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文档简介

综合技能实训四粪便标本微生物检验学习目标1.掌握粪便标本的正确采集、运送和微生物检验程序。2.熟悉消化道感染的常见致病菌。3.了解粪便标本中常见致病菌的临床意义。4.具有正确采集粪便标本和进行粪便培养操作的能力。5.能正确选择试验项目对粪便培养标本进行微生物检验,能正确判断和分析试验结果并发出检验报告。综合技能训练四粪便标本微生物检验思维导图综合技能训练四粪便标本微生物检验一、粪便标本常见病原菌综合技能训练四粪便标本微生物检验1、球菌革兰阳性:金黄色葡萄球菌、厌氧链球菌、肠球菌革兰阴性:无

综合技能训练四粪便标本微生物检验2、杆菌革兰阳性:结核分枝杆菌、产气荚膜梭菌、艰难芽胞梭菌、蜡样芽胞杆菌革兰阴性:沙门菌、志贺菌、致病性大肠埃希菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌、小肠结肠炎耶尔森菌、弯曲菌、类志贺假单胞

综合技能训练四粪便标本微生物检验3、真菌白色念珠菌

综合技能训练四粪便标本微生物检验二、检验方法与程序综合技能训练四粪便标本微生物检验粪便标本的检验操作程序见下图粪便或肛拭子分离培养增菌培养麦康凯或中国蓝/伊红亚甲蓝琼脂平板SS琼脂平板亚硒酸盐增菌培养基(适用于沙门菌属)GN增菌培养基(适用于志贺菌属)SS及麦康凯琼脂平板分离双糖或三糖铁培养基血清学试验生化试验药敏试验报告结果综合技能训练四粪便标本微生物检验1、粪便标本的采集1)自然排便法2)直肠拭子法

综合技能训练四粪便标本微生物检验2、粪便标本的运送粪便标本应立即送检,室温保存不能超过2h,如不能立即送检,放入转运培养基中运送和保存,但不能超过24h;疑似霍乱弧菌感染标本,应用碱性蛋白胨水运送保存;疑似艰难芽胞梭菌感染标本,应放入厌氧运送系统中送检。综合技能训练四粪便标本微生物检验三、培养及鉴定综合技能训练四粪便标本微生物检验1、涂片检查霍乱弧菌检查:霍乱患者粪便通常呈米泔样,取新鲜标本涂片进行革兰染色,显微镜观察发现革兰阴性杆菌,较小呈直杆状、弧形、香蕉状、逗点状或鱼群状排列,可做出初步报告“找到革兰阴性弧形杆菌,疑似霍乱弧菌”。综合技能训练四粪便标本微生物检验1、涂片检查假丝酵母菌检查:在载玻片上加1滴生理盐水与标本混合,加盖玻片后直接显微镜观察或者革兰染色后镜检,革兰染色发现阳性卵圆形芽生孢子及假菌丝,可报告“找到假丝酵母菌”。艰难梭菌检查:取疑似抗生素假膜性肠炎患者的粪便涂片,若发现革兰阳性粗大杆菌,无荚膜,大多形成卵圆形芽胞,位于菌体次极端者,可报告“找到革兰阳性芽胞杆菌,疑似艰难梭菌”。综合技能训练四粪便标本微生物检验1、涂片检查弯曲菌检查:取患者新鲜粪便涂片,干燥固定后革兰染色镜检,若见细小、长而弯的革兰阴性弧形、S形或螺旋形成海鸥状的细菌,可报告“找到弯曲菌”。粪便中优势菌检查:取粪便标本直接涂片,革兰染色后镜检,根据细菌染色性、形态、排列及各自在涂片中所见到的相对比例等,推定主要优势菌并及时报告结果。综合技能训练四粪便标本微生物检验2、分离培养与鉴定沙门菌及志贺菌培养:取脓血、黏液样粪便或直肠拭子接种SS琼脂平板或XLD琼脂平板,35℃培养18~24h后观察生长现象,取可疑菌落做推断性生化试验,初步生化反应符合两属细菌生物学特性,继续用诊断血清作血清学试验,鉴定出志贺菌及沙门菌的血清群及型,再挑取菌落制成菌悬液,作药敏试验。如生化试验符合沙门菌或志贺菌,但与二者的诊断血清不发生凝集现象,可将待检菌液隔水煮沸1h以破坏K抗原和Vi抗原,再作凝集试验。综合技能训练四粪便标本微生物检验2、分离培养与鉴定致腹泻性大肠埃希菌培养:引起腹泻的大肠埃希菌主要有5种类型,即肠产毒性大肠埃希菌(ETEC)、肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC)、肠致病性大肠埃希菌(EPEC)、肠出血性大肠埃希菌(EHEC)和肠集聚性大肠埃希菌(EAggEC)。取脓血、水样或糊状粪便接种于血平板及麦康凯(或EMB、中国蓝)琼脂平板,35℃培养18~24h后观察菌落,挑取可疑菌落先按照一般大肠埃希菌作生化反应鉴定,再通过毒力试验或与大肠埃希菌多价血清作玻片凝集试验进行鉴定,同时作药敏试验。

