医学免疫学教学课件汇编-17免疫诊断与免疫治疗

免疫诊断

Immunodiagnosis

免疫系王巍免疫诊断(Immunediagnosis)概念

利用免疫学原理进行临床疾病的诊断或辅助诊断抗原抗体反应的高度特异性亲和力抗原抗体反应的可逆结合解离度抗原抗体反应需要合适的浓度和比例可见性抗原抗体反应的两个阶段：特异性结合非共价，肉眼不可见，几秒-几分钟可见性反应电荷吸引，肉眼可见，数小时-数天抗原或抗体的检测抗原抗体反应的特点抗原抗体反应的影响因素：抗原抗体比例合适温度：37度酸碱度：pH6-8电解质：失去表面电荷01检测抗原或抗体的方法02凝集反应（agglutination)：颗粒性抗原与相应抗体在电解质存在的条件下结合，出现肉眼可见的凝集团块03直接凝集反应：颗粒性抗原+相应抗体–ABO血型测定间接凝集反应：可溶性抗原+颗粒载体+相应抗体01沉淀反应(precipitation)：可溶性抗原与相应抗体结合出现沉淀物02单向免疫扩散：可用于检测血清中Ig的含量双向免疫扩散：抗原抗体的定性分析免疫电泳：常用于血清蛋白种类分析免疫比浊：AgConcentrationDiameter2AgAgAgAgAbingel单向免疫扩散双向免疫扩散Ag+AgAb免疫电泳用标记的抗原或抗体进行的抗原抗体反应免疫荧光法：荧光素与抗体连接荧光抗体直接免疫荧光：荧光素标记的抗体直接作标本染色间接免疫荧光：一抗与标本中的抗原结合，再用荧光素标记的二抗染色AgYFluorochromeLabeledAbTissueSectionAgYYFluorochromeLabeledAnti-IgTissueSectionUnlabeledAb酶免疫测定：酶标记抗体进行的抗原抗体反应

酶联免疫吸附试验(ELISA)：将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使抗原抗体反应在固相表面进行。它将抗原抗体反应的特异性与酶的高效催化作用相结合，通过酶作用于底物后显色来判定结果。双抗体夹心法检测待测抗原间接法检测待测抗体BAS-ELISA（生物素-亲和素系统-ELISA）酶联免疫斑点试验(ELISPOT)免疫组化技术放射免疫测定法（radioimmunoassay,RIA）：放射性核素标记抗原或抗体，131I、125I01化学发光免疫技术（chemiluminescenceimmunoassay,CLIA）：化学发光物质标记抗原或抗体，鲁米诺02免疫胶体金（immunologicalcolloidalgoldsignature,ICS）：胶体金颗粒标记抗原或抗体，氯金酸（HAuCl4）03免疫印迹技术（immunoblotting,westernblotting）：十二烷基磺酸钠（SDS）聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）后转膜孵育一抗二抗04免疫细胞的测定分析免疫细胞的数量和功能，评价病人的免疫功能包括CD分子测定、淋巴细胞转化、吞噬实验、细胞毒实验等磁珠分离：抗体与磁珠交联免疫吸附分离法：将已知抗体包被培养皿，加入淋巴细胞悬液荧光激活细胞分选仪分离法（FACS）抗原肽-MHC分子四聚体技术淋巴细胞的分离与类型鉴定分离方法：密度梯度离心单个核细胞磁珠标记的抗体磁珠分离法：流式细胞分选仪（FACS）免疫细胞功能测定：T细胞功能测定B细胞功能测定吞噬细胞功能测定T细胞功能测定：01T细胞增殖试验细胞毒试验细胞因子检测皮肤试验02010402033H-TdR掺入法：氚标记的胸腺嘧啶核苷，掺入新合成的DNA中，增殖越多3H-TdR掺入越多MTT法3-（4，5-二甲基-2-噻唑）-2，5-二苯基溴化四唑，被琥珀酸脱氢酶还原为紫褐色颗粒细胞增殖的检测法：细胞毒实验：细胞形态：台盼蓝染色51Cr的释放LDH释放凋亡细胞检测法：细胞形态：琼脂糖电泳:DNAladderbandFACS:DNA断裂为非二倍体TUNEL：TdT-dUTP连接着色DNA3’断裂末端死细胞生物活性检测法：CTLL细胞株——IL-2依赖01.增殖vs细胞因子含量02.免疫学检测：ELISAELISPOT03.细胞因子的检测Ig定量：单向琼脂扩散、免疫比浊法、ELISA01B细胞增殖试验抗体形成细胞测定：溶血空斑实验02B细胞功能测定吞噬细胞功能测定趋化功能测定（Boyden小室）吞噬功能测定硝基蓝四氮唑NBT—淡黄色经超氧阴离子O2-变为蓝黑色颗粒荧光标记的生物颗粒、天然有色颗粒（鸡红细胞）免疫学检测方法的应用疾病的诊断：感染性疾病超敏反应性疾病自身免疫病免疫缺陷病肿瘤免疫学监测：12

