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41河南省市场监督管理局发布I 2 2 5 9本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定1牛妊娠诊断技术规程本文件规定了直肠检查、超声波诊断、妊娠相关糖蛋白（pregnancy-associatedglycoproteins,PAGs）检测等牛妊娠诊断方法的操作技术规程。母牛妊娠后胎盘的滋养层双核细胞与子宫上皮细胞融合后释放的一种蛋白。一般最早可在妊娠4.1动物准备4.2人员准备4.3排空蓄粪2操作人员直检手手指并拢，以45°~60°角缓慢进入直肠，排空蓄粪。4.4确定子宫颈位置4.5妊娠诊断跟踪大小变化情况，从而确定母牛是否妊娠。妊娠期牛子宫变化应符合附录A的规4.6检查结束5.1动物准备5.2人员准备5.3排空蓄粪5.4开机自检按设备要求进行预热，根据B超仪屏幕影像质量调节灰度、对比度、增益度及近场、远场5.5获取影像妊娠状况进行适当调整，紧贴子宫不断缓慢移动调整探查角度，直至清晰影像出现。5.6妊娠诊断5.7检查结束3采集配种28d后牛只血液并分离血清。采样、运输过程应符合NY用包被液将牛PAGs单克隆抗体稀释至工作浓度，加入酶标板孔中，每35ng），在2℃~8℃放置12h。每孔加入200μL的封闭液，置37℃孵育1h。按6.3.3规定操作。每孔加入50μL样品缓冲液。分别将100μL标准品（A～F）和样品加入到相荡混匀。覆膜，37℃孵育60min或室温（18℃~25℃)孵育90min。孵育后洗板，甩尽酶标板内液体，每孔加300μL洗涤液覆膜，37℃避光孵育60min或室温（18℃~25℃)避光孵育90min。每孔加100μL底物溶液。勿覆膜，室温（18℃~25℃)避光孵育30min。4），），0.99。根据样品的OD值利用标准曲线计算出样被检牛只PAGs检测浓度＞1000pg/mL时，结果判断为妊娠；PAGs检测浓度＜300断为空怀状态；300pg/mL≤PAGs检测浓度≤1000pg/mL时，结果判断为高风险，存5A.1未孕牛触诊子宫有弹性，子宫角有收缩反应。卵巢上无妊娠A.2怀孕牛A.2.1初期：子宫变化不大，子宫壁有弹性，孕角侧卵巢上有突出于卵巢表面的黄体，同时观察是否6A.2.87个月：子叶如核桃大，两侧子宫中动脉均明显。A.2.98个月：子叶更大，两侧中动脉孕脉显著，胎儿上移。A.2.109个月：前置部分进入骨盆入口，两侧子宫动脉有显著孕脉。），牛孕后27d（图B.3）、30d（图B.4）、32d（图B.5）、43d（图B.6）、59d（图B.7）、68将下列试剂按次序加入1000mL规格的容器中，加入800mL蒸馏水充分溶解或1mol/L氢氧化钠（NaOH）调节至pH7包被液为碳酸盐缓冲液（0.025mol/L，pH9.6）。将下列试剂按次序加入1000mL规格的容器中，加入800mL蒸馏水充分溶解，用1mol/L盐酸（HCl）或1mol/L氢氧化钠（NaOH）调节至p

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