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文档简介
。可用于样品的制备、纯度鉴定、分子量测定等。(AGEμg(TEMED)TEMED催化下,过硫酸铵可使丙烯酰胺单体的双键SDSSDS和巯基乙醇后,巯基乙醇可使蛋白质分子中的二硫键还原;SDS能使蛋白质的非共价键(氢键、疏水键)SDS复合物。由于SDS带有大量负电荷,当它与蛋白质结合时,所带的负电荷的量大大超过蛋白SDS与蛋白质结合后,还引起了蛋白质构象的改变。蛋白质-SDS复合物在水溶液中的SDS复合物的短轴长度都一样,而长轴则随蛋白质相对分子质量的大小成正比地变化。这样的蛋白质-SDS复合物在凝胶中的迁移蛋白转膜组装顺序(三明治制作转膜夹黑色面(负极)-(正极(1)SDS-12(1)SDS-12%分离胶浓度,10ml30%凝胶贮液10%SDS10%0.6空气,是胶面平整30分钟凝胶完全聚合,用滴管吸去分离胶胶面的水封层,并用无TEMED要在注胶前再加4.5%分离胶浓度,5ml 30%凝胶贮液10%SDS10%30%凝胶贮液10%SDS10%3.00.3TEMED的加入量,混匀后用细长头的滴管将凝胶溶液加到以聚合10μl与“5×样品溶解液”40μl混合(做两份样品100℃沸2~3min,取出冷至室温。15~20mA,待样品进入2小时。1小时。另一块凝胶板中的凝胶用于转膜。染色完毕,倾出染色液,加入脱色液。20~30min换一次脱色液,2~3次后可初步观3张缓冲液浸湿的滤纸上,盖上经甲醇激活(15-30sec)PVDF膜(切多余的膜及纸,与凝胶一样大小)3张缓冲液浸湿的滤纸,排气泡。33用塑料夹夹紧,放入转移电泳仪,电泳槽搁置冰上,恒压1小时。 PVDFTBST1h牛血样品样品样品样品牛血在上图中,X?(cm)marker到起始线之间的距离,L(cm)123、凝胶浓度的选择:根据待测样品估计的相对分子量,选择凝胶浓度。Mr25000~2000005%的凝胶;Mr10000~70000的蛋白质选用终15%的凝胶;在此范围内样品的相对分子量的对数与迁移率呈直线关系。4SDS的作用下解离在上图中,X?(cm)marker到起始线之间的距离,L(cm)123、凝胶浓度的选择:根据待测样品估计的相对分子量,选择凝胶浓度。Mr25000~2000005%的凝胶;Mr10000~70000的蛋白质选用终15%的凝胶;在此范围内样品的相对分子量的对数与迁移率呈直线关系。4SDS的作用下解离Mr及分子中肽链
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