TSDAA 0081-2024 泰乐菌素组分A含量的测定高效液相色谱法

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由山东省畜牧协会标准化技术委员会提出并归口。本文件起草单位：山东省饲料兽药质量检验中心、山东鲁抗舍里乐药业有限公司、山东久隆恒信药业有限公司、齐鲁晟华制药有限公司、山东鲁抗舍里乐药业有限公司高新区分公司、齐鲁动物保健品有限公司、艾美科健（中国）生物医药有限公司、鲁东大学、山东省蛋鸡技术创新中心、安池（山东）动物营养研究院有限公司。本文件主要起草人：汤文利、郑维波、张兵、王蕾、尹伶灵、李有志、宋祥彬、何受强、马居良、施振宇、周士珂、马春媚、郑慧慧、杨志强、廖玉雪。本文件是首次发布。1泰乐菌素组分A含量的测定本文件规定了泰乐菌素组分A含量的测定方法-高效液相色谱法（HPLC）和超高效液相色本文件适用于泰乐菌素、磷酸泰乐菌素和酒石酸泰乐菌素原料中泰乐菌素组分A含量的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4原理方法一：高效液相色谱法（HPLC）。乙腈水溶液溶解样品，以高氯酸钠溶液-乙腈为流动相，高效液相色谱仪测定，依据保留时间定性，外标法定量。方法二：超高效液相色谱法（UPLC）。乙腈水溶液溶解样品，以高氯酸钠溶液-乙腈为流动相，超高效液相色谱仪测定，依据保留时间定性，外标法定量。5试剂或材料除非另有规定，所用试剂均为分析纯；水符合GB/T6682一级水的规定。5.1乙腈（CH3CN色谱纯。5.21mol/L盐酸溶液：量取盐酸9mL，加水稀释至100mL，混匀。5.3200g/L高氯酸钠溶液：称取高氯酸钠400g，加水1800mL溶解，用1mol/L盐酸溶液（5.2）调pH至2.5±0.1，加水稀释至2000mL。5.4乙腈水溶液：乙腈（5.1）+水=1+1（V1+V2），混匀。5.5泰乐菌素组分A对照品：纯度≥90.0％。5.6系统适用性溶液：精密称取泰乐菌素组分A对照品（5.5）约25mg，置50mL量瓶中，加乙腈水溶液（5.4）溶解，定容至刻度，摇匀。25.7泰乐菌素组分A对照品溶液：精密称取泰乐菌素组分A对照品（5.5）约25mg，置50mL量瓶中，加乙腈水溶液（5.4）溶解，定容至刻度，摇匀。现用现配。6仪器设备6.1高效液相色谱仪：配二极管阵列检测器或紫外检测器。6.2超高效液相色谱仪：配二极管阵列检测器或紫外检测器。6.3分析天平：精度0.0001g、0.00001g。6.4滤膜：有机，0.22µm。7样品取样品100g,混匀，装入密闭容器中，备用。8试验步骤8.1供试品溶液制备精密称取供试品约25mg，置50mL量瓶中，加乙腈水溶液（5.4）溶解并稀释至刻度，摇匀，滤膜过滤，作为供试品溶液。8.2方法一：高效液相色谱参考条件色谱柱：C18，250mm×4.6mm×5µm，或性能相当者；流速：1.0mL/min；检测波长：290nm；柱温：室温；进样量：10µL；流动相：量取200g/L高氯酸钠溶液（5.3）1800mL，加乙腈（5.1）1200mL，混匀，滤膜过滤，超声5min。8.3方法二：超高效液相色谱参考条件色谱柱：C18，100mm×2.1mm×1.7µm，或性能相当者；流速：0.3mL/min；检测波长：290nm；柱温：室温；进样量：0.8µL；流动相：量取200g/L高氯酸钠溶液（5.3）1800mL，加乙腈（5.1）1200mL，混匀，滤膜过滤，超声5min。8.4测定8.4.1定性3以保留时间定性，供试品溶液泰乐菌素组分A色谱峰的保留时间与相应对照品溶液泰乐菌素组分A色谱峰的保留时间一致，相对偏差应在±2.5%。8.4.2定量方法一：取乙腈水溶液（5.4）、系统适用性溶液（5.6）、对照品溶液（5.7）、供试品溶液（8.1分别注入高效液相色谱仪（6.1在8.2色谱条件下测定，记录色谱图（见附录A图A.1），外标法定量。方法二：取乙腈水溶液（5.4）、系统适用性溶液（5.6）、对照品溶液（5.7）、供试品溶液（8.1），分别注入超高效液相色谱仪（6.2），在8.3色谱条件下测定，记录色谱图（见附录A图A.2），外标法定量。9试验数据处理供试品溶液中泰乐菌素组分A含量以质量分数ω计，数值以百分数（%）表示，按式（1）计算：（%）=×100%…………(1)式中：A样——供试品溶液中泰乐菌素组分A的峰面积；m对——泰乐菌素组分A对照品质量，单位为克（gP——泰乐菌素组分A对照品含量，单位为百分数（%A对——对照品溶液中泰乐菌素组分A的峰面积；m样——供试品质量，单位为克（g）。测定结果用平行测定结果的算术平均值表示，保留至小数点后1位。10