一、过氧化物酶染色（POX或MPO染色）任务二常用细胞化学染色检验正常细胞POX染色反应细胞系统细胞染色反应粒细胞系统分化差的原始粒细胞为阴性，分化好的原始粒细胞至中性成熟粒细胞均呈阳性，且随着细胞的成熟，阳性反应的程度逐渐增强。中性分叶核粒细胞呈强阳性反应，但衰老的粒细胞阳性程度减弱甚至呈阴性；嗜酸性粒细胞阳性最强，嗜碱性粒细胞阴性单核细胞系统原始单核细胞呈阴性，幼稚及成熟单核细胞多呈弱阳性，阳性颗粒少而细小，分布不均。淋巴细胞系统淋巴细胞系统呈阴性反应其他细胞成熟型网状细胞及巨噬细胞可呈不同程度的阳性反应，浆细胞、红细胞、巨核细胞系统等均为阴性反应一、过氧化物酶染色（POX或MPO染色）任务二常用细胞化学染色检验临床意义：主要用于鉴别急性白血病类型1.急性髓细胞白血病多呈阳性反应，以M3和M2型反应最强，M1和M5型反应较弱，故有助于区别M3和M5型。2.急性淋巴细胞白血病呈POX阴性反应，或阳性原始细胞＜3%（可能是残留的原粒或早幼粒细胞），故为急性髓细胞和淋巴细胞白血病鉴别的重要指标。ALL（POX染色）M5（POX染色）M3（POX染色）M2（POX染色）一、过氧化物酶染色（POX或MPO染色）任务二常用细胞化学染色检验原理：苏丹黑是一种脂溶性重氮染料，能溶解于细胞内的含脂结构（如中性脂肪、磷脂、糖脂和类固醇）中，使脂类物质呈棕黑色或深黑色而显示出来。脂类物质在粒细胞中含量丰富，在单核细胞中也有少量。结果判断及正常细胞染色反应：与POX染色基本一致临床意义：与POX染色基本相似注：POX染色特异性高，而SBB染色的敏感性高，因SBB染色较繁琐，临床上POX染色更常用，但POX染色阴性者可加做SBB染色或直接采用细胞免疫分型确认。

二、苏丹黑B染色（SBB染色）任务二常用细胞化学染色检验酯酶是分解各种酯类的水解酶，根据机制的不同，分为非特异性酯酶和特异性酯酶。特异性酯酶易水解具有长链的酯类。非特异性酯酶易水解具有短链的酯类。单核巨噬细胞类为非特异性酯酶，中性粒细胞类则为特异性酯酶。区分单核细胞类或中性粒细胞类的重要方法，特别是二重染色法尤为重要。酯酶特异性酯酶(氯乙酸AS-D萘酚酯酶)非特异性酯酶pH值不同酸性酯酶(酸性α-醋酸萘酚酯酶)碱性酯酶(α-丁酸萘酚酯酶)中性酯酶α-醋酸萘酚酯酶醋酸AS-D萘酚酯酶三、酯酶染色任务二常用细胞化学染色检验（一）特异性酯酶染色—氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色（NAS-DCE）氯乙酸AS-D萘酚酯酶（NAS-DCE）几乎只出现在粒细胞中，特异性高，故称“粒细胞酯酶”、“特异性酯酶”。原理：氯乙酸AS-D萘酚被细胞内特异性酯酶水解，产生AS-D萘酚，再与稳定的重氮盐（坚牢紫酱GBC)偶联，生成不溶性红色沉淀，定位于胞浆中。含萘酚的底物（氯乙酸AS-D萘酚）细胞内相应的酶萘酚AS-D重氮盐（坚牢紫酱GBC）生成不溶性红色沉淀定位于胞质相应位置三、酯酶染色任务二常用细胞化学染色检验（一）特异性酯酶染色—氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色（NAS-DCE）操作：结果判断：胞质内出现红色弥漫性或颗粒状沉淀为阳性固定30-60秒基质液37℃孵育流水冲洗苏木素染液30min复染5min镜检：至少要观察100个白血病细胞的染色结果，计算阳性率和阳性指数新鲜涂片