免疫学防治

Immunoprophylaxisandimmunotherapy

010203040506安全有效实用自然免疫：机体感染病原体后建立的特异性免疫，包括胎儿或新生儿经胎盘或乳汁从母体获得抗体。疫苗（vaccine）：一些能够诱导机体产生特异性免疫的人工主动免疫制剂如细菌性制剂、病毒性制剂以及类毒素等统称为疫苗。人工主动免疫:用疫苗接种机体使之产生特异性免疫,从而预防感染的措施。人工被动免疫：给人体注射含特异性抗体的免疫血清或细胞因子等制剂，以治疗或紧急预防感染的措施。疫苗的基本要求:一、免疫预防01人工主动免疫02减毒活疫苗：免疫原性强，类似轻症感染，只需接种一次。卡介苗、脊髓灰质炎、麻疹、风疹疫苗03灭活疫苗（死疫苗）：免疫原性强，理化灭火，诱导特异性抗体的产生，无法诱导CTL，需接种多次。狂犬病、伤寒、流感疫苗04类毒素：细菌的外毒素经0.3%-0.4%甲醛处理，诱导机体产生抗毒素。白喉、破伤风04030102人工被动免疫抗毒素：用细菌外毒素或类毒素免疫动物制备的免疫血清，具有中和外毒素的作用。破伤风抗毒素、白喉抗毒素人免疫球蛋白制剂：从大量混合血浆或胎盘血中分离制成的免疫球蛋白浓缩剂。甲型肝炎、丙型肝炎、麻疹、脊髓灰质炎等疾病的预防细胞因子和单克隆抗体佐剂（adjuvant)：预先或与抗原同时注入体内，可增强机体对该抗原的免疫应答或改变免疫应答类型的非特异性免疫增强物质。增加局部抗原浓度刺激单核-巨噬细胞系统，增强抗原处理和提呈能力刺激淋巴细胞增殖分化常用佐剂：

