免疫学技术 淋巴细胞数量及功能检测（临床免疫检验）

淋巴细胞数量及功能检测前言外周血白细胞主要包括中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞。正常情况下机体各类淋巴细胞的数量和功能保持相对稳定，当人体感染病原微生物或发生免疫性疾病时，均可引起淋巴细胞数量和功能变化。临床上常根据不同淋巴细胞的表面标志即分化群（CD）进行淋巴细胞及其亚群的数量检测。淋巴细胞功能测定可分为体内试验和体外试验。通过对机体淋巴细胞及其亚群的数量和功能测定，可为疾病的诊断、治疗、疗效评估等提供重要依据淋巴细胞数量及功能检测许多疾病或生物及其他理化因素均可引起淋巴细胞数量和功能变化数量检测功能测定根据淋巴细胞及其亚群的表面标志体内试验体外试验间接荧光免疫法T细胞数量检测针对T细胞数量的检测主要依据T细胞及其亚群细胞表面标志如CD3、CD4及CD8等分子间接荧光免疫法免疫组织化学法流式细胞术酶标法（ABC法、APAAP法）金标法（即IGSS法）T细胞功能检测淋巴细胞内细胞因子检测T细胞增殖试验CTL介导的细胞毒试验抗原特异性T细胞定量检测体内试验形态学法3H-TdR掺入法MTT比色法51Cr释放法MHC-抗原肽四聚体技术结核菌素试验PHA皮肤试验流式细胞术T细胞增殖试验——形态学法PBMCPHA5％CO2

37℃培养72h细胞涂片染色显微镜检查未转化淋巴细胞转化的淋巴母细胞流式细胞术转化率（％）＝转化的淋巴细胞数计数的淋巴细胞总数100％×T细胞增殖试验——3H-TdR掺入法SI＝试验孔cpm均值对照孔cpm均值外周血T细胞PHA发生增殖MTT含蓝色甲臜颗粒的T细胞有机溶剂测吸光度（A）值计算SI判定细胞增殖结果T细胞增殖试验——MTT法SI＝试验孔A均值对照孔A均值(SI≧2具有意义)淋巴细胞（CTL）+含51Cr的肿瘤细胞肿瘤细胞破坏51Cr释放测定γ射线CTL介导的细胞毒试验——51Cr释放法51Cr特异性释放率＝试验孔cmp均值最大释放孔cmp均值-自发释放孔cmp均值-自发释放孔cmp均值100％×根据T细胞活化的双识别原理，用生物工程技术将MHC分子在体外组装，并结合抗原表位肽，形成抗原肽-MHC分子复合物，结合流式细胞仪定量检测抗原特异性T细胞抗原特异性T细胞定量检测MHC-抗原肽四聚体技术用刺激剂体外激活淋巴细胞用蛋白转运抑制剂阻止细胞因子分泌到细胞外，细胞内细胞因子向高尔基体积聚，用流式细胞仪测定淋巴细胞内的细胞因子种类确定Th1/Th2细胞百分率淋巴细胞内细胞因子检测Th1和Th2分泌的细胞因子分泌的细胞因子Th1Th2IL-2++-IFN-γ++-TNF-β++++IL-3+++GM-CSF+++TNF-α-++IL-4-++IL-5-++IL-6-++IL-10-++原理体内试验12结核菌素试验PHA皮肤试验B细胞数量及功能检测数量检测1.mIg的检测：免疫荧光、免疫组化2.CD分子的检测：检测CD19、CD20、CD21、CD22、CD5等3.IgGFc受体的检测：EA花环试验4.小鼠红细胞受体的检测：花环试验功能检测1.B细胞增殖试验：3H-TdR掺入法、MTT2.B细胞抗体产生能力检测：溶血空斑试验、ELISPOT经典溶血空斑试验酶联免疫斑点试验可在单细胞水平上检测B产生抗体和T细胞分泌细胞因子NK细胞数量及功能检测NK细胞功能检测方法根据NK细胞表面CD分子进行检测检测CD3、CD56、CD16等，计数CD3-CD56+CD16+的细胞数即为NK细胞数形态学法常采用台盼蓝染色酶释法LDH释放法荧光法时间分辨荧光免疫分析法放射性核素释放法51Cr释放法125I-UdR释放法流式细胞术采用碘化丙啶（PI）染色法数量检测010203B细胞数量及功能检测NK细胞数量及功能检测

小结T细胞数量及功能检测思考题C细胞免疫是机体重要的免疫反应之一，但细胞免疫反应过程比较复杂，参与反应的成分众多，影响因素