甲醛-丙酮液

流水冲洗实验结果细胞染色─为胞质中无阳性颗粒±为胞质中细小阳性颗粒+胞质显现均匀浅色阳性反应，占胞质﹤1/4++胞质显现均匀红色阳性反应，占胞质﹤1/2+++胞质充满红色阳性反应++++胞质充满致密红色阳性产物呈团块状三、酯酶染色任务二常用细胞化学染色检验细胞系统细胞染色反应粒细胞系统分化差的原始粒细胞呈阴性，分化好的呈阳性，自早幼粒细胞至成熟中性粒细胞均呈阳性，但酶活性并不随细胞的成熟而增强。嗜酸性粒细胞呈阴性或弱阳性，嗜碱性粒细胞呈阳性单核细胞系统绝大多数为阴性其他细胞淋巴细胞、浆细胞、巨核细胞、有核红细胞、血小板等均呈阴性，但肥大细胞呈阳性。（一）特异性酯酶染色—氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色（NAS-DCE）正常细胞NAS-DCE染色反应：任务二常用细胞化学染色检验三、酯酶染色（一）特异性酯酶染色—氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色（NAS-DCE）临床意义：主要用于鉴别急性白血病类型（1）急性粒细胞白血病时，原粒细胞和幼稚粒细胞均呈一定程度阳性。（2）急性单核细胞白血病、急性淋巴细胞白血病，均呈阴性。（3）急性粒-单核细胞白血病时部分细胞阳性，部分细胞呈阴性。AML--M2a氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色1.原始粒细胞，呈弱阳性；2.幼稚粒细胞，呈强阳性；3.中性杆状核粒细胞，呈强阳性

AML—M1氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色任务二常用细胞化学染色检验三、酯酶染色（二）非特异性酯酶染色—α-醋酸萘酚酯酶染色（α-NAE）α-NAE存在于单核细胞、粒细胞和淋巴细胞中，是一种中性非特异性的酯酶，只有单核系细胞的阳性可被氟化钠抑制，故α-NAE染色+氟化钠抑制试验，对鉴别单核细胞白血病有重要价值。原理：含萘酚的底物（α-醋酸萘酚）重氮盐（坚牢蓝B）作用液+氟化钠单核细胞被抑制其他系不被抑制α-萘酚醋酸细胞内α-NAE生成不溶性棕黑色或灰黑色沉淀定位于胞质相应位置任务二常用细胞化学染色检验三、酯酶染色（二）非特异性酯酶染色—α-醋酸萘酚酯酶染色（α-NAE）操作：固定5分钟1张基质液37℃孵育流水冲洗甲基绿染液1小时复染5-15min镜检：两种方法染色后用油镜计数100或200个被检细胞，分别计算出抑制前和抑制后的阳性率和积分。按下列公式计算出抑制率：凡抑制率＞50％者，提示受氟化钠抑制。新鲜涂片2张

固定液流水冲洗1张基质液+氟化钠任务二常用细胞化学染色检验三、酯酶染色（二）非特异性酯酶染色—α-醋酸萘酚酯酶染色（α-NAE）结果判断：胞质内有灰黑色或棕黑色弥漫状或颗粒状沉淀为阳性实验结果细胞染色0分（─）胞质中无色素沉淀1分（+）胞质呈弥漫浅灰色或含少量阳性反应颗粒2分（++）胞质呈弥漫灰黑着色或含中等量阳性反应颗粒3分（+++）胞质呈弥漫棕黑较深色或含较多阳性反应颗粒或胞质呈弥漫棕黑较深色4分（++++）胞质呈弥漫深黑色或胞质中充满粗大阳性反应颗粒1.原始单核细胞（+）2.幼单核细胞（++）3.单核细胞（+++）4.巨核细胞（++）5.血小板（+++）6.杆状核粒细胞（─）7.分叶核粒细胞（─）8.淋巴细胞（─）任务二常用细胞化学染色检验三、酯酶染色（二）非特异性酯酶染色—α-醋酸萘酚酯酶染色（α-NAE）正常细胞NAS-DCE染色反应：细胞系统细胞染色反应单核细胞系统分化差的原始单核细胞呈阴性，分化好的原始单核细胞呈阳性（常较强），幼稚单核及单核细胞也呈阳性，阳性反应能被氟化钠抑制粒细胞系统各期粒细胞多数呈阴性，少数呈弱阳性，阳性反应不被氟化钠抑制淋巴细胞系统各期淋巴细胞多呈阴性，少数呈弱阳性，阳性反应不被氟化钠抑制其他细胞巨核细胞和血小板呈阳性，少数有核红细胞呈弱阳性，阳性反应不被氟化钠抑制；浆细胞呈阴性任务二常用细胞化学染色检验三、酯酶染色（1）急性单核细胞白血病时，α-NAE染色呈明显阳性反应，且其阳性反应被氟化钠抑制。（2）急性粒-单核细胞白血病时；α-NAE染色呈部分阳性，并被氟化钠抑制。（3）急性粒细胞白血病、急性淋巴细胞白血病时，α-NAE染色呈阴性或（弱）阳性，且其阳性反应不被氟化钠抑制。M5型--α-NAE染色原、幼单核细胞多呈强阳性M5型--α-NAE+氟化钠抑制试验原、幼单核细胞阳性反应被氟化钠抑制M4型--α-NAE染色部分细胞呈强阳性M4型--α-NAE+氟化钠抑制试验部分阳性反应细胞被氟化钠抑制任务二常用细胞化学染色检验三、酯酶染色（二）非特异性酯酶染色—α-醋酸萘酚酯酶染色（α-NAE）临床意义：主要用于辅助鉴别急性白血病细胞的类型（三）非特异性酯酶染色—α-丁酸萘酚酯酶染色（α-NBE）α-NBE在单核-吞噬细胞系统中活性最强，能被氟化钠抑制，而粒系、淋巴系、部分幼红细胞、巨核细胞和血小板等含量很少，被视为单核-吞噬细胞系统所特有的标志酶。原理：含萘酚的底物（α-丁酸萘酚）重氮盐（坚牢紫酱GBC）作用液+氟化钠单核细胞被抑制其他系不被抑制α-萘酚丁酸细胞内α-NBE生成不溶性红色沉淀定位于胞质相应位置任务二常用细胞化学染色检验三、酯酶染色（三）非特异性酯酶染色—α-丁酸萘酚酯酶染色（α-NBE）操作与结果判断：基本同α-NAE一致正常细胞α-NBE染色反应：临床意义：临床应用同α-NAE细胞系统细胞染色反应粒细胞系统各阶段粒细胞均呈阴性单核细胞系统分化差的原始单核细胞呈阴性，分化好的原始单核细胞呈阳性，幼稚单核及单核细胞呈阳性，阳性反应能被氟化钠抑制淋巴细胞系统T淋巴细胞、非T非B淋巴细胞可呈阳性，B淋巴细胞呈阴性其他细胞巨核细胞、有核红细胞、浆细胞呈阴性或弱阳性；组织细胞也可呈阳性，但不被氟化钠抑制注：1.α-NBE敏感性比α-NAE低，但特异性强用于鉴别急非淋的白血病类型