氢氧化铝

ISCOMs（免疫刺激复合物）

含CpG寡核苷酸细胞因子疟疾疫苗、肝癌疫苗处于临床试验阶段合成肽疫苗：03炎球菌、肺炎球菌疫苗已获准使用）结合疫苗：细菌夹膜多糖+白喉类毒素（脑膜02肝炎病毒表面抗原制成的乙型肝炎疫苗亚单位疫苗：有效免疫原成分制成的疫苗，如乙型01新型疫苗重组抗原疫苗：乙型肝炎疫苗获准使用重组载体疫苗DNA疫苗：用编码有效免疫原的基因与表达质粒构建重组体直接免疫机体。转基因植物疫苗：将编码有效免疫原的基因导入可食用的植物细胞基因组中，使其在植物的可食用部分稳定表达，通过摄取食物达到免疫接种的目的。基因工程疫苗我国计划免疫程序疫苗名称第一次第二次第三次加强预防传染病卡介苗出生肺结核乙肝疫苗出生1月龄6月龄乙型病毒性肝炎脊灰疫苗2月龄3月龄4月龄4周岁脊髓灰质炎百白破疫苗3月龄4月龄5月龄18-24月龄，6周岁百日咳白喉破伤风麻疹疫苗8月龄麻疹麻腮风疫苗18-24月龄风疹流行性腮腺炎乙脑疫苗8月龄2周岁流行性乙型脑炎A群流脑疫苗6-18月龄（1、2次间隔3个月）流行性脑脊膜炎A+C群流脑疫苗3周岁6周岁甲肝疫苗18月龄甲型肝炎以上为儿童免疫规划疫苗，以下为重点人群接种疫苗出血热双价纯化疫苗出血热炭疽减毒活疫苗炭疽钩体灭活疫苗钩体病01许多疾病无有效疫苗：02病毒：HIV，疱疹病毒03细菌：葡萄球菌，A组链球菌04真菌：假丝酵母05原生动物：疟疾，利什曼病06蠕虫感染：血吸虫病抗肿瘤防止免疫病理损伤传染病计划生育疫苗的应用免疫治疗（Immunotherapy）利用免疫学原理，针对疾病的发生机制，人为地调整机体的免疫功能，达到治疗母的所采取的措施。免疫抑制、免疫增强主动或被动特异或非特异0302010405分子疫苗：合成肽疫苗、重组载体疫苗和DNA疫苗可作为肿瘤和感染性疾病的治疗性疫苗抗体：多克隆抗体、单克隆抗体、基因工程抗体细胞因子：外源性细胞因子治疗、细胞因子拮抗疗法、微生物抗原疫苗微生物抗原疫苗（一）、分子治疗在临床应用的多克隆抗体包括：胎盘球蛋白、丙种球蛋白、破伤风抗毒素、白喉抗毒素、抗淋巴细胞抗血清、抗Rh抗体、抗SARS病毒抗体等多克隆抗体在临床应用的鼠源单克隆抗体：抗CD3（OKT3）：抗器官移植排斥抗CD20：治疗B细胞淋巴瘤鼠源单克隆抗体基因工程抗体已经成为治疗性抗体的主流产品。包括：嵌合抗体（chimericAb)人源化抗体（humanizedAb）人抗体基因工程抗体抗体药物鼠源单克隆抗体治疗存在的主要问题是HAMA（Humananti-mouseantibody）反应，导致疗效下降，副作用增加。基因工程抗体01抗细胞因子及其受体抗体02抗TNF及其受体的抗体治疗类风湿关节炎03抗IL-2及其受体治疗自身免疫病和抗移植排斥04抗VEGF抗体治疗肿瘤05抗EGFR2、EGFR1抗体治疗肿瘤06抗CD分子抗体07抗CD20嵌合抗体治疗B细胞淋巴瘤08抗CD33治疗急性髓性白血病09抗CD52治疗淋巴瘤10抗CD11a治疗银屑病01临床用量大02成本高，价格昂贵03生产工艺复杂，硬件设备高投入04治疗性免疫靶标的鉴定有很大难度05存在临床风险抗体药物的主要问题治疗性抗体名称（括号内为商品名）适应症肿瘤抗CD20（Rituxan，Zevalin，Bexxar，Arzerra）非霍奇金淋巴瘤抗HER2/CD340（Herceptin）转移性乳腺癌抗CD33（Mylotarg）急性髓样细胞白血病抗CD52（Campath）B细胞白血病、T细胞白血病和T细胞淋巴瘤抗EGFR（Erbitux，Vectibix）转移性结肠直肠癌和头颈部肿瘤抗RANKL（Prolia/Xgeva）预防已经转移并损害骨质的肿瘤患者的骨骼相关事件急性移植排斥反应抗CD3（OrthocloneOKT3）肾移植后急性排斥反应抗CD25（Zanapax，Simulect）肾移植后急性排斥反应自身免疫病和过敏性疾病抗TNFα（Remicade，Humira，Simponi）Crohn病，类风湿性关节炎、银屑病性关节炎、溃疡性结肠炎、强直性脊椎炎抗IgE（Xolair）持续性哮喘抗CD（Raptiva）斑状牛皮癣抗α4整合素（Tysabri）多发性硬化症抗VEGF（Lucentis）年龄相关性黄斑病变抗CD45RO+（Amevive）银屑病及其他自身免疫紊乱疾病抗TNF（Cimzia）类风湿性关节炎抗IL-1β（Ilaris）自身炎症性疾病抗IL-12/IL-23（Stelara）成年患者中度至严重的斑块性银屑病人源型抗C5（Soliris）阵发性睡眠性血红蛋白尿症其他抗gpⅡb/Ⅲa（ReoPro）预防冠状动脉血管成形术中发生血栓抗呼吸道合胞病毒（Synagis）预防儿童在高危期呼吸道合胞病毒感染抗IgGⅠ（OncoScint）检测结直肠腺癌和卵巢上皮细胞癌，诊断乳房癌、肺小细胞癌、胰腺癌、胃癌和食管癌抗PSMA（ProstaScint）评估疑有复发的前列腺患者、用于患者的分期抗CEA（CEA-Scan）检测原发性、结直肠癌转移，乳腺癌淋巴转移抗肌凝蛋白单株（Myoscint）心肌梗塞引起的胸痛定位、心肌梗塞和心肌炎的造影抗SCLC抗体片段-NR-LU-10-Fab（Verluma）诊断常规方法检查经常无效的小细胞肺癌抗CD15（NeutroSpec）用于阑尾炎疑似患者的鉴别诊断美国FDA已批准生产和临床使用的单克隆抗体（截至2011年）重组蛋白质药物

