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文档简介
DB52DB52/T953—2014贵州辣椒品种SSR标记鉴定技术规程2014-10-30发布2014-11-30实施贵州省质量技术监督局贵州省农业委员会I 1 1 1 1 2 2 3 51GB/T6682分析实验室用水规简单重复序列(SimpleSequen称量121.1gTris置于1L烧杯中,加入约800mL的去离子水,充分搅拌溶解,用浓盐酸调pH值至24.56%变性测序胶称取460g尿素,57g丙烯酰胺,3g甲叉双丙烯酰胺,200ml5×TBE溶液,再加少量ddH2O,短暂加热(≯37℃),搅溶溶解,滤纸过滤,加水定容至1000ml。4.9终止液分析天平,纯水仪,制冰机,台式低温冷冻离心机,移液器,PCR仪,凝胶成像系统,电Hpms1-139、CA514621、CA515055、BM59622、BM619394℃预变性5min;94℃变性45s,55℃-60将制好的凝胶板插入电泳槽,设45℃,额定功率70W-75W,先预电泳30min,然后将检测样品加入槽内,设50℃,在额定功率75W-80W下,电泳1-2个小时,当指示剂二甲苯青距离玻璃板底部约1将凝胶浸入固定液,轻摇20min,取出用ddH2O清洗2次;再将凝胶放入用ddH2O清洗2次;紧接着将凝胶放入显影液中,轻摇至DNA条带清晰出现为止,将出现清晰条带胶板转4用分子标记差异值≥2作为品种(或品系、自交系)的特异性判定标准,亦即如果两个品种(511213242526273839344R:AAGACATGAAATCCACA445566R:CCAACCACCATGGTTC78AACCAGCAATCCCATGAAA8R:AAACTGTCATATATTTG88889R:AACTTTAAGACTCAAAATC99G:TCCTTAACCTTACGAAAGGAAACTAAACACACTT
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