2.将POX染色与α-NBE染色+氟化钠抑制联合使用，对AML-M2、M4、M5分型更有价值任务二常用细胞化学染色检验三、酯酶染色任务二常用细胞化学染色检验三、酯酶染色（四）酯酶双染在同一张涂片上进行两种酯酶染色的方法称为酯酶双染色。正常细胞α-NBE染色反应：酯酶双染色可鉴别粒系细胞和单核系细胞，尤其对于急性粒-单核细胞白血病的诊断具有重要价值。多数采用一种特异性酯酶加一种非特异性酯酶染色，常用的有α-醋酸萘酚酯酶与氯乙酸AS－D萘酚酯酶双染色、α-丁酸萘酚酯酶与氯乙酸AS－D萘酚酯酶双染色等。临床应用：主要用于鉴别急性粒细胞白血病、急性粒-单核细胞白血病、急性单核细胞白血病酸性磷酸酶（ACP）存在于细胞的溶酶体颗粒中，某些细胞中的酸性磷酸酶耐酒石酸，故抗酒石酸酸性磷酸酶染色有助于某些疾病的诊断及鉴别诊断。原理：血细胞内的酸性磷酸酶在酸性（pH5.0）条件下水解基质液中的磷酸萘酚AS-BI，释放出萘酚AS-BI，后者与基质液中的重氮盐偶联形成不溶性的有色沉淀，定位于细胞质内酶所在的部位。pH5.0含萘酚的底物（磷酸萘酚AS-BI）重氮品红萘酚AS-BI细胞内ACP生成不溶性出现鲜红色颗粒沉淀定位于胞质相应位置任务二常用细胞化学染色检验四、酸性磷酸酶染色（ACP）（偶氮偶联法）试剂：操作：1．甲醇-丙酮缓冲液2．基质储备液

：磷酸萘酚AS-BI100mg，N-N二甲基甲酰胺10ml3．0.1mol/L乙酸缓冲液

4．0.05mol/L乙酸-酒石酸缓冲液5．作用液Ⅰ（临用时配制）：0.1mol/L乙酸缓冲液50ml，基质储备液1.0ml，重氮品红25mg。6．作用液Ⅱ（临用时配制）：0.05mol/L乙酸-酒石酸缓冲液50ml，基质储备液1.0ml，重氮品红25mg。固定30秒1张作用液Ⅰ37℃避光浸染蒸馏水洗甲基绿染液30分钟复染3-5min镜检新鲜涂片2张

