辣椒疫霉病与炭疽病抗性评价技术规程

1辣椒疫霉病与炭疽病抗性评价技术规程本文件规定了辣椒不同品种对辣椒疫霉病与炭疽病的抗性评价中的术语与定义、培养基、接种体制备和供试辣椒处理、接种、抗病性调查、抗性水平鉴定等内容。本文件适用于内蒙古地区辣椒不同品种对辣椒疫霉病与炭疽病的抗性评价。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB16715.3瓜菜作物种子第3部分：茄果类3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1辣椒疫霉病pepperphytophthorablight主要由辣椒疫霉菌（PhytophthoracapsiciLeonian）引起的病害，在植株的根、茎、叶、果都可发病，引起植株地上部茎叶凋萎、近地面茎部或分叉处变褐、果实腐烂等症状，是日光温室辣椒生产上的毁灭性病害。3.2辣椒炭疽病pepperanthracnosedisease又称辣椒轮纹病，主要由半知菌亚门的刺盘孢属（Colletotrichumsp.）引起的真菌性病害，病斑圆形或不规则形，边缘黑褐色，内部凹陷，灰褐色或灰黑色，后期着生小黑点，病健交界明显，天气干燥时，病部干缩变薄成纸状且易破裂。4培养基V8琼脂培养基（辣椒疫霉产孢培养基）：V8汁200mL，CaCO32g，琼脂15g，蒸馏水800mL。PDA培养基：200g去皮马铃薯切成小块，加水煮20~30分钟，纱布过滤后加入葡萄糖20g，琼脂粉20g，补足水分至1000毫升115℃)灭菌20分钟。5接种体制备和供试辣椒处理5.1病原物分离2从发病植株典型的病斑上采用组织分离结合单孢纯化法分离病原物。分离物经形态学鉴定确认为辣椒疫霉（PhytophthoracapsiciLeonian）或辣椒炭疽病（Colletotrichumsp.）后，经致病性测定后保存备用。5.2接种体的繁殖和制备接种前进行病原物接种体的繁殖，常用繁殖方法为接种到V8（疫霉病菌）或PDA（炭疽病菌）上，于25℃±1下培养7d，在28℃下日光照射48h诱发孢子囊，炭疽病菌可直接在PDA黑暗培养产生孢子。待培养基平板上产生大量孢子囊后加入无菌水，用玻璃或毛笔刮动平板培养基收集菌丝和孢子囊。将收集的培养物置于5℃下30min，然后置于室温下诱发游动孢子的形成和释放。两层纱布过滤后得到孢子悬浮液，用蒸馏水稀释至所需浓度5.3供试辣椒处理供试的辣椒种质资源质量符合GB16715.3，种子表面消毒后催芽，出芽后种植，按照常规种植方法进行水、肥、虫管理，种植后70d辣椒采收前3-4周灌根法接种疫霉病菌，或采集成熟辣椒果实用于炭疽病的试验接种。6接种6.1辣椒疫霉病：用灌根接种法接种，在距离幼苗根基部3cm直径范围内扎深度4cm孔，用移液枪注入4mL孢子悬浮液。每份种质材料接种10株，接种无菌水的幼苗作为空白对照。接种后的温度和湿度分别控制在25~28℃和75%以上，接种7d后统计发病情况。6.2辣椒炭疽病：用无菌接种针在辣椒果实中上部刺1mm左右深度伤口，然后在伤口处接1μL孢子悬浮液。每个辣椒种质资源接种6-10个果实，辣椒接种后继续在温室中培养，保持温室的白天温度为25℃,相对湿度60%以上。观察接种7d后的发病情况，并记录病斑直径及发病率。评价不同辣椒种质资源的抗病性。7病情调查7.1疫霉病菌：接种7d后调查发病情况，并对辣椒疫霉病分级。——0级：无病症；——1级：幼苗根茎部轻微变黑，叶片不萎缩或可恢复性萎蔫；——2级：幼苗根茎部变黑达1～2cm，叶片不可恢复性萎蔫，下部叶片偶有脱落；——3级：幼苗根茎部变黑超过2cm，叶片明显萎缩或落叶明显；——4级：幼苗根茎部变黑缢缩，除生长点外全部落叶或植株萎蔫；——5级：整个植株枯死。7.2辣椒炭疽病接种7d后调查发病情况，并对辣椒炭疽病分级——0级，无病斑；——1级，果面有水浸状病斑，病斑直径≤2cm；——2级，果面有水浸状病斑，2cm＜病斑直径≤4cm；——3级，果面上水浸状病斑已严重变软，病斑直径＞4cm；——4级，果面上的水浸状病斑已完全或几乎覆盖果实表面。公式：病情指数=∑（各级病果数×相对级值）/（每处理调查颗数×调查最高级值）×100；8抗性水平鉴定8.1辣椒疫霉病抗性评价划分病情指数（DI）=[∑(病级数值×该病级病株数)×100]/(病级最高值×调查株数)根据病情指数将抗性划分为4个等级。——高抗（HR）：0<DI≤10；——中抗（MR）：10<DI≤30；——中感（MS）：30<DI≤50；——高感（HS）：DI＞50。8.2辣椒炭疽病抗病性划分标准：——