小麦品种冬春季抗寒性鉴定与评价DB41-T 1379-2017

ICS65.020

B01

DB41

河南省地方标准

DB41/T1379—2017

小麦品种冬春季抗寒性鉴定与评价

2017-04-24发布2017-07-24实施

河南省质量技术监督局发布

DB41/T1379—2017

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由河南省农业科学院提出。

本标准起草单位：河南省农业科学院小麦研究所。

本标准主要起草人：许为钢、方宇辉、齐学礼、王会伟、李艳、李春鑫、董海滨。

本标准参加起草人：张煜、张文超、赵明忠、李正玲、郭瑞。

I

DB41/T1379—2017

小麦品种冬春季抗寒性鉴定与评价

1范围

本标准规定了冬小麦品种冬春季抗寒性鉴定的术语和定义、鉴定方法及评价。

本标准适用于小麦种质资源和品种的抗寒性鉴定与评价。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB4404.1-2008粮食作物种子第1部分：禾谷类

NY/T496-2010肥料合理使用准则通则

NY525-2012有机肥

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

冬季冻害

小麦在越冬期经历0℃以下连续低温或剧烈降温天气而导致的小麦生长停滞、叶片枯死或死苗的

现象。

3.2

春季寒害

又称倒春寒，春季气温回暖后温度骤降到0℃（冰点温度）以上低温对小麦造成的伤害。

3.3

隶属函数

若对论域（研究的范围）U中的任一元素x，都有一个数A(x)∈[0，1]与之对应，则称A为U上的模糊

集，A(x)称为x对A的隶属度。当x在U中变动时，A(x)就是一个函数，称为A的隶属函数。

4抗寒性鉴定

4.1鉴定前准备

4.1.1种子选择

待测试小麦种质资源和品种的种子质量应符合GB4404.1-2008的规定。

4.1.2播种

4.1.2.1大田

1

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播期为当地小麦适播期。田间种植方法为随机区组排列，3次重复，小区面积约13.33m2，6行区，

