DB63∕T 2288-2024 青稞品种鉴定技术规程 SNP分子标记法

DB63青海省市场监督管理局发布I李俊仁、包天忠、赵璨、王健斌、陈同睿、1青稞品种鉴定技术规程SNP分子标记法本文件规定了青稞（HordeumvalgareL.var.nudumHook.f.）品种鉴定SNP分子标记方法的术语和GB4404.1粮食作物种子第1GB/T6682分析实验室用水规GB/T30988多酚类植物基因组DNA提取纯2在实验室中从送检样品中分离出来的部分样品，供检验项4缩略语DNA：脱氧核糖核酸（DeoxyriboNucleicAcKASP：竞争性等位基因特异性PCR（KompetitiveAlPCR：聚合酶链式反应（PolymeraseChainReacSNP：单核苷酸多态性（SingleNucleotidePoly9操作程序9.1样品准备按照GB/T3543.5的规定，送检样品质量应符合GB4404.1粮食作物种子第1部分：禾谷类中对大麦种子纯度的要求。试验样品的分样应符合GB发芽的籽粒数须大于等于50粒。植株长至三叶一心时，按单株采取叶片9.2DNA样品制备备的DNA样品数量须大于等于50个单株；单提、单检。试验样品DNA纯度、浓度测试应符合GB/T309883b)依试验样品量，按照表1配制KASP基因分型混合液。配制前所有试剂均应涡旋振5118c)使用微量移液器将9.3SNP分型操作流程2）中的KASe)KASP反应在实时荧光定量PCR仪上进行，程序设置见表2。1123再按照9.3SNP分型操作流程6）进行荧光数据的读取。45A.1主要仪器设备实时荧光定量PCR仪、电子恒温不锈钢水浴锅、电子天平（精度0.01g、0.0001g各一台）、A.2主要试剂乙二胺四乙酸二纳、三羟甲基氨基甲烷、盐酸、氢氧化钠、氯化钠、十六烷基三甲基溴化铵、β-6溶液配制B.1.10.5mol/L乙二胺四乙酸二纳盐（EDTApH8.0）溶液定容至50ml。在103.4kPa（121℃)条件下灭B.1.21mol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸（Tris-HClpH8称取6.06g的Tris，加40ml的超纯水，充分溶解。用1.8mL~2.2mL的浓HCl（36%~38%）调节pH至8.0，定容至50ml。灭菌温度和时间同B.1.依次加入十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）8g、氯化钠32.7g、10mLTris（见B.1.2）和4mLEDTA溶液（pH8.0见B.1.1再加入超纯水，充分溶解后，用超纯水定容至400mL。灭菌温度和时间同B.1.1，取10mL1mol/LTris-HCl溶液（pH8.0见B.1.2）和2mL0.5mol/LE（见B.1.1），加入超纯水，混合均匀，定容至100ml。分装后灭菌，灭菌温度和时间同B.1.1，室温保7ⅠⅠPrimer_Allele[HEX]:GTTGⅠPrimer_Common:CGCTGGCAGCTCCAGGⅠⅠPrimer_Allele[HEX]:ⅠⅠⅡPrimer_Allele[HEX]:2H_2ⅡPrimer_Common:TCGTGCACGCCAAGⅡ84H_2ⅡⅡⅡPrimer_Allele[HEX]:Ⅱ2H_3Ⅱ3H_3Ⅱ4H_3Ⅱ6H_3Ⅱ7H_3ⅡⅡⅡPrimer_Allele[HEX]:2H_5ⅡPrimer_Common:CCGAAGAGCTCGGCGTⅡ9ⅡPrimer_Common:CAGGAⅡPrimer_Common:TGCTGTCCAGTTTTC6H_5Ⅱ6H_6ⅡPrimer_Common:GAAGAAGCGGCCCAAGCAⅡPrimer_Common:GAAAGTCTTCGCAAAAAGTCCG1H_12H_12H_22H_32H_53H_13H_23H_34H_1TRCTMAKCTGGTTGARCYCAKGTGGTTKARCYCAKGTGGTTKTRCYCAKGTGRTCGARCYCAKCTGGTTKARCTCAKGTGRTTGTRCYCAKSYGGTTGTRCYMAKCCGRTTGTRCYMAKSTGGTTKTRYYCAKCCGGTTGTRCYCAKGTGGTCGARCYMAKGTGGTTKTRCYCAKCCGGYCGTRCTMAGCCGGCCGTRCYCAKCCGRCCGTRCTCAKCCGGTCKTRCTCAKCCGGTCGTACTMAKCTGGTTGTRCYMAKCCGRTTGTRCTCAKCTGGTTGARCYMAKCTGRYTGTACTCAGCTGRCTGTACTCAKCTGGTTG4H_24H_34H_45H_16H_16H_26H_36H_46H_56H_67H_17H_27H_3CARGGAGCYGGGKTCAGGRARCYGRRGTCAGGRAGCYGRGTTCAGGGAGCCGGGGTCAGGGARCYGRGTTCARGGARCYGRGKTCAGGGAGYYRGGTTCAGGGAGCCGGRTTCAGGGAGCYGGGKTCAGGGAGCYGRGKTCAGGGAGCYGRGTTCAGGRAGYYGGRGTCARGRAGCYGGGKTCARGGAGCYGRGGTCARGRARCYGGGKTCMGGGAGCYGGGGTCAGGGAGCYGRGKTCAGGGARTYGGGKTCAGGGAGC