DB54T 0408-2024 羊肚菌菌种生产技术规程

ICS65.020.2054CCSB0554西 藏 自 治 区 地 方 标 准DB54/T0408—2024羊肚菌菌种生产技术规程2024-09-15发布 2024-10-15实施西藏自治区市场监督管理局  发布DB54/T0408DB54/T0408—2024PAGE\*ROMANPAGE\*ROMANII目 次前 言 II范围 1规范性引用文件 1术语和定义 1菌种生产要求 1母种生产 2原种生产 3栽培种生产 3生产档案 4附录 A （规范性）检验要求 5前 言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部标准化文件的结构和起草规则》的规起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由西藏自治区农牧科学院提出。本文件由西藏自治区农业农村标准化技术委员会归口。本文件起草单位：西藏自治区农牧科学院蔬菜研究所、西藏自治区高原生物研究所。本文件主要起草人：谢荣、徐爱国、张君丽、白玛旦增、孙慧娟、高磊、朱雪峰、王文海。DB54/T0408DB54/T0408—2024PAGEPAGE1羊肚菌菌种生产技术规程范围本文件规定了羊肚菌菌种母种、原种、栽培种生产技术要求及生产档案。本文件适用于羊肚菌母种、原种和栽培种生产技术。规范性引用文件（包括所有的修改单）适用于本文件。GB5749 生活饮用水卫生标准GB50073 洁净厂房设计规范GB/T12728 食用菌术语NY/T528 食用菌菌种生产技术规程NY/T1731 食用菌菌种良好作业规范NY/T1742 食用菌菌种通用技术要求NY/T1935 食用菌栽培基质质量安全要求术语和定义GB/T12728界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3.1羊肚菌子囊菌亚门、盘菌纲、盘菌目、羊肚菌科、羊肚菌属统称。菌种生产要求场地、厂房要求选择地势高，通风供电良好，给排水通畅，交通便利场地。易清洗。场地、厂房符合GB50073和NY/T528相关规定。水质符合GB5749相关规定。生产设备温培养箱、培养架等常规接种器具齐全。母种生产菌种来源从有相应资质的供种单位引进，选择种性稳定、抗逆性强且适宜本地栽培的菌株，菌种质量应符合NY/T1742的规定。培养基配方马铃薯20%，葡萄糖2%，琼脂2%，蛋白胨0.05%，水1000ml。容器试管选用15mm×150mm或者18mm×180mm；培养皿选用直径9cm玻璃培养皿或一次性无菌塑料培养皿。培养基配制马铃薯去皮、去芽眼、切块后，煮至酥而不烂，8层纱布过滤，加入葡萄糖、蛋白胨、琼脂，用玻璃棒搅拌均匀，定容至1000ml。分装和灭菌斜面培养基分装和灭菌分装培养基至试管长1/4处，用棉塞（棉花为梳棉，非脱脂棉）或硅胶塞封口，每7支试管为1把，0.11MPa～0.12MPa，温度121℃～122℃，灭菌20min～30min。结束后冷却至60℃，戴隔热手套取出试管，在超净工作台上摆斜面，斜面长度不超过试管长度的2/3，自然降温凝固后抽取5%的试管，于28℃下培养48h，无菌落长出为灭菌合格。平板培养基分装和灭菌培养基装入500ml三角瓶高1/3～1/2处，用棉塞（棉花为梳棉，非脱脂棉）或硅胶塞封口，牛皮纸122℃，灭菌20min～30min。结束后冷却至皿面积的2/3。接种30min5mm菌块到转接试管斜面和培养皿中央，整个过程按照NY/T528规定严格无菌操作，培养皿需石蜡封口膜密封。贴好标签并做好记录。培养生化培养箱10℃～12℃恒温培养NY/T17313d5d后分别进行检查。贮存培养好的母种应置于2℃～4℃冰箱保存，时长不超过3个月。原种生产原料选择主料小麦、辅料麸皮、谷壳、棉籽壳、生石灰、石膏、腐殖土应符合NY/T1935的相关要求，水质应符合GB5749的规定。培养基配方——青稞或小麦粒68%、棉籽壳20%、麸皮10%、生石灰1%、石膏1%。培养基制备青稞或小麦粒预先用3%生石灰水浸泡2～3均匀，含水量以手紧握培养基指缝有水溢出不下滴为宜，pH值8.0～8.5。装袋和灭菌采用规格13cm×25cm×0.005cm聚丙烯折角单口开菌袋，培养基在4h内装完，袋料上紧下松、料面0.11MPa～0.12MPa3h。接种料袋冷却至30℃NY/T528严格无菌操作将母种接到原种菌包中。培养室内保持避光，每天通风2次，每次30min；温度控制在10℃～20℃，空气相对湿度控制在40%～50%，20d长满料袋。贮存培养好的原种应置于2℃～4℃保存，时长不超过50d。栽培种生产原料选择主料小麦、辅料麸皮、谷壳、棉籽壳、生石灰、石膏、腐殖土应符合NY/T1935的相关要求，水质应符合GB5749的规定。培养基配方——青稞或小麦粒90%、谷壳3%、腐殖土5%，生石灰1%、石膏1%。培养基制备原料搅拌均匀，含水量以手紧握培养基指缝有水溢出不下滴为宜，pH值7.5～8.5。装袋和灭菌采用规格17cm×23cm×0.005cm聚丙烯折角单口开菌袋，采用双冲压立式机械装袋，培养基在4h内装完，袋料松紧一致、中间打孔、料面平整，袋口用颈环、套盖及无棉盖体封口。温度121℃～122℃，压强0.11MPa～0.12MPa，高温高压灭菌3h。接种冷却至30℃NY/T528严格无菌操作将原种接到栽培种菌包中。培养室内保持避光，每天通风2次，每次30min；温度控制在10℃～20℃，空气相对湿度控制在40%～50%。贮存培养好的栽培种应置于2℃～4℃保存，时长不超过50d。生产档案建立生产档案，对每批次生产的母种、原种和栽培种长势情况详细记录。档案保存期不少于2年。附录 A（规范性）检验要求表1 羊肚菌母种感官要求项目要求容器洁净、完整、无损棉塞或硅胶塞干燥、整洁、松紧适度、能透气滤菌培养基装入量试管总容积1/4,培养皿高的1/3～1/2菌种外观菌丝生长量长满斜面或平板菌丝体特征洁白、绒毛状、有少量淡黄色菌核菌丝体分泌物无菌落边缘整齐杂菌菌落无虫（螨）体无斜面或平板背面外观培养基无干缩，颜色均匀，无暗斑气味羊肚菌特有的清香味、无异味表2 羊肚菌原种和栽培种感官要求项目要求容器洁净、完整、无损