DB35T 2034-2021 鸭瘟强弱毒核酸鉴别诊断技术

35DB35/T2034—2021鸭瘟强弱毒核酸鉴别诊断技术Quarantineprotocolforvirulentandattenuatedstrainsofduckplaguevirusinfection2021-12-29发布2022-03-29实施福建省市场监督管理局发布I 4 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草1GB/T6682分析实验室用水规DNA：脱氧核糖核酸（DeoxyriboPCR：聚合酶链式反应（PolymerasTAE：三羟甲基氨基甲烷-硼酸-乙二胺四乙酸（Trihydroxymethylaminomethane-boricacid-5.2UL2基因特点非必需基因，在DNA复制过程中可将脱氧尿嘧啶核苷三磷酸错误插入或是胞嘧啶的脱氨基造成的尿嘧啶残基切除，保证DNA复制的正确性和顺利进行。对GenBank中登录的鸭瘟病毒（强毒株和弱毒株）的UL226.2.9引物（Primer10μmol/L。根将采集的组织（肝脏、食道粘膜假膜）经剪碎处理后，与磷酸盐缓冲液按体积比1:3的比例制成组25℃)作用20min。），6.4.5加入1/10体积的3M乙酸钠和2倍体积冰冻预冷的无水乙醇混匀后，-20℃放置1h。3以56℃30min灭活的鸭瘟强毒、弱毒病毒），瘟弱毒阳性；当待检样品出现约1019bp和42O2.9gKH2PO4将上述试剂溶于800mL水中，定容至1000mL，高压灭菌A.210%十二烷基磺酸钠溶液取10g的SDS粉末溶解在70mL水中，加热到70℃,搅拌待完全溶解后，定容到100mL，高压灭菌A.5.1配制0.5mol/L乙二铵四乙酸二钠溶液（5A.6溴化乙锭溶液置微波炉中加热至完全融化，待冷至50℃~60℃时，加溴化乙锭（EB）溶液5µL，摇匀后倒入6(资料性)电泳图鸭瘟强弱毒核酸PCR检测结果电泳图见图B.1。bp图B.1鸭瘟强弱毒核酸PCR检测结果电泳图7TAACGTCGTTTATACTGTTCCACAAGGAAGTTGCCAGTCAACCGGCTCAACGCCACGACCTTCCAGGTATTCATTGGATCACATAAGATGAATGGCTTTCTAGACAGCGGTGATGGATGGCTATATTTCAAAACACAATGCTTGCGACAATTCGGTTCCTGAGCATGCACGCCCCACAGCATAAACACTAATCCTTCCTTATTGTCATGTAACCATTGTAATACAGATTTGACTATACCAACGTCTACATGCGATCCCGGATGCCCCTTTCGTACTGTGAGGGTGGTATTTAACAACAAAACTCCAGCTTTGGCCCGGCAGCCATGATCAACAATTTTCGTCTCTGGGTAAGAGCGCCGAACGGCCGATAATATATTACGTAGGCTAGGAGGTATCCTCCGCACGCTGAATGCGAGCCCGTGAGCCTGGCCGGGTTGATGATATGGATCTTGCCCAACTATGATGACTTTTACATCACAGTACCTCGTCCATGTAAATATTTCATTTTTTGGCGGCAGGACTTCTTCGATGTCACAGCGCCGTTCATACTCAAGTAACCCCACTTCCGATTGTAGCTCTTGGTATAATACTTCCCGCCAAGCATCGCCAATACAATAATCGCCGCTCAATTTTTCCGGACTATTAAACCACGAAGGCGCGACCTCACCGCGACCGCTGCTGTTCGACGTCTGAGGTTGTTGTGCTATACCGCCCCCACAGGCAACGAAACCCGCTGGCGCACCACAAGGCCTGCGTCGTTTCGGCGCCTGGGACGGAGACGGGAGCCTATCGTCGGCCGGGTTCACTTTTGTCATGTCTTCGGCCATATCTCGAGTCTGGATCGAATGCATAACGGATGCTGGCCTGAGGGTCTTTCATATTCGCGTTTCCGTGGCAGGTTCTGTCATTTGTAACGTCGTTTATACTGTTCCACAAGGAAGTTGCCAGTCAACCGGCTCAACGCCACGACCTTCCAGGTATTCATTGGATCACATAAGATGAATGGCTTTCTAGACAGCGGTGATGGATGGCTATATTTCAAAACACAATGCTTGCGACAATTCGGTTCCTGAGCATGCACGCCCCACAGCATAAACACTAATCCTTCCTTATTGTCATGTAACCATTGTAATACAGATTTGACTATACCAACGTCTACATGCGATCCCGCTGGCGCACCACAAGGCCTGCGTCGTTTCGGCGCCTGGG