DB34∕T 3737-2020 大豆品种耐旱性与耐热性评价体系技术规程　

DB34/T3737—2020大豆品种耐旱性与耐热性评价体系技术规程本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定工每盆装土和沙8kg～9kg。播前用1%次氯酸钠浸泡大豆种子1min～2min,纯水冲洗3～5次，于2后的土壤含水量范围为15.0%～20.0%,以形成有效的干旱胁迫效应，对照土壤含水量控制在处理前按正常田间管理，于大豆始花期(R1期)每天上午10:00至下午16:00连续7天塑料大围为40.0℃~45.0℃(通过升降塑料薄膜的覆盖高度调控处理温度),棚内湿度控制在50.0%～75.0%利用邻甲氧基苯酚(愈创木酚)显色法检测分析(参见附录D)。大豆收获期间，每种材料(处理和对照)考察10个单株的株高(cm)、单株荚数(个)、单株粒数(粒)、单株粒重(g)、百粒重(g)、籽粒饱满度(饱满/皱缩)等产量组分及性状。36田间管理6.1在进行大豆品种耐旱性与耐热性鉴定期间，要及时防治病、虫、草和鸟害，防止倒伏等不利情况6.2防止病虫草害使用农药等药品按GB/T8321(所有部分)的规定执行。7耐旱性和耐热性评价体系分级标准7.1耐旱性评价体系标准时运用隶属函数值对各主成分得分值进行标准化，获得一个大豆响应干旱胁迫进行聚类分析(SPSS19.0)。7.1.2大豆响应干旱胁迫综合值(D)按公式(1)计算：Pi——主成分分析中每个主成分的特征值。表1大豆抗旱性评价体系分级标准聚类分析结果抗旱性等级耐旱型IV级较耐旱型III级中间型II级较敏感型D<0.20(或植株枯死)I级敏感型7.2耐热性评价体系标准7.2.1以花粉活力作为主要指标，结合相关渗透调节物质、保护酶活性和产量组分等生理指主成分分析(SPSS19.0),同时运用隶属函数值对各主成分得分值进行标准化，从而获得一个大豆响47.2.2大豆响应热胁迫综合值(H)按公式(2)计算：nnU(xi)——通过隶属函数方法分析在主成Pi——主成分分析中每个主成分的特征值。表2大豆耐热性评价体系分级标准聚类分析结果耐热型IV级III级中间型II级I级敏感型5(资料性)将处理组和对照组叶片用去离子水冲洗2次，再用洁净滤纸吸净表面水分。用6mm～8mm打孔器避开主脉打取叶圆片(或切割成大小一致的叶块),每组叶片打取叶圆片30片，分装在3支洁净的刻度试管中，每管放10片。在有叶片的各管中加入10mL的去离子水，并将大于试管口径的塑真空泵抽气10min(也可直接将叶圆片放入注射器内，吸取而的去离子水，堵住注射器口进行抽气)上试管置室温下保持1h,其间要多次摇动试管，或者将试管放在振荡器中振荡1h。1h后将各试管以杀死植物组织。取出试管后用自来水冷却至室温，并在室温下平衡10min,摇匀，用电导仪测其终电导值(S₂)。按公式(A.1)计算相对电导率：RC——相对电导率(%);6(资料性)相对含水量检测分析首先对胁迫处理后与对照样本叶片称鲜重(叶片鲜重FW),之后将其放入盛水的培养皿中(水量占培养皿2/3),浸泡24h后用吸水纸将其叶面水擦干，称其饱和鲜重(SFW),FW与SFW均在室温下测定，温度25℃,湿度60%～70%,之后将所有样品放入烘箱，105℃杀青30min,再置于80℃烘干24h(烘干至恒重),冷却至室温后称其干重(DW)。按公式(B.1)计算相对含水量：RWC(%)=(FW-DW)÷(SFW-DW)×100%…………(B.1)FW——叶片鲜重(g);SFW——饱和鲜重(g);7DB34/T3737(资料性)超氧化物歧化酶(SOD)活性按每克(叶片鲜重FW)大豆新鲜叶片加入3mL0.05mol/LpH7.8磷酸钠缓冲液，加入少量石英砂，于冰浴中的研钵内研磨成匀浆，定容至5mL刻度离心管中，于8500r/min(10000g)冷冻离心30min,上清液即为SOD酶粗提液。每个处理取8个洗净干燥好的微烧杯编号，按计算好的量加入各试剂及酶液，反应系统总体积为3mL。其中4-8号杯中磷酸钠缓冲液量和酶液量可根据试验材料中酶液浓度及酶活力进行调整(如酶液浓度大、活性强时，酶用量适当减少)。各试剂全部加入后，充分混匀，取1号微烧杯置于暗处，作为空白对照，比色时调零用。其余7个微烧杯均放在温度为25℃。光强为4500Lux的光照箱内(安装有3根20W的日光灯管)照光15min。然后立即遮光终止反应。在560nm波长下以1号杯液调零，测定各杯液光密度并记录结果。以2、3号杯液光密度的平均值作为抑制NBT光还原率100%,根据其他各杯液的光密度分别计算出不同酶液量的各反应系统中抑制按公式(C.1)计算超氧化物歧化酶活性：A[U/(g(FW)/h)]=(V×1000×60)÷(B×W×t)…A——酶活力(酶活力单位：U/(g(FW)/h));V——酶提取液总体积(mL);B——一个酶活力单位的酶液量(uL);W——样品鲜重(g);t——反应时间(min);1000——换算系数，即1ml=1000uL;60——换算系数，即1h=60min。8取处理组与对照组大豆植株叶片1g(叶片鲜重FW),剪碎置于研钵中，加5mL0.1ml/LTris-HCl缓冲液(pH8.5),研磨成匀浆，以4000r/min离心5min,倒出上清液，必要时残渣再用5mL缓酶活性过高可稀释),再加入反应混合液3mL,立即开启秒表记录时间：而向另一比色杯中加人0.2P=过氧化物酶(POD)活性(U/(g·m0.01——Aa₇om每下降0.01为1个酶活单位(U);t——反应时间(min)。94000r/min,离心15min,上清液即为过氧化氢酶的粗酶液。分别取3支10mL试管中，其中2支为样品测定管(S₁,S₂),1支为空白管(S₀)(将酶液煮死),按顺序分别加入0.2mL粗酶液、pH磷酸缓冲液1.5mL和