批准上市的重组细胞因子药物

IFNα

白血病、肝炎、Kaposi肉瘤

IFNγ 类风湿关节炎、慢性肉芽肿、生殖器疣

G-CSF

自身骨髓移植、化疗导致的粒细胞减少症、再生障碍性贫血

GM-CSF自身骨髓移植、化疗导致的血细胞减少症、再生障碍性贫血

Epo

慢性肾衰导致贫血、癌症或癌症化疗导致的贫血、失血后贫血

IL-2 癌症、免疫缺陷、疫苗佐剂

IFNβ多发性硬化症

IL-11放化疗所致血小板减少症

SCF与G-CSF联合应用与外周血干细胞移植

PDGF糖尿病导致的皮肤溃疡

EGF外用药治疗烧伤、溃疡（仅在中国上市）

bFGF外用药治疗烧伤、外周神经炎（仅在中国上市）

TNF

局部灌注治疗晚期骨髓瘤（仅在德国上市）

TNF

突变体晚期肿瘤（仅在中国上市）

Tpo治疗血小板减少症（仅在中国上市）批准上市的重组可溶性受体药物可溶性TNF受体-Ig（Enbrel）：治疗类风湿关节炎（Amgen),2006年销售额超过45亿美元可溶性CD152-IgCTLA4-Ig）:商品名Abatacept，治疗自身免疫病（Bristol-MyersSquibb）,2005年12月批准上市半衰期短，需要反复给药能够诱导抗体产生重组蛋白质药物的主要问题基因治疗将正常人体基因通过invivo或exvivo的途径导入病人体内，通过体内表达正常基因治疗疾病。重症联合免疫缺陷（SCID）的基因治疗腺苷脱氨酶（ADA）基因治疗(1990)AshantideSilva,wasthefirstpatienttobetreatedwithgenetherapy.XSCID的IL-2受体链基因治疗性联SCID的发病是由于IL-2R基因缺陷2000年法国科学家在Science首次报道2例成功基因治疗的结果；至2002年法、英、美共治疗14例，12例成功。第一例成功接受IL-2R基因治疗的男孩RhysEvansXSCID基因治疗原理01病毒载体的安全性02靶基因选择03基因导入效率04基因的可调控表达基因治疗的主要问题树突状细胞疫苗：使用肿瘤提取物抗原或肿瘤抗原多肽等体外刺激树突状细胞，或用携带肿瘤相关抗原基因的病毒载体转染树突状细胞，再回输给患者，可有效的激活抗肿瘤免疫应答基因修饰的瘤苗：用基因修饰的方法改变肿瘤细胞的遗传性状，降低致瘤性，增强免疫原性肿瘤细胞疫苗：灭活瘤苗、异构瘤苗。自体或同种肿瘤细胞经理化方法处