金银花组织培养育苗技术规程DB41-T 2188-2021

ICS65.020.01

CCSB30

41

河南省地方标准

DB41/T2188—2021

金银花组织培养育苗技术规程

2021-10-19发布2022-01-18实施

河南省市场监督管理局发布

DB41/T2188—2021

目次

前言.................................................................................II

1范围...............................................................................1

2规范性引用文件.....................................................................1

3术语和定义.........................................................................1

4设施设备...........................................................................1

5组织培养...........................................................................2

6温室驯化...........................................................................3

附录A（资料性）培养基成分...........................................................4

I

DB41/T2188—2021

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定

起草。

本文件由河南省农业农村厅提出并归口。

本文件起草单位：河南科技学院、封丘县金银花产业协会、安阳市农产品质量安全检测中心、河南

大学、新乡市正源农业科技有限公司、封丘县尔玉中药材有限公司。

本文件主要起草人：李勇超、杨靖、赵元增、王广军、王秀平、宋琳琳、李明亮、孙海燕、赵航、

李正晗、姚自动、王峰。

II

DB41/T2188—2021

金银花组织培养育苗技术规程

1范围

本文件规定了金银花组织培养育苗的术语和定义、设施设备、组织培养和温室驯化。

本文件适用于金银花组织培养育苗。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

LY/T1882—2010林木组织培养育苗技术规程

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

金银花

忍冬科植物忍冬（LonicerajaponicaThunb.）。

3.2

组织培养

在无菌条件下，将离体的植物器官、组织、细胞以及原生质体，在人工培养基和人工控制的环境中，

使其再生新植株的过程和技术。

3.3

外植体

用于植物组织培养的离体植物器官、组织、细胞以及原生质体。

3.4

初代培养

在组织培养过程中,最初建立的外植体无菌培养阶段。

3.5

继代培养

将初代培养获得的茎段或愈伤组织，通过分离切割接种在新的培养基中，从而获得大量无菌幼苗的

培养阶段。

4设施设备

4.1组织培养设施设备

4.1.1基本要求

组织培养室选址应环境清洁，远离微粒和烟雾等污染源，水电供应充足，交通运输便利。

1

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组织培养室包括洗涤室、灭菌室、培养基配制室、缓冲室、无菌接种室和无菌培养室等。

4.1.2洗涤室设备

配备自动或半自动洗瓶机、水槽、收纳箱、量瓶架等。

4.1.3灭菌室设备

配备高压蒸汽灭菌锅、器械消毒器、紫外线灯、烘干箱、微孔过滤器等。

4.1.4培养基配制室设备

配备电子天平（0.0001g,0.01g）、酸度计、微波炉、冰箱等。

4.1.5缓冲室设备

配备衣帽柜、风淋装置等。

4.1.6无菌接种室设备

配备超净工作台、器械消毒器、酒精灯等。

4.1.7无菌培养室设备

配备培养架、紫外灯、臭氧发生器、空气加湿器、除湿机、时控装置等。

4.2温室驯化设施设备

日光温室，配备温湿度调节装置、光照控制装置、灌溉设备、栽培床、穴盘等。

5组织培养

5.1外植体取材与灭菌

5.1.1外植体取材

选取生长健壮、无病虫害的金银花当年生嫩枝，截取长度为0.5cm～3cm的芽段，每个芽段包含1～

3个腋芽。

5.1.2外植体处理

将截取的芽段置于1%中性洗涤剂中浸泡10min，再用自来水冲洗30min。

5.1.3外植体灭菌

在超净工作台内，将处理过的芽段置于无菌培养瓶中，加入2.5%次氯酸钠（按有效氯计）溶液浸泡

20min，再用灭菌蒸馏水冲洗4次，以获得无菌的外植体用于接种。

5.2培养基成分

芽段初代培养与继代培养所需培养基成分见附录A，培养基pH5.8。

5.3外植体的接种

将经过灭菌的芽段置于超净工作台内，无菌接种。

2

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5.4初代培养

外植体接种于300mL～650mL培养瓶中，每瓶分装培养基高度1.0cm～1.5cm，每10mL培养基接

种1个芽段。置于无菌培养室中培养20d～30d。

培养室设置光照强度2000lx～3000lx，光照时间14h/d，湿度60%，温度25℃±2℃。

5.5继代培养

将初代培养获得的不定芽分割成1cm3的不定芽块，按5.4的方法接种培养，扩繁获得大量的不定芽

块。

5.6生根培养

从继代培养获得的不定芽块中分离高度≥2cm的健壮不定芽，按5.4的方法接种培养，其中光照强

度设置为3000lx。获得根芽齐全的金银花无菌幼苗。

6温室驯化

6.1将根芽齐全的无菌幼苗带瓶转移至温室中，日光锻炼5d～7d，然后开瓶锻炼3d～5d，及时加水

保湿。

6.2将锻炼好的幼苗从培养瓶中取出，用自来水冲洗根部10min，洗净根系附着的培养基，置于适宜浓

度的农用杀菌剂中，浸泡处理，然后定植于珍珠岩基质的穴盘中，喷水保湿。

3

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A

A

附录A

（资料性）

培养基成分

金银花组织培养培养基成分见表A.1。

表A.1金银花组织培养培养基成分表

初代培养基继代培养基生根培养基

培养基成分

mg/Lmg/Lmg/L

硝酸铵NH4NO316501650825

硝酸钾KNO319001900950

磷酸二氢钾KH2PO417017085

七水硫酸镁MgSO4•7H2O370370185

二水氯化钙CaCl2•2H2O440440220

四水硫酸锰MnSO4•4H2O22.322.322.3

硼酸H3BO36.26.26.2

无机成分

七水硫酸锌ZnSO4•7H2O8.68.68.6

碘化钾KI0.830.830.83

二水钼酸钠Na2MoO4•2H2O0.250.250.25

五水硫酸铜CuSO4•5H2O0.0250.0250.025

六水氯化钴CoCl2•6H2O0.0250.0250.025

乙二胺四乙酸二钠Na2EDTA•2H2O37.337.337.3

七水硫酸亚铁FeSO4•7H2O27.827.827.8

肌醇Myo-inositol100100100

盐酸硫胺素ThiamineHCl0.10.10.1

维生素

盐酸吡哆醇PyridoxineHCl0.50.50.5

烟酸NicotinicAcid0.50.50.5

氨基酸甘氨酸Glycine222

萘乙酸NAA0.10.050

植物生长调节物质六苄基腺嘌呤6-BA1.01.00.1

吲哚丁酸IBA001.5

活性炭ActiveCarbon300000

附加物蔗糖Sucrose300003000030000

琼脂Agar400040004000

4

DB41/T2188—2021

目次

前言.................................................................................II

1范围...............................................................................1

2规范性引用文件....................................