行距20cm左右，播量确保基本苗每667m2为12～14万。施肥按大田常规管理，有机肥应符合NY525-2012

的规定，化肥应符合NY/T496-2010的规定。

4.1.2.2盆栽

选择直径30cm，高35cm的圆柱形盆，装肥沃表土并施足基肥，埋于试验田中，盆内土壤与盆外大

田齐平。每个参试材料种植4盆，每盆点播20穴，每穴1粒，定苗10株，施肥管理参见4.1.2.1。

4.1.3人工气候室设置

-2-1

温度变幅为±0.5℃，白天（8:00～20:00）采用人工光源补光，光照强度为600μmol·m·s。

冬季冻害鉴定，温度为白天-10℃，夜间-13℃。春季寒害鉴定，温度为白天0℃，夜间-3℃。

4.1.4取样

4.1.4.1基本要求

当气温达到鉴定要求时，取小麦上部3片新鲜展开叶片。

4.1.4.2冬季冻害

自然条件下，当气温降至最低温度（低于-10℃）后，4h～8h内取样。

盆栽条件下，小麦进入六叶一心时，将其移入人工气候室进行低温处理，以不进行低温处理的材料

作为对照。植株经低温处理12h后进行取样。

4.1.4.3春季寒害

自然条件下，气温发生比正常温度陡降8℃以上，4h～8h内取样。

盆栽条件下，进入拔节期后对小麦进行穗分化观察，发育至药隔期将其移入人工气候室进行低温处

理,对照设置和取样方法参见4.1.4.2。

4.1.5仪器与试剂

测定指标所需仪器和试剂见附录A中A.1.2和A.1.3、附录B中B.1.2和B.1.3及附录C中C.1.2和C.1.3。

4.2鉴定方法

4.2.1抗寒性指标测定

4.2.1.1可溶性糖含量

采用蒽酮比色法。实验步骤和结果计算见附录A中A.2和A.3。

4.2.1.2超氧化物歧化酶（SOD）活性

采用氮蓝四唑(NBT)光化还原法。实验步骤和结果计算见附录B中B.2和B.3。

4.2.1.3丙二醛（MDA）含量

采用硫代巴比妥酸（TBA）反应法。实验步骤和结果计算见附录C中C.2和B.3。

5抗寒性评价

2

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5.1性状相对值计算

性状相对值计算见公式（1）。

Xj=（xj/CKj）×100%…………（1）

式中：

Xj—第j个指标的性状相对值，作为评价材料抗寒性的指标；

xj—低温处理下第j个指标的测定值；

CKj—第j个指标的对照处理测定值。

5.2隶属函数值计算

各参试小麦材料相对性状的隶属函数值计算见公式（2）和（3）。

ｕ（Xij）＝（Xij－Xmin）/（Xmax－Xmin）（与抗寒性呈正相关的指标）…………（2）

ｕ（Xij）＝1－（Xij－Xmin）/（Xmax－Xmin）（与抗寒性呈负相关的指标）…………（3）

式中：

ｕ（Xij）—第i个样品，第j个指标的隶属函数值；

Xij—第i个样品，第j个指标的性状相对值；

Xmax和Xmin—某指标性状相对值的最大值和最小值。

5.3抗寒性评价值计算

参试小麦材料的冬春季抗寒性评价值计算见公式（4）。

Di=∑ｕ（Xij）/n…………（4）

式中：

Di—第i个样品的抗寒性评价值；

n—测定指标数。

5.4抗寒性分级

根据抗寒性评价值D将小麦的抗寒性分为三个等级，见表1。

表1小麦抗寒性分级标准

级别抗寒性评价值（D）抗寒性

10.65<D≤1.00强

20.40<D≤0.65中等

30.00<D≤0.40弱

3

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AA

附录A

（规范性附录）

小麦叶片可溶性糖含量测定

A.1试验准备

A.1.1材料

取被测小麦品种新鲜叶片，剪碎并混匀。

A.1.2仪器设备

分光光度计；电子分析天平；水浴锅；100mL容量瓶；试管；漏斗；剪刀；移液管；洗耳球等。

A.1.3试剂及配制

蒽酮试剂：称取蒽酮200mg溶于100mL浓硫酸中。该试剂不能久贮，宜用前配制。

100μg·mL-1蔗糖标准母液：准确称取蔗糖100mg于烧杯加少量水溶解后，洗入100mL容量瓶中定

容至刻度。

A.2实验步骤

A.2.1蔗糖标准曲线制作

取6支试管，编号，按表A.1配制每管含量为0μg～100μg蔗糖标准液。加入表中试剂后，向各管

沿管壁迅速加入蒽酮试剂6.5mL，并立即摇动使混合均匀，置试管架上室温下显色，冷却后倒入比色杯，

以0号管作空白对照，在620nm波长处，以多点校准总量法，制作标准曲线。

表A.1蔗糖标准液的配制

管号

试剂

012345

蔗糖标准母液/mL00.20.40.60.81

蒸馏水/mL2.52.32.11.91.71.5

每管蔗糖含量/μg020406080100

A.2.2样品提取

取低温胁迫后的新鲜小麦叶片约1g，剪碎混匀后放入试管中，加入蒸馏水10mL，置于沸水浴中提

取20min，冷却后过滤入100mL容量瓶中，以热水冲洗残渣2～3次，一并滤入容量瓶中，待冷至室温，

定容至刻度，即为样品待测液。

A.2.3可溶性糖含量测定

4

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吸取待测液0.2mL（含糖量30μg～80μg），加入试管中，再加蒸馏水2.3mL，摇匀。随后沿试

管壁迅速加入蒽酮试剂6.5mL，立刻摇动混合均匀，置于试管架上显色，冷却至室温后，以空白管作对

照，在620nm波长处，按多点校准定量法测定待测管中提取液糖含量。

A.3结果计算

可溶性糖含量计算见公式（A.1）。

（m×Va）/(1000×Vb）

WSS=…………（A.1）

W×1000

式中：

-1

WSS—可溶性糖含量，mg·g；

m—提取液中糖含量，μg；

W—小麦叶片鲜重，g；

Va—提取液总量，mL；

Vb—待测液用量，mL。

5

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BB

附录B

（规范性附录）

小麦叶片SOD活性测定

B.1试验准备

B.1.1材料

取被测小麦品种新鲜叶片（大田材料16:00取样），剪碎并混匀。

B.1.2仪器设备

分光光度计；高速冷冻离心机；荧光灯（反应试管处照度为4000Lx）、微量移液器等、离心管数

支。

B.1.3试剂及配制

磷酸缓冲液配制：A液：0.2M的KH2PO4溶液称取分析纯KH2PO427.216g，用蒸馏水定容至1000mL。

B液：0.2M的K2HPO4溶液称取分析纯K2HPO4•3H2O45.644g，用蒸馏水定容至1000mL。

0.05M磷酸缓冲液（pH=7.8）：A液21.25mL+B液228.25mL定容至1000mL。

130mMMet(甲硫氨酸)：取1.9399gMet,用磷酸缓冲液定容至100mL；棕色瓶避光4℃保存。

750μMNBT（氮蓝四唑）：取0.06133gNBT,用磷酸缓冲液定容至100mL；棕色瓶避光4℃保存。

100μMEDTA-Na2：取0.0372gEDTA-Na2用磷酸缓冲液定容至1000mL，棕色瓶避光保存。

20μMFD(核黄素)：0.00753gFD用蒸馏水定容至1000mL。随用随配。棕色瓶避光保存。

B.2实验步骤

B.2.1酶液提取

取低温胁迫后的新鲜小麦叶片约0.5g于预冷的研钵中，加1mL预冷的0.05M磷酸缓冲液（pH=7.8）

在冰浴上研磨成浆，加缓冲液使最终体积为5mL，在4℃冷冻离心4000r/min下离心20min，上清液即

为SOD酶粗提液，置于0℃～4℃下保存待用。

B.2.2显色反应

取透明度较好的5mL离心管4支，2支为测定管，2支为对照管，1支做光反应对照，1支做空白（对

照、空白不加酶液，以缓冲液代替）。按表B.1依次加入各溶液：

表B.1各溶液显色反应用量

试剂用量/mL终浓度

0.05M磷酸缓冲液1.5–

130mMMet0.313mM

750μMNBT0.375μM

100μMEDTA-Na20.310μM

6

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表B.1各溶液显色反应用量（续）

试剂用量/mL终浓度

20μMFD0.32.0μM

酶液0.052支对照管以缓冲液代替酶液

蒸馏水0.25–

总体积3.0–

混匀后将空白管对照管置黑暗处，其它各管于4000Lx日光下反应20min，要求各管受光情况一致，

根据温度情况来调整反应时间，温度高，反应时间缩短。反应结束后遮光保存。

B.2.3SOD活性测定与计算

以空白管调零，560nm比色，分别测定其它管的吸光度。

B.3结果计算

已知SOD活性单位以抑制NBT光化还原的50%为一个酶活性单位表示，SOD活性计算见公式（B.1）。

（ACK—AE）×V

USOD=…………（B.1）

0.5W×Vt×ACK

式中:

-1

USOD—SOD总活性，U·g；

ACK—照光对照管的吸光度；

AE—样品管的吸光度；

V—样品液总体积，mL；

Vt—测定时的酶液用量，mL；

W—小麦叶片鲜重，g。

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CC

附录C

（规范性附录）

小麦叶片MDA含量测定

C.1试验准备

C.1.1材料

取被测小麦品种新鲜叶片，剪碎并混匀。

C.1.2仪器设备

离心机，分光光度计；电子分析天平；恒温水浴；研钵；离心管；移液器（1mL、5mL）；洗耳球；

剪刀。

C.1.3试剂

10％三氯乙酸；0.6％硫代巴比妥酸（TBA）溶液；石英砂。

C.2实验步骤

C.2.1MDA的提取

称取低温胁迫后的小麦叶片1g，加入少量石英砂和10％三氯乙酸2mL，研磨至匀浆，再加8mL10％

三氯乙酸进一步研磨，匀浆以4000r/min离心10min，其上清液为丙二醛提取液。

C.2.2显色反应及测定

取4支干净试管，编号，3支为样品管（三个重复），各加入提取液2mL，对照管加蒸馏水2mL，然

后各管再加入2mL0.6％硫代巴比妥酸溶液。摇匀，混合液在沸水浴中反应15min，迅速冷却后再离心。

取上清液分别在532、600和450nm波长下测定吸光度（A）值。

C.3MDA含量计算

C.3.1反应混合液中MDA浓度

反应混合液中MDA浓度计算见公式（C.1）。

Cm=6.45×（A532－A600）－0.56×A450…………

（C.1）

式中：

-1

Cm—反应混合液中MDA浓度，μmol·L；

A450—在450nm波长下测得的吸光度值；

A532—在532nm波长下测得的吸光度值；

A600—在600nm波长下测得的吸光度值。

C.3.2提取液中MDA浓度

8

DB41/T1379—2017

提取液中MDA浓度计算见公式（C.2）。

Cm×Vr/1000

Ce=…………（C.2）

Vd

式中：

-1

Ce—提取液中MDA浓度，μmol·mL；

Vr—反应液体积，mL；

Vd—测定时提取液用量，mL。

C.3.3样品中MDA含量

样品中MDA含量计算见公式（C.3）。

Ce×VT

WMDA=…………（C.3）

W

式中：

-1

WMDA—样品中MDA含量，μmol·g；

VT—提取液总量，mL；

W—小麦叶片鲜重，g。

_________________________________

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前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由河南省农业科学院提出。

本标准起草单位：河南省农业科学院小麦研究所。

本标准主要起草人：许为钢、方宇辉、齐学礼、王会伟、李艳、李春鑫、董海滨。

本标准参加起草人：张煜、张文超、赵明忠、李正玲、郭瑞。

I

DB41/T1379—2017

小麦品种冬春季抗寒性鉴定与评价

1范围

本标准规定了冬小麦品种冬春季抗寒性鉴定的术语和定义、鉴定方法及评价。

本标准适用于小麦种质资源和品种的抗寒性鉴定与评价。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。

凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB4404.1-2008粮食作物种子第1部分：禾谷类

NY/T496-2010肥料合理使用准则通则

NY525-2012有机肥

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

冬季冻害

小麦在越冬期经历0℃以下连续低温或剧烈降温天气而导致的小麦生长停滞、叶片枯死或死苗的

现象。

3.2

春季寒害

又称倒春寒，春季气温回暖后温度骤降到0℃（冰点温度）以上低温对小麦造成的伤害。

3.3

隶属函数

若对论域（研究的范围）U中的任一元素x，都有一个数A(x)∈[0，1]与之对应，则称A为U上的模糊

集，A(x)称为x对A的隶属度。当x在U中变动时，A(x)就是一个函数，称为A的隶属函数。

4抗寒性鉴定

4.1鉴定前准备

4.1.1种子选择

待测试小麦种质资源和品种的种子质量应符合GB4404.1-2008的规定。

4.1.