输血科试剂性能验证操作规程

输血科试剂性能验证操作规程1、目的本文件规定了输血科所用重点试剂性能验证的相关操作程序，以确保输血科试验的质量，使检验结果更准确。2、适用范围本文件适用于输血科ABO血型、RhD血型、盐水交叉配血、凝聚胺交叉配血、柱凝胶法血型鉴定及交叉配血，新生儿溶血筛查试验，抗人球蛋白试验等试验项目检验过程的质量控制管理。3、职责输血科技术人员负责本实验室所用试剂质量的管理。4、内容:4.1ABO试剂红细胞性能验证4.1.1外观检查:参照质量标准要求，逐项肉眼观察并记录。试管法检测的试剂红细胞浓度为3％～5％（其他浓度应标注对应的适用方法）。试剂红细胞要求外观无溶血，使用效期大于3个月。4.1.2抗原特异性和抗原强度检测:(1)材料和试剂:待检红细胞;抗A、抗B试剂血清。(2)方法:将试管排成5排。第1、2排每列9支，每管加生理盐水0.2ml,在前两列第1管分别各自加0.2m1抗A、抗B血清，倍比稀释，做好标识；后3排每排3个试管，标记抗A、抗B，抗D加入对应抗体1滴，再分别加入A、B、O试剂红细胞悬液1滴；置于室温孵育15分钟，3400转/分离心15秒，肉眼观察。(3)结果:A型红细胞至少应与1:128倍稀释以上的抗A出现明显肉眼可见凝集，与抗B、抗D不反应；B型红细胞应至少应与1:64倍稀释的抗B出现明显肉眼可见凝集，与抗A、抗D不反应。4.1.3抗原亲和力检测:(1)材料和试剂:待检红细胞;抗A、抗B试剂血清、玻片。(2)方法:亲和力：将抗-A、抗-B血型试剂分别与红细胞悬液于玻片上混匀，摇晃观察凝集。（3）结果：抗-A血型试剂与A1、A2、A2B血型红细胞出现凝集的时间应分别不长于15s、30s、45s；抗-B血型试剂与B血型红细胞出现凝集的时间应不长于15s；且在3min内凝集块应达到1mm²以上。4.2抗A、抗B试剂血清性能验证:4.2.1外观检测：要求无浑浊、无污染，颜色符合常规标准。4.2.2抗A、抗B特异性及抗体效价检测:(1)材料和试剂:待检血清，A1，A2、B型试剂红细胞(5%)(2)方法:按每列9支试管排成3列，每管加生理盐水0.2m1,将血清倍比稀释，加入相应的试剂红细胞悬液0.2ml,同时做红细胞悬液对照。领取置于室温孵育15分钟，3400转/分离心15秒，肉眼观察。(3)结果:效价：抗-A对A1细胞效价应不小于1:128，对A2细胞应不小于1:32，与B细胞不反应，抗-B效价应不小于1:128，与A细胞不反应。4.2.3抗A、抗B抗体亲和力检测:(1)材料和试剂:试剂红细胞;抗A、抗B试剂血清、玻片。(2)方法:亲和力：将抗-A、抗-B血型试剂分别与红细胞悬液于玻片上混匀，摇晃观察凝集。（3）结果：抗-A血型试剂与A1、A2、A2B血型红细胞出现凝集的时间应分别不长于15s、30s、45s；抗B血型试剂与B血型红细胞出现凝集的时间应不长于15s；且在3min内凝集块应达到1mm²以上。4.2.4抗A、抗B试剂血清冷凝集素和不规则抗体测定。(1)材料和试剂:待检血清;抗筛细胞3例;B型试剂红细胞3例(测抗A用);A型试剂红细胞3例(测抗B用)，配制3%-5%悬液;抗人球蛋白。(2)方法:取试管排成3列，每列3支。在管中加待检血清0.1mL,再分别加入5%抗筛细胞（3支细胞的混合）0.1mL，第1列放置于37°C,孵育1小时，做抗人球蛋白实验。第2列放置于4°C,第3列放置于20°C,均孵育1小时，肉眼观察结果。以B型红细胞悬液取代抗筛细胞测定抗A,以A型红细胞悬液取代抗筛细胞测定抗B。(3)结果:全部试管均不得出现凝集或溶血反应，以及缗钱状、冷凝集、细菌性凝集和理化凝集等非特异性凝集。4.3.1质控频率:每批1次，每次随机抽检1盒检测。4.3抗D试剂血清性能验证4.3.1物理检查:参照质量标准要求，逐项肉眼观察并记录。4.3.2抗D试剂血清抗体效价检测:(1)材料和试剂:待检血清，Rh(D)阳性试剂红细胞(2%--5%).(2)方法:按每列9支试管排成2列，每管加生理盐水0.2m1,将血清倍比稀释，加入相应的试剂红细胞悬液0.2ml,同时做红细胞悬液对照。置于18--22°C孵育15分钟，3400转/分离心15秒，肉眼观察。(3)结果:抗体效价以产生“+”凝集的待检血清最高稀释度计算,不计红细胞悬液体积。两列试管终点相同作为待检血清凝集效价，并应符合以下要求：如两列终点相差一管，且效价均符合要求，则以凝集效价低的为终点;如两列终点相差一管，有一列效价不符合要求，则取双倍量待检血清复试。(4)抗体效价质量要求:抗D效价不应低于128。4.3.3抗D试剂血清特异性和亲和力检测:(1)材料和试剂:待检血清;RhD阳性（R1R1）和阴性试剂红细胞(2%-5%)。(2)方法:按每列5支试管排成2列，各管加待检血清0.lml，在各试管中分别加入RhD阳性和阴性试剂红细胞0.1mL同时做红细胞悬液对照。置于18-22°C孵育15分钟，3400转/分离心15秒，肉眼观察。亲和力实验参考4.2.3.(3)结果:待检血清应与RhD阳性试剂红细胞发生凝集，而与RhD阴性试剂红细胞不发生凝集，与R1R1细胞亲和力应不大于20s。4.4抗人球蛋白卡和筛选红细胞的性能验证4.4.1物理检查:参照质量标准要求，逐项肉眼观察并记录。4.4.2方法:用已知的弱抗血清检测，同时做阴性对照。具体操作执行输血科相关检验项目的标准操作规程。4.5、凝聚胺试剂的性能验证4.5.1物理检查:参照质量标准要求，逐项肉眼观察并记录。4.5.2方法: