TBWDP 0003-2022 北京市酒庄葡萄酒氨基甲酸乙酯限量及检测方法

LimitanddeterminationofEthylCarbamateinBeijing2022-10-28发布北京酒庄葡萄酒发展促进会发布Ⅰ针对目前北京市酒庄葡萄酒中氨基甲酸乙酯含量较低，葡萄酒酿造过程及葡萄酒商品中氨基甲酸乙酯含量检测标准操作繁琐等问题，我们提出此标准，简化了葡萄酒样品的前处理方法，缩短了氨基甲酸乙酯的检测时间，提高了检测效率，满足了酿酒过程以及成品酒中氨基甲酸乙酯含量的测定需求。本文件参考GB5009.223-2014，主要变化如下：——修改了样品前处理方法（前处理方法由固相萃取改为顶空固相微萃取，节省时间，提高检测效率——修改了内标物质（将内标物质由D5-氨基甲酸乙酯改为氨基甲酸丙酯，降低内标物成本——缩短了检测时间（质谱检测时间由14min缩短至6min）。建立了更加快速、高效的检测葡萄酒中氨基甲酸乙酯的气相色谱-串联质谱法，缩短质本文件所规定附录为资料性附录。本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本标准由北京酒庄葡萄酒发展促进会提出并归口。请注意本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由北京酒庄葡萄酒发展促进会提出并归口。本文件起草单位：中国农业大学、北京酒庄葡萄酒发展促进会、北京龙熙堡葡萄酒业有限公司、北京紫雾采邑酒业有限公司、北京京沃德酒庄有限公司、北京莱恩堡葡萄酒业有限公本文件主要起草人：游义琳、黄卫东、战吉宬、邓欢、谢一丁、伍天阳、周慧、李礼、刘雪玮、郝越、王明飞。本标准于2022年10月28日首次发布。1北京市酒庄葡萄酒氨基甲酸乙酯检测标准气相色谱-串联质谱法本文件规定了北京市酒庄葡萄酒中氨基甲酸乙酯的限量要求和测定方法。本文件适用于北京市酒庄葡萄酒中氨基甲酸乙酯的限量控制和含量测定方法。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4原理试样经离心，顶空固相微萃取法萃取试样，采用气相色谱-串联质谱法测定，内标法定量。5试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。5.1试剂5.1.1氯化钠（NaCl，CAS号：7647-14-5）。5.1.2甲醇（CH4O，CAS号：67-56-1色谱纯。5.2标准品5.2.1氨基甲酸乙酯标准品（C3H7NO2，CAS号：51-79-6纯度≥99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。5.2.2氨基甲酸丙酯标准品（C4H9NO2，CAS号：627-12-3纯度≥97%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。25.3标准溶液配制5.3.1氨基甲酸丙酯储备液（1.00mg/mL准确称取0.01g（精确到0.0001g）氨基甲酸丙酯标准品置于10mL容量瓶中，用甲醇溶解，定容至10mL，4℃以下保存。有效期3个月。5.3.2氨基甲酸丙酯使用液（2.00μg/mL准确吸取氨基甲酸丙酯储备液（1.00mg/mL）0.10mL，用甲醇定容至50mL，4℃以下保存。保存期1个月。5.3.3氨基甲酸乙酯储备液（1.00mg/mL准确称取0.05g（精确到0.0001g）氨基甲酸乙酯标准品，用甲醇溶解，定容至50mL，4℃以下保存。保存期3个月。5.3.4氨基甲酸乙酯中间液（10.0μg/mL准确吸取氨基甲酸乙酯储备液（1.00mg/mL）1.0mL，用甲醇定容至100mL，4℃以下保存。保存期1个月。5.3.5氨基甲酸乙酯中间液（0.50μg/mL准确吸取氨基甲酸乙酯中间液（10.0μg/mL）5.0mL，用甲醇定容至100mL，现配现用。5.3.6标准曲线工作溶液：分别准确吸取氨基甲酸乙酯中间液（0.50μg/mL5.3.5）20μL，50μL，100μL，200μL，400μL和氨基甲酸乙酯中间液（10.0μg/mL5.3.4）40μL和100μL于7个1mL容量瓶中，各加2.00μg/mL的氨基甲酸丙酯使用液（5.3.2）100μL，用甲醇定容至刻度，得到10.0μg/L，25.0μg/L，50.0μg/L，100μg/L，200μg/L，400μg/L，1000μg/L的标准曲线工作溶液，现配现用。6仪器和设备6.1气相色谱-质谱仪，带电子轰击源（EI）。6.2顶空固相微萃取全自动进样装置，带50/30μmDVB/CAR/PDMS萃取头。6.3超声波清洗机。6.4天平：感量为0.1mg和0.1g。6.5离心机：转速大于4000rpm。7分析步骤7.1试样提取移取试样5mL于试管中，4000rpm离心3min，去除酒中杂质。加入1.5g氯化钠，在超声波清洗机中超声溶解。取900μL于20mL萃取瓶中，加入2.00μg/mL的氨基甲酸丙酯使用液（5.3.2）100μL，混匀，待上机检测。7.2仪器参考条件仪器参考条件列出如下：——顶空固相微萃取：在70℃下250r/min恒温搅拌萃取45min后，在230℃下热解吸5min；——色谱柱：DB-INNWAX毛细管50m*0.25mm*0.25μm或相当色谱柱；——进样口温度：230℃;3的速度增至200℃。保持1min；然后以20℃/min的速度增至230℃,保持0.5min；——载气：氦气，纯度≥99.999%，载气流速：1mL/min；——进样方式：不分流进样；——进样量：1μL；——检测方式：选择离子监测（SIM——离子源温度：230℃;——电离模式：电子轰击源（EI电子能量为70eV；——氨基甲酸乙酯检测离子m/z62、74、89，定量离子m/z62；——氨基甲酸丙酯检测离子和定量离子m/z74。7.3定性测定按方法条件（7.2）测定标准工作溶液和试样，试样的质量色谱峰保留时间与标准物质保留时间的允许偏差小于±2.5%。7.4定量测定7.4.1标准曲线制作将氨基甲酸乙酯标准曲线工作溶液10.0μg/L，25.0μg/L，400μg/L，1000μg/L（内含200μg/L氨基甲酸丙酯）进行气相色谱-串联质谱法测定，以氨基甲酸乙酯浓度为横坐标，标准曲线工作溶液中氨基甲酸乙酯峰面积与内标氨基甲酸丙酯的峰面积之比为纵坐标，绘制标准曲线。7.4.2试样测定将试样溶液同标准曲线工作溶液进行测定，根据测定液中氨基甲酸乙酯的含量计算试样中氨基甲酸乙酯的含量，其中试样含低浓度的氨基甲酸乙酯时，适宜采用10.0μg/L，25.0μg50.0μg/L，100μg/L，200μg/L的标准曲线工作溶液绘制标准曲线；试样含高浓度氨基甲酸乙酯时，宜采用50.0μg/L，100μg/L，200μg/L，400μg/L，1000μg/L的标准曲线工作溶液绘制标准曲线。标准溶液色谱图见附录A.1。8分析结果的表述绘制标准曲线按式（1）计算：式中：Y——标准物质的峰面积；a——标准曲线的斜率；X——标准物质的浓度(μg/Lb——回归曲线的截距。4试样与标准物质同时进样分析，测定峰面积与内标峰面积的比值与标准曲线比较定量。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算数平均值表示，结果保留两位有效数字。9精密度在重复性条件下获得