TSDAA 0083-2024 泰地罗新含量的测定高效液相色谱法

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由山东省畜牧协会标准化技术委员会提出并归口。本文件起草单位：山东省饲料兽药质量检验中心、山东久隆恒信药业有限公司、山东鲁抗舍里乐药业有限公司、艾美科健（中国）生物医药有限公司、齐鲁晟华制药有限公司、山东鲁抗舍里乐药业有限公司高新区分公司、齐鲁动物保健品有限公司、山东华辰生物化学有限公司、山东华辰制药有限公司、山东德州神牛药业有限公司、安池（山东）动物营养研究院有限公司、山东省蛋鸡技术创新中心。本文件主要起草人：郭玉秋、汤文利、魏秀丽、赵晓雨、赵延东、李有志、章安源、冯雪莲、武茂成、常雪、杨程程、王艳芬、梁萌、路雅兰、夏光亮。本文件是首次发布。泰地罗新含量的测定高效液相色谱法本文件规定了泰地罗新含量的测定方法-高效液相色谱法（HPLC）和超高效液相色谱法本文件适用于泰地罗新原料含量的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4原理方法一：高效液相色谱法（HPLC）。流动相溶解样品，高效液相色谱仪分离测定，依据保留时间定性，外标法定量。方法二：超高效液相色谱法（UPLC）。乙腈溶解样品，超高效液相色谱仪分离测定，依据保留时间定性，外标法定量。5试剂或材料除非另有规定，所用试剂均为分析纯；水符合GB/T6682一级水的规定。5.1乙腈（CH3CN色谱纯。5.20.1%三氟乙酸溶液：精密量取三氟乙酸1mL，加水稀释至1000mL，摇匀。5.30.05mol/L磷酸氢二钾溶液：称取磷酸氢二钾8.2g，加水溶解，并稀释至1000mL，加磷酸调pH至8.2。5.4流动相A：分别量取0.1%三氟乙酸溶液（5.2）900mL、乙腈（5.1）100mL，混匀，滤膜过滤，超声5min。5.5流动相B：分别量取0.1%三氟乙酸溶液（5.2）100mL、乙腈（5.1）900mL，混匀，滤膜过滤，超声5min。5.6流动相C：分别量取流动相A（5.4）900mL、流动相B（5.5）100mL，混匀，滤膜过滤，超声5min。25.7流动相D：量取0.05mol/L磷酸氢二钾溶液（5.3）450mL、乙腈（5.1）550mL，混匀，滤膜过滤，超声5min。5.8泰地罗新对照品：纯度≥98.0％。5.9泰地罗新对照品溶液A：精密称取泰地罗新对照品（5.8）约50mg，置50mL棕色量瓶中，加乙腈（5.1）2mL，用流动相C（5.6）溶解并稀释至刻度，精密移取1mL置10mL棕色量瓶中，用流动相C（5.6）稀释至刻度，摇匀，滤膜过滤。5.10泰地罗新对照品溶液B：精密称取泰地罗新对照品（5.8）约75mg，置50mL棕色量瓶中，加乙腈（5.1）溶解并稀释至刻度，摇匀，滤膜过滤。6仪器设备6.1高效液相色谱仪：配二极管阵列检测器或紫外检测器。6.2超高效液相色谱仪：配二极管阵列检测器或紫外检测器。6.3分析天平：精度0.0001g、0.00001g。6.4滤膜：有机，0.22µm。7样品取样品100g，混匀，装入密闭容器中，备用。8试验步骤8.1方法一：高效液相色谱法8.1.1供试品溶液制备精密称取供试品约50mg，置50mL量瓶中，加乙腈（5.1）2mL，用流动相C（5.6）溶解并稀释至刻度，精密量取1mL置10mL棕色量瓶中，用流动相C（5.6）稀释至刻度，摇匀，滤膜过滤。8.1.2参考色谱条件a)色谱柱：C18，250mm×4.6mm，5µm或等效的色谱柱；b)流速：1.0mL/min；c)检测波长：285nm；d)柱温：室温；e)进样量：10µL；f)流动相：流动相C（5.6）。8.1.3测定8.1.3.1定性以保留时间定性，供试品溶液（8.1.1）泰地罗新色谱峰的保留时间与相应对照品溶液3（5.9）泰地罗新色谱峰的保留时间一致，相对偏差应在±2.5%。8.1.3.2定量取泰地罗新对照品溶液A（5.9）、供试品溶液（8.1.1）注入高效液相色谱仪，在8.1.2参考色谱条件下测定，记录色谱图（见附录A图A.1），以泰地罗新及泰地罗新异构体峰面积之和计算，外标法定量。8.2方法二：超高效液相色谱法8.2.1供试品溶液制备精密称取供试品约75mg，置50mL棕色量瓶中，加乙腈（5.1）溶解并稀释至刻度，摇匀，滤膜过滤。8.2.2参考色谱条件a)色谱柱：C18，2.1mm×100mm，1.7µm或等效的色谱柱；b)流速：0.5mL/min；c)检测波长：289nm；d)柱温：室温；e)进样量：1µL；f)流动相：流动相D（5.7）。8.2.3测定8.2.3.1定性以保留时间定性，供试品溶液（8.2.1）泰地罗新色谱峰的保留时间与相应对照品溶液（5.10）泰地罗新色谱峰的保留时间一致，相对偏差应在±2.5%。8.2.3.2定量取泰地罗新对照品溶液B（5.10）、供试品溶液（8.2.1）注入超高效液相色谱仪，在8.2.2参考色谱条件下测定，记录色谱图（见附录A图A.2），以泰地罗新及泰地罗新异构体峰面积之和计算，外标法定量。9试验数据处理供试品中泰地罗新含量以质量分数ω计，数值以百分数（%）表示，按式（1）计算：（%）=×100%式中：A样——供试品溶液中泰地罗新及泰地罗新异构体峰面积的和；m对——泰地罗新对照品质量，单位为克（gP——泰地罗新对照品含量，单位为百分数（%）；A对——对照品溶液中泰地罗新及泰地罗新异构体峰面积的和；…(1)4m样——供试品质量，单位为克（g）。测定结果用平行测定结果的算术平均值表示，保留至小数点后1位。10精密度在重复性条件下，两次独立测定结果的绝对差值不得超过其算术平均值的2.0%。5