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文档简介
34RapiddetectionofPseudomonasaeruginosainpackageddrinkingwater—ColloidalgoldimmunochromatographicaI.本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起1包装饮用水中铜绿假单胞菌快速检测胶体金免疫层析法GB/T6682分析实验室用水规格和GB8538食品安全国家标准饮用天然矿样品中的铜绿假单胞菌经滤膜过滤富集，超声处理提取DNA，以此为模板，设计经异硫（FITC）和生物素（biotin）修饰的上下游引物，通过聚合酶链式反应（PCR）得到扩增导致T线颜色加深，通过T线与控制线（C线）颜色比较，5.3三羟甲基氨基甲烷（Tris）。5.5乙二胺四乙酸二钠（EDTA-2Na•2H2O）。5.6氢氧化钠溶液（NaOH）。2典型菌落，接种到营养肉汤（5.13）中，37℃±1℃培养18h～20h，至活菌数达到1×1085’-FITC-ACCGCCGTCAGAATCAGTTT-3’。6.2过滤装置。6.3微量移液器。6.4旋涡混合器。6.7无菌滤膜：直径47mm，微孔径为0.45μm。6.9离心机：离心转速≥5000rpm。将250mL待检水样通过孔径0.45μm的无菌滤膜（6.7）过滤，滤膜备用。以无菌水作为空白对7.2DNA提取将7.1得到的滤膜置于无菌瓶底部，加入1mL的TE缓冲溶液（5.9）重悬，超声后将瓶中溶液转移到1.5mL离心管中，5000rpm室温离心5m7.3PCR扩增μL，ddH2O（5.11）8.9μL。混匀后进行PCR扩增，扩增7,4测定3取7.3得到的扩增产物2μL，滴加在胶体金免疫层析检测试纸条（6.11）上，再滴加48μL上样缓冲液（5.12）于样品垫上，静置3min，观察T线和C线显色情8.2阴性8.3阳性8.4参比标准检测结果为阳性时可采用参比标准GB8539性能指标49.3特异性9.4假阴性率9.5假阳性率9.6定性方法性能指标计算方法5N12N21N22N2.=N21+N22N.2=N21+N22N=N1.+N2.或N.1+N.2显著性差异(х2）x2=（|N12-N21|-1）2/（N12+N21p-=N22
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