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DB12Technicalregulationofdetectionfortomatoyellowleafcurlviruscarriedbyseedsandseedlingsofsolanumfruitvegetables天津市市场监督管理委员会发布I本标准按照GB/T1.1-2009给本标准主要起草人：王勇、高苇、张春祥、杨利娟、刘晓琳、霍建飞、1茄果类蔬菜种苗番茄黄化曲叶病毒检测技术规程虱以持久方式传播，又被称为粉虱传双生病毒，是一类具有孪生颗粒形态的植物DNA病毒，广泛分布于种苗传播病害seedling-borne4.1仪器4.2.1总体要求24.2.3商用植物DNA提取试剂盒或DN4.2.4裂解缓冲液4.2.6凝胶电泳试剂琼脂糖，TAEBuffer，核酸染料GoLdeMasterMix。5测试程序5.1检测样品于1万株，如果该批种苗标记或能明显地看出该批种苗在形态或文件记录上有异质性的证据时，应拒绝5.2检测方法病毒DNA的提取可以采用商用植物DNA提取试剂盒或DNA提取试剂，按照提取步骤和方法进行，或者），）；）；3对种苗组织DNA进行PCR扩增，目的扩增片段为543bp，可对扩增产物双向测序，与GenBank中TYLCV和GenBank中相关序列进行序列相似性比对分析，以验6结果判定7样品保存茄果类蔬菜种苗样品可以其植株、幼嫩组织或DNA的形式保存，该样品需经登记后保存。番茄黄化4番茄黄化曲叶病毒（TomatoYeLLowLeafCurLVirus）简称TYLCV或TY，隶属双生病毒科（Geminiviridae）菜豆金色花叶病毒属（Beg5——TYLCV-R：5’-CCAATAAGGCGTAAGCGTGTAGAC-3’。2xTaqMasterMix12.5μL，正向和反向引物（10μmo扩增后取2μLPCR反应产物在1%的琼脂糖凝胶电泳后，置凝胶成像仪下观察DNA特异性条带。TY扩增出543bp目的片段，而对于其他的模板DNA则不能扩增出相应的片段。由此，可以根据特异543bp注：M，DL2000DNAmar

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