综合技能训练四粪便标本微生物检验2、分离培养与鉴定霍乱弧菌培养:取米泔水样标本,接种于碱性蛋白胨水中增菌培养,6h后取表面菌膜或直接取粪便标本,接种于碱性琼脂平板、庆大霉素琼脂平板或硫代硫酸钠枸橼酸钠胆盐蔗糖(TCBS)琼脂平板,35℃培养18~24h后观察菌落,挑取可疑菌落通过形态学检查、动力及制动试验、血清学试验等进行鉴定。

综合技能训练四粪便标本微生物检验2、分离培养与鉴定副溶血性弧菌培养:取黏冻状、血性或水样粪便,以及可疑食物等接种于碱性蛋白胨水中增菌培养,35℃培养6~8h后移种于TCBS平板上。35℃培养18~24h后观察菌落,取可疑菌落作生化试验、无盐及高盐试验等进行鉴定。综合技能训练四粪便标本微生物检验2、分离培养与鉴定金黄色葡萄球菌培养:取绿色、海水样或糊状粪便接种于高盐甘露醇琼脂平板、Baird-Parker琼脂平板或血平板上,35℃培养18~24h后观察菌落,挑取金黄色β溶血菌落通过革兰染色、凝固酶、耐热DNA酶及甘露醇发酵等试验进行鉴定,同时作药敏试验。

综合技能训练四粪便标本微生物检验2、分离培养与鉴定小肠结肠耶尔森菌培养:将标本接种于麦康凯琼脂平板上,置于25℃培养24~48h后,呈乳糖不发酵菌落,较小、扁平、无色、稍隆起、透明或半透明,取此菌落作生化反应鉴定。综合技能训练四粪便标本微生物检验2、分离培养与鉴定空肠弯曲菌培养:取液状或带血粪便标本接种于弯曲菌选择培养基,或先接种于改良亚硒盐磺绿肉汤(SBG肉汤)增菌液,经42℃微需氧培养48h后,再接种于弯曲菌选择培养基中。在42℃微需氧条件下培养48h后观察生长现象,取略带红色、有光泽、半透明的可疑菌落作悬滴或压滴观察动力,可见呈摆动的投标样动力,再结合生化试验结果进行鉴定。综合技能训练四粪便标本微生物检验2、分离培养与鉴定艰难梭菌培养:取新鲜排出的水样粪便,立即接种于环丝氨酸头孢西丁果糖琼脂(CCFA)平板、艰难梭菌选择性培养基(CDIF)上,35℃厌氧培养48h后,选择可疑菌落移种庖肉培养基制备毒素测定,同时涂片、革兰染色并进行其他生化鉴定。综合技能训练四粪便标本微生物检验2、分离培养与鉴定真菌培养:真菌性腹泻多继发于长期抗生素治疗后,主要由白念珠菌引起。将标本接种于含氯霉素的沙氏琼脂和血琼脂平板上,分别置于25~30℃和35℃环境中培养24~48h,根据菌落特点、染色结果、芽管形成试验及厚膜孢子形成试验等进行鉴定。综合技能训练四粪便标本微生物检验2、分离培养与鉴定气/邻单胞菌的培养:取粪便标本接种于血琼脂平板和麦康凯琼脂平板上,35℃培养18~24h后,挑取灰色、光滑、不透明的菌落进行氧化酶试验和葡萄糖O/F试验,以及其它生化鉴定。

综合技能训练四粪便标本微生物检验四、结果报告综合技能训练四粪便标本微生物检验粪便标本的微生物学检验结果报告,应以分离目的菌种的结果而决定。涂片镜查时,应根据不同的检验目的选用不同的检查方法,发现典型阳性结果,应立即向临床医生发出初步报告。一旦分离培养出致病菌,应马上进行细菌鉴定和抗菌药物敏感试验,最后报告“检出×菌”,并报告药敏试验结果。如检出沙门菌或志贺菌,应根据血清学试验结果报告“检出××沙门菌”或“检出××志贺菌××群”;检出霍乱弧菌应立即向当地疾病预防控制中心报告。综合技能训练四粪便标本微生物检验粪便标本的微生物学检验结果报告,应以分离目的菌种的结果而决定。阴性结果应根据分离目的菌的结果而定。如SS和中国蓝琼脂平板分离粪便中的致病菌,应报告“未检出沙门菌属、志贺菌属及致病性大肠埃希菌”;CCFA琼脂平板分离艰难芽胞梭菌,则报告“未检出艰难芽胞梭菌”。

综合技能训练四粪便标本微生物检验五、临床意义综合技能训练四粪便标本微生物检验能引起肠道感染的常见致病菌有沙门菌、志贺菌、霍乱弧菌及致病性大肠埃希菌等,临床常表现为腹泻、呕吐、高热等症状。伤寒沙门菌能引起伤寒,志贺菌可引起细菌性痢疾,霍乱弧菌能引起霍乱等,当培养出上述细菌时需及时报告临床科室以及当地疾控中心,隔离患者以免播散。多种细菌本身或其代谢产物可引起食物中毒,常可危及生命,常见于沙门菌、副溶血弧菌、致病性大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、肉毒梭菌、蜡样芽胞杆菌食物中毒,多发生于夏秋季,以

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