固定液蒸馏水洗1张作用液Ⅱ稍干燥任务二常用细胞化学染色检验四、酸性磷酸酶染色（ACP）（偶氮偶联法）结果判断：胞质中出现鲜红色颗粒沉淀为阳性正常血细胞的染色反应：粒细胞、单核细胞、淋巴细胞、巨核细胞、血小板、浆细胞、巨噬细胞均呈阳性反应。实验结果细胞染色─胞质无色+胞质出现淡红色颗粒++胞质布满鲜红色颗粒+++胞质充满深红色颗粒1（+）2（++）3（+++）任务二常用细胞化学染色检验四、酸性磷酸酶染色（ACP）（偶氮偶联法）临床意义：临床ACP染色应用较少，主要用于多毛细胞白血病的诊断及脂质代谢障碍性疾病的鉴别。1.诊断多毛细胞白血病：多毛细胞呈阳性（常呈强阳性），阳性反应不被L-酒石酸抑制。慢性淋巴细胞白血病的淋巴细胞和恶性淋巴瘤细胞ACP染色也可呈阳性，但可被L-酒石酸抑制。2.鉴别戈谢细胞和尼曼-匹克细胞：前者阳性，并具有抗酒石酸功能；后者阴性。多毛细胞白血病ACP染色阳性反应，阳性不被酒石酸抑制ALL-ACP染色阳性反应阳性被酒石酸抑制戈谢细胞（1）-ACP染色阳性反应阳性不被酒石酸抑制任务二常用细胞化学染色检验四、酸性磷酸酶染色（ACP）（偶氮偶联法）原理：过碘酸是氧化剂，能使含有乙二醇基（CHOH-CHOH）的多糖类物质（糖原、粘多糖、粘蛋白、糖蛋白及糖酯等）氧化，形成双醛基（CHO-CHO），醛基与雪夫试剂中的无色品红结合，使无色的品红变成紫红色化合物，定位于含有多糖类的细胞内。试剂：1.固定剂：95%乙醇2.10g/L过碘酸溶液3.雪夫染液4.偏重亚硫酸液(新鲜配制)5.复染液：20g/L甲基绿水溶液氧化结合含乙二醇基的糖类（CHOH-CHOH）无色品红双醛基（CHO-CHO）过碘酸变成紫红色品红定位于胞质中任务二常用细胞化学染色检验五、糖原染色（PAS）（过碘酸-雪夫反应）操作：结果判断：胞质内有红色或紫红色，呈弥散状、颗粒状或块状的物质为阳性固定氧化蒸馏水洗雪夫染液10分钟10分钟镜检：油镜下各类细胞观察100个，按评分标准计算阳性率及积分新鲜涂片95%乙醇流水冲洗10g/L过碘酸10分钟30-60分钟蒸馏水洗偏重亚硫酸溶液洗3次甲基绿复染

各种血细胞PAS染色1.原始粒细胞（-）2.早幼粒细胞（+）3.中性中幼粒细胞（++）4.中性晚幼粒细胞（+++）5.中性杆状核粒细胞（++++）6.中性分叶核粒细胞（++++）7.嗜酸性粒细胞（+++）8.嗜碱性粒细胞（+++）9.单核细胞（±）10.淋巴细胞（-）11.淋巴细胞（+）12.淋巴细胞（++）13.淋巴细胞（+++）任务二常用细胞化学染色检验五、糖原染色（PAS）（过碘酸-雪夫反应）正常细胞PAS染色反应：细胞系统细胞染色反应粒细胞系统分化差的原始粒细胞呈阴性，分化好的原始粒细胞至中性分叶核粒细胞均呈阳性，并随着细胞的成熟逐渐增强；嗜酸性粒细胞中颗粒之间的胞质呈红色；嗜碱性粒细胞中的嗜碱性颗粒呈阳性，而颗粒之间的胞质不着色。红细胞系统有核红细胞及红细胞均呈阴性单核细胞系统分化差的原始单核细胞呈阴性，其他为阳性，绝大多数阳性反应物呈粗颗粒状，有时分布于细胞边缘的阳性反应物颗粒较粗大淋巴细胞系统大多数呈阴性，少数呈阳性（阳性率常＜20%），阳性反应物呈粗颗粒状或块状巨核细胞系统巨核细胞和血小板呈阳性，阳性反应的程度随细胞的发育成熟而增强，成熟巨核细胞多呈强阳性，阳性反应物呈颗粒状或块状其他细胞浆细胞一般呈阴性，少数呈阳性，巨噬细胞可为阳性，两者阳性反应物均呈细颗粒状任务二常用细胞化学染色检验五、糖原染色（PAS）（过碘酸-雪夫反应）临床意义：（1