DB63∕T 2291-2024 青稞育成品种DNA指纹图谱鉴别规范

DB63青海省市场监督管理局发布I本文件起草单位：中国科学院西北高原生物研究所、青海省农作物种子站、海南州农牧业综合服包天忠、李俊仁、李春桥、王健斌、赵璨、尤1标准名称本文件规定了青稞（Hordeumvulgarevar.nudumHook.f.）育成品种DNA指纹图谱采集的术语和定本文件适用于青稞育成品种DNA指纹图谱的采集GB/T3543.2农作物种子检验规程GB/T3543.4农作物种子检验规程GB4404.1粮食作物种子第1部GB/T6682分析实验室用水规格和GB/T30988多酚类植物基因组DNA提取纯化GB/T34265Sanger法通过DNA检测技术，获得由多个位点上的等位基因组成的长度不等4缩略语DNA：脱氧核糖核苷酸（DeoxyribonucleicSNP：单核苷酸多态性（SingleNucleotidePoly2PCR：聚合酶链式反应（PolymeraseChainReac见附录A。超纯水符合GB/T6682的要种子质量应符合GB4404.1的要求。按照GB/按照GB/T3543.4的规定进行发芽，发芽的籽粒数需按照GB/T30988中的DNA纯度、浓度测试将附录C中引物稀释至10µmol/L，DNA浓度稀释至100ng/μl~200ng/μl。反应体系为25µl,包含物0.5μl，TaqDNA聚合酶0.2μl，超纯3参照附录D中青稞育成品种的DNA图谱，判断所鉴定的品种是否为4A.1主要仪器设备器（2.5μl、10μl、100μl、1000μl）、微波炉、量筒、电泳装置、电泳仪、凝胶成像系统或紫外A.2主要试剂乙二胺四乙酸二纳、三羟甲基氨基甲烷、盐酸、氢氧化钠、氯化钠、十六烷基三甲基溴化铵、β-巯基乙醇、Tris-饱和酚、三氯甲烷、异丙醇、无水乙醇、10×PCR反应缓冲液、4种脱氧核糖核苷酸、TaqDNA聚合酶、琼脂糖、溴酚蓝、硼酸、二甲苯青、甘油、二甲基腈蓝FF、溴化乙锭。5溶液配制B.1.10.5mol/L乙二胺四乙酸二纳盐（EDTApH8.0）溶液定容至50ml。在103.4kPa（121℃)条件下灭B.1.21mol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸（Tris-HClpH8称取6.06g的Tris，加40mL的超纯水，充分溶解。用1.8mL～2.2mL的浓HCl（36%~38%）准确调节pH至8.0，定容至50ml。灭菌温度和时间同B.1.1，（见B.1.2），4mLEDTA溶液（pH8.0）（见B.1.1），加超纯水充分溶解后定容至400mL。灭菌温度B.1.1），混合均匀，定容至100ml，分装后灭菌。灭菌温度和时间同），称取EDTA8.7672g，二甲苯腈蓝FF0.5g，溴酚蓝0.5g，加入360ml甘油，调节PH至7.0，再用在100ml超纯水中加入1g溴化乙锭，磁力搅拌数小时确保其完全溶解，棕色瓶室温6F:GACACCGGCATGGACATR:ACCGCAAGGATAGTAGACR:CCTTTCACTATTATTGC7福8-4奠多吉1号门农1号东青1号同德系选8号互青2号北青1号北青4号北青5号北青6号北青7号北青3号昆仑1号昆仑2号昆仑3号昆仑8号昆仑10号昆仑12号昆仑164S502产监88繁34-202产监88繁3102产监91-4102品比17区91-88-5-4-102品比7区92-322002年93H2-28-202产监98006(兰)C02品比1区911-71喜马拉雅4号康青1号康青3号